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1、磁珠法土壤基因组 DNA提取试剂盒MagBeads Soil DNA Extraction Kit目 录号】SMDE-5005、SMDE-5010【运输条件】225 C;【保存条件】 磁珠分散液28 C;蛋白酶K -20 C;其它组分室温保存；【试剂盒组成】Kit Comp onent 试剂盒组成SMDE-5005 (50T)SMDE-5010 (100T) SMDE-Buffer 1裂解液150mL100mL SMDE-Buffer 2裂解液220mL40mL Protei nase K蛋白酶K1mL2.0mL SMDE Mag netic Beads 磁珠悬浮液2.5mL5mL Wash
2、Buffer清洗液30mL60mL Dealcohol Buffer除醇液30mL60mL Elute Buffer洗脱液5mL10mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2. 使用前请检查裂解液1和裂解液2是否出现沉淀，如有沉淀请将试剂瓶置于65 C水浴中温热至液体澄清；3. 蛋白酶K长期不使用，请置于-20 C保存，融化后4C保存，并尽快使用；【产品简介】本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤中提取基因组DNA。试剂盒采用独特的缓冲液体系，在裂解液环境中基因组 DNA与磁珠高效结合，经过清洗和洗脱等步骤之后，可去除土壤中的杂质与腐植酸，获得高
3、质量基因组DNA产物，OD260/OD280比值一般在1.71.9之间,可直接用于酶切、PCR、电泳、Southern Blot、分子标记等下游分子生物学实验。【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围土壤100500 yg5 15 yg【自备仪器、耗材和试剂】手动普通版：涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、EP管（2.0mL ）、EP管配套用磁力架、异丙醇、无水乙醇、RNase A 溶液（100mg/mL，分散液：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH 值 8.0 ）。手动高通量版：涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、48孔尖底板、48孔板配套专用磁力架、超强磁板架48孔板专用硅胶盖、异丙醇、无
4、水乙醇、RNase A溶液（100mg/mL，分散液：10mMTris-HCl、1mM EDTA、pH 值 8.0 ）。【手动普通版】本操作方法在2.0mL EP管中进行操作。1. 释放土壤微生物称取100500mg 土壤样本至2.0mL EP管中，依次加入1.0mL裂解液1和20卩蛋白酶K，涡旋振荡13min，将土壤样本分散均匀，58 C温浴10min，期间每隔5min颠倒3次混匀内容物。注：1）如需去除RNA，请额外加入5 RNase A溶液；2）干燥的土壤样本请研磨至均一细小颗粒，有助于微生物的高效释放。2. 获得土壤基因组DNA粗液室温、12000rpm将EP管离心5min，然后转移全
5、部上清液至新的 2.0mL EP管中。加入400卩裂解液2,颠倒混匀，再次室温、12000rpm将EP管离心5min。3. 核酸结合转移全部上清液至另一只2.0mLEP管，依次加入400卩屏丙醇和50卩磁珠悬浮液（提前 摇晃 均匀），涡旋振荡5min。4. 磁性分离将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有残留磁珠，可保持 EP管在磁力架上，上下颠倒 23 次，磁珠可完全被磁力架吸附。保持 EP 管于磁力架上，吸弃上清 液， 期间避免接触磁珠。5. 清洗1） 向 EP 管中加入 600 卩清洗液，将 EP 管从磁力架上取下，剧烈摇动使磁珠充分分散， 涡 旋震荡 2min ，
6、磁性分离（参照 步骤 4 操作）；2）使用600U80%乙醇，参照上一步操作 2次。6. 除醇将除尽上清液后的 EP 管保持在磁力架上，加入 600 卩除醇液，快速手摇润洗吸附的磁珠 表 面，之后快速弃去除醇液。注：该步骤操作时间不宜过长，且不可吹散磁珠，否则影响核酸得量。7. 洗脱：向 EP 管中加入 100 洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将 EP 管置于 58 C 环 境 中加热洗脱10min，期间每隔3min涡旋振荡30s。注：洗脱液要求25卩，100200八L效果较好，洗脱液体积较少时会影响核酸得率。8. 核酸转移将 EP 管放置于磁力架上静置 30s 至磁珠吸附完全，用移
7、液枪将洗脱液转移至另一干净 EP 管 中，提取过程完毕，此时可以弃去磁珠。【手动高通量版】该方法配套 48 孔尖底板、超强磁板架，以及英芮诚 48 孔板专用磁力架进行操作，可同步 完 成 48 个样本的提取工作。1 释放土壤微生物称取100500mg 土壤样本至2.0mL EP管中，依次加入1mL裂解液1和20卩蛋白酶K，涡 旋振荡 13min 将土壤样本分散均匀， 58 C 温浴 10min ，期间每隔 5min 颠倒 3 次混匀内容物。注： 1）如需去除 RNA ，请额外加入 5 RNase A 溶液； 2）干燥的土壤样本请研磨至细小均一，有助于微生物的高效释放。2 获得土壤基因组 DNA
8、 粗液室温、12000rpm将EP管离心5min，然后转移全部上清液至新的 2.0mL EP管中。加入400 卩裂解液 2，颠倒混匀，再次室温、 12000rpm 将 EP 管离心 5min。3 核酸结合转移全部上清液至 48 孔板对应样品孔，并做好位置记录。向样品孔中加入 400 卩异丙醇和 50卩磁珠悬浮液（提前摇晃均匀），盖上 48 孔板专用硅胶盖，将 48 孔板置于涡旋混合仪上1200rpm振荡5min，使磁珠与核酸充分结合。4磁性分离将 48 孔板置于超强磁板架上约 1020s ，磁珠快速吸附到 48 孔板底部；将 48 孔板转移至专 用磁力架，轻微小范围四周移动至磁珠完全集中于底部
9、孔尖端；保持 48 孔板固定于磁力架上， 直 接倒扣弃去上清液，保持倒扣状置于吸水纸（提前铺好）上吸尽上清液（ 操作方式下同 ）。 5清洗1） 向48孔板中分别加入600 uL青洗液，1200rpm涡旋振荡1min，确保磁珠充分分散。磁 性分离弃上清液（参照 步骤 4 操作）；2）使用 600 uL80% 乙醇，参照上一步操作 2 次。6除醇将除尽上清液的 48 孔板固定于磁力架上，加入 600 uL 除醇液，快速手摇润洗吸附的磁珠 表 面，之后快速倒扣 48 孔板弃上清液，继续呈倒扣状置于吸水纸上吸尽上清液。注：该步骤操作时间不宜过长，且不可震散磁珠，否则影响核酸得量。7洗脱向 48 孔板孔
10、位中分别加入 100 uL 洗脱液，盖上硅胶盖，涡旋振荡 30s 使磁珠与洗脱液充分 混 匀。将48孔板置于58 C水浴中加热洗脱10min，期间每隔3min涡旋振荡30秒，确保磁珠与 核酸 洗脱完全。注：洗脱液要求25 uL，100200八L效果较好，洗脱液体积较少时会影响核酸得率。8核酸转移将 48 孔板置于磁力架上，静置 30s 至磁珠完全吸附于 48 孔板底部尖端，将 48 孔板固定于磁 力架上，倾斜 45轻磕3-4 次，使洗脱液集中于 48 孔板尖端一侧（完全与磁珠分离）；保持 45 倾斜同时用移液枪将洗脱液转移至干净的 EP 管中，做好标记，提取过程完毕，此时可弃去磁 珠。* 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其它用途。 版权声明： ? 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指 南的所有权利。版本： V201702.221
