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1、.高效液相色谱基线的各种问题 L、基线漂移原因 解决方法 1、柱温波动。即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进展脱气，使用中使用氦气。 3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。不要用盐酸 4、检测器出口阻塞。高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换
2、流通池窗。 5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为防止这个问题可定期检查流动相组成及流速。 6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进展冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进展冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 8、样品中有强保存的物质高K值以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。 9、使用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学围发生变化时，使用新的流动相。 10、检测
3、器没有设定在最大吸收波长处。10、将波长调整至最大吸收波长处 M、基线噪音规则的原因 解决方法 1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。 2、漏液 图 2、见第三局部。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。 3、流动相混合不完全 3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 4、温度影响柱温过高，检测器未加热4、减少差异或加上热交换器 5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。 6、泵振动 6、在系统中参加脉冲阻尼器 N、基线噪音不规则的原因 解决方法 1、漏
4、液 图 1、见第三局部。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。 2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。 3、流动相各溶剂不相溶 3、选择互溶的流动相 4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。 5、系统有气泡 5、用强极性溶液清洗系统 6、检测器有气泡 6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器 7、流通池污染即使是极少的污染物也会产生噪音。7、用1N的硝酸不能用磷酸清洗流通池 8、检测器灯能量缺乏 8、更换灯 9、色谱柱填料流失或阻塞 9、更换色谱柱 10、流动相混合不均匀或混
5、合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置 O、宽峰原因 解决方法 1、流动相组成变化 1、重新制备新的流动相 2、流动相流速太低 2、调节流速 3、漏液特别是在柱子和检测器之间3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。 4、检测器设定不正确 4、调整设定 5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反响时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路径太大d、记录仪响应时间太长5、 a、 小体积进样例如：10ul而不是100ul以1：10或1：100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小
6、的流通池c、 使用径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间 6、缓冲液浓度太低 6、增加浓度 7、保护柱污染或失效 7、更换保护柱 8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。 9、柱入口塌陷 9、翻开柱入口，填补塌陷或更换柱子 10、呈现两个或多个未被完全别离的物质的峰10、选择其它类型的色谱柱以改善别离效果 11、柱温过低 11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75 12、检测器时间常数太大 12、使用较小的时间常数 P、别离度降低原因 解决方法 1、流动相污染或变质引起保存时间变化1、重新配置流动相 2、保护柱或分析柱阻塞图 2、去掉保护柱
7、进展分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进展反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保存的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。 Q、所有的峰面积都太小原因 解决方法 1、检测器衰减设定过高 1、减少衰减的设定 2、检测器时间常数设定太大2、设定较小的时间常数 3、进样量太少 3、增大进样量 4、记录仪连接不当 4、使用正确的连接 R、所有的峰面积都太大原因 解决方法 1、检测器衰减设定过低 1、采取较大的衰减 2、进样过多 2、减少进样量 3、记录仪连接不正确 3、正确连接记录仪 HPLC日常维护方法之四：进样阀的问题 以下
8、问题在使用进样阀过程中有可能发生。A、手动进样阀，转动不灵原因 解决方法 1、转子密封损坏 1、更换或调整转子密封 2、转子太紧 2、调整转子的松紧度 B、手动进样阀，载样困难原因 解决方法 1、进样阀安装不当 1、重新安装 2、定量环阻塞 2、清洗或更换定量环 3、进样器污染 3、清洗或更换进样器 4、管路阻塞 4、清洗或更换管路 C、自动进样阀，不能转动原因 解决方法 1、无压力或电源 1、提供恰当的压力电源 2、转子太紧 2、调整转子的松紧度 3、进样阀安装不当 3、重新安装 D、自动进样阀，其它问题原因 解决方法 1、阻塞 1、清洗或更换阻塞部件 2、机械故障 2、见随机维修手册 3、
9、控制器故障 3、维修或更换控制器液相色谱基线有很多的毛刺，但总体上还是水平的，问这是什么原因导致的？悬赏分：5 - 解决时间：2006-7-20 21:14 液相色谱基线有很多的毛刺，但总体上还是水平的，问这是什么原因导致的？ 问题补充：我所用的是液相色谱，配紫外检测器，色谱柱是新的，仪器也没有振动。毛刺是因信号频率的波动而引起，是比色谱峰的有效值频率更高的基线扰动。毛刺的存在并不影响色谱峰的分辨，但对检测限有一定影响。规则的毛刺还算是正常,你把基线放宽,就相当于灵敏度变高。先给仪器充分的稳定时间再看看。如果真的是色谱系统出了问题，一般是这几个方面的不管是气相还是液相都有用：1.氢气，空气，载
10、气纯度不高会影响。2.玻璃衬管是否脏3.色谱柱是否脏，处理一下或换一个新的试一试4.检测器清洗一下，可能有未燃烧完的杂质5.是否漏气6.进样口是否该换一个垫子7.仪器是否产生较大振动8.信号接收器是否已怀或者接触不良甚至还有过因为工作站出问题导致的毛刺小弟初次使用液相色谱，基线波动非常厉害怎么回事小弟科室一台电化学液相色谱闲置两年没人用过，今天小弟初次使用时调节流速为0.5 mLmin 工作电压设为+ 700 mV ,滤波0。1 Hz ,增益5nA发现基线抖得很厉害，很有规律，就是每当泵笃一声时就出现一个波峰，大概0.8nA高，也不出现基线向上向下漂移，很影响测量，请问是怎么回事， / / /
11、 _/ _/ _/ _可能是色谱柱进了气泡，又或者色谱柱还未被流动相跑平衡 如果是柱子进气泡的话，会出现一组很有规律的峰其实基线的波动是难免的，只要波动在允许的围之的话，就不会影响测量你问题说的很详细，但是你还是没说：你的柱子有没有恒温箱。首先我疑心柱温波动。即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 解决方法：控制好柱子和流动相的温度。其次，我疑心是流动相，流动相有气泡。流动相条件变化引起的基线波动大于温度导致的波动。解决方法：使用HPLC级的溶剂流动相在使用前进展脱气，有条件可以在线脱气。如果你的泵压也波动的话，检查系
12、统是否漏液，如果不漏液，就根本上是确定是有气泡了。其他原 因 解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气 1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液图 2、检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全 3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响柱温过高，检测器未加热 4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备 5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动 6、在系统中参加脉冲阻尼器二最近在论坛里发现很多虫友在HPLC试验中经常受到基线波动或基线漂移的困扰，下面就我本人
13、在实验中积累的或从别处了解到的一些经历总结如下，欢送大家指正。 1.液相系统没有平衡好，柱子里的流动相一直在变化，在检测器里面的吸收就会一直变化，导致基线波动的发生；梯度时如果其实比例的流动相平衡时间过短也会造成基线波动； 2.实验室环境不稳定比方温度忽高忽低，气流不断变化等，这对于没有柱温箱或只有单向温度变化的HPLC仪器的影响尤其明显；即使有比拟好的柱温箱时，也要注意别让空调的出风口一直对照仪器吹，那样基线也可能会波动；此外实验室有电磁干扰时，也有可能会导致此问题的发生； 3.检测器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此时需要清洗流通池； 4.检测器灯能量缺乏时，吸收会变得不稳定，这时基线一
14、般也不稳定，特别是在低波长处尤为明显； 5.当使用低波长检测时，有时流动相会使用两相或以上的等度，这时混合器的很小的混合比例的误差都会被放大，很有可能会使基线发生波动，这时将流动相按比例混合到一个通道里时，一般都会使情况改善很多； 6.流动相里的有机相的截止波长最好要大于检测波长20nm以上，这一点切记，比方甲醇的截止波长是210nm，乙腈是190nm。当使用230nm以下的检测波长时，如果条件允许，最好使用乙腈，可以防止基线波动，其余类推； 7.仪器出现问题也会造成基线波动，比方(1)流动相过滤头堵塞、入口主动阀滤芯污染、单向阀被污染物堵塞、泵头有气泡、比例阀出故障、系统流路漏液，比方管路裂
15、开、peek接头没完全连上色谱柱而导致的泄露等； 8.没有脱气机的仪器，当流动相未脱气或脱气未彻底时，基线也会波动；有脱气机的每次使用前都要检查一下是否正常工作； 9.当大家使用梯度作为组分洗脱方式的时候，有条件的最好使用超纯水，磷酸盐、三乙胺等固体液体参加试剂也最好使用HPLC级别的，因为在梯度中随着有机相洗脱力较强的不断增加，流动相系统里的杂质会在基线上反映出来，导致出现鬼峰或基线波动； 10.流动相中的有机相和缓冲液的比例一定要注意调配好，缓冲液的比例不能过大，要不然会出现缓冲盐在柱子里析出的情况，这样不但会造成基线波动的发生，甚至会造成色谱柱毁坏； 11.当色谱柱被污染时，也会造成基线
16、波动，这里尤其要注意的是大家在做合成中控实验的时候，最好不要用合成的原始反响液直接进样，因为原液里面有很多非极性或极性很小的化合物，一旦进入到反相色谱柱里和非极性的C18发生相互作用，很可能就洗脱不下来使色谱柱变性或者慢慢的被洗脱下来，造成以后的分析出现不稳定的鬼峰或者基线波动； 12.一些比拟老的液相仪对电压要求很高，电压有点起伏检测器就会反映教明显，比方老的惠普和岛津等仪器，这时需要配一个稳压电源来解决此问题；此外仪器和电脑之间连接的数据线出问题或老化也可能会使基线波动。当然上面说了这么多的原因，个人认为还不是很全面，有些没考虑到得地方还请大家不吝补充，以致共同进步，！三高效液相色谱仪HPLC现已成为有机化学分析的重要手段之一。同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC 也已成为不可或缺的分析仪器。和其它分析仪器一样，你假设想
