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1、生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文 AtNHX1基因的分离与耐盐性验证关键词：盐碱土壤 作物盐害 抗性育种 基因改造摘要：盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。甜土植物中缺乏主效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNH
2、X1基因的耐盐功能，为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物，以拟南芥cDNA为模板，通过PCR克隆方法，分离到了AtNHX1基因，并构建了植物表达载体pBI121*AtNHX1。 优化了以烟草SR1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系分化培养基组成MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA，叶片预培养2d，利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*AtNHX1)浸泡叶片8min，共培养
3、2d，置于MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽，抗性芽经过生根培养基生根，移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR1，获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到烟草核基因组并表达。 转AtNHX1基因烟草耐盐性明显增强，可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻，创造寒区耐盐转基因水稻材料。正文内容 盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生
4、命科学研究热点。甜土植物中缺乏主效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNHX1基因的耐盐功能，为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物，以拟南芥cDNA为模板，通过PCR克隆方法，分离到了A
5、tNHX1基因，并构建了植物表达载体pBI121*AtNHX1。 优化了以烟草SR1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系分化培养基组成MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA，叶片预培养2d，利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*AtNHX1)浸泡叶片8min，共培养2d，置于MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽，抗性芽经过生根培养基生根，移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR1，获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到
6、烟草核基因组并表达。 转AtNHX1基因烟草耐盐性明显增强，可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻，创造寒区耐盐转基因水稻材料。盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。甜土植物中缺乏主效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNHX1基
7、因的耐盐功能，为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物，以拟南芥cDNA为模板，通过PCR克隆方法，分离到了AtNHX1基因，并构建了植物表达载体pBI121*AtNHX1。 优化了以烟草SR1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系分化培养基组成MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA，叶片预培养2d，利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*AtNHX1)浸泡叶片8min，共培养2d，
8、置于MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽，抗性芽经过生根培养基生根，移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR1，获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到烟草核基因组并表达。 转AtNHX1基因烟草耐盐性明显增强，可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻，创造寒区耐盐转基因水稻材料。盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。
9、甜土植物中缺乏主效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNHX1基因的耐盐功能，为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物，以拟南芥cDNA为模板，通过PCR克隆方法，分离到了AtNHX1基因，
10、并构建了植物表达载体pBI121*AtNHX1。 优化了以烟草SR1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系分化培养基组成MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA，叶片预培养2d，利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*AtNHX1)浸泡叶片8min，共培养2d，置于MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽，抗性芽经过生根培养基生根，移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR1，获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到烟草核基因组并表
11、达。 转AtNHX1基因烟草耐盐性明显增强，可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻，创造寒区耐盐转基因水稻材料。盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。甜土植物中缺乏主效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNHX1基因的耐盐功能，为
12、培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物，以拟南芥cDNA为模板，通过PCR克隆方法，分离到了AtNHX1基因，并构建了植物表达载体pBI121*AtNHX1。 优化了以烟草SR1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系分化培养基组成MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA，叶片预培养2d，利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*AtNHX1)浸泡叶片8min，共培养2d，置于MS+2.0
13、mg/L6BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽，抗性芽经过生根培养基生根，移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR1，获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到烟草核基因组并表达。 转AtNHX1基因烟草耐盐性明显增强，可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻，创造寒区耐盐转基因水稻材料。盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。甜土植物中缺乏主
14、效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNHX1基因的耐盐功能，为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)碱基序列设计PCR引物，以拟南芥cDNA为模板，通过PCR克隆方法，分离到了AtNHX1基因，并构建了植物表达
15、载体pBI121*AtNHX1。 优化了以烟草SR1为受体的农杆菌介导外源基因遗传转化体系分化培养基组成MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA，叶片预培养2d，利用菌液浓度OD600值0.6的EHA105(pBI121*AtNHX1)浸泡叶片8min，共培养2d，置于MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培养基上筛选抗性芽，抗性芽经过生根培养基生根，移植到土壤。利用优化的转化体系将AtNHX1基因导入烟草SR1，获得了来自于独立抗性芽的57株转化烟草。分子检测证明AtNHX1基因已经整合到烟草核基因组并表达。 转AtNH
16、X1基因烟草耐盐性明显增强，可以尝试在基因改造后转化黑龙江水稻，创造寒区耐盐转基因水稻材料。盐害是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一，陆地表面具有丰富的盐碱土和次生盐碱土。利用大面积的盐碱地资源发展农业生产，是人类迫切需要解决的问题，培育耐盐作物品种是生命科学研究热点。甜土植物中缺乏主效耐盐基因，人们寄希望于通过基因工程育种手段培育耐盐作物品种。本研究利用RT-PCR的方法从拟南芥中克隆具有耐盐主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向运输蛋白基因，构建AtNHX1基因的双子叶植物表达载体，并通过农杆菌介导法将AtNHX1基因导入模式植物烟草，验证AtNHX1基因的耐盐功能，为培育黑龙江转基因耐盐水稻品种准备基因资源。本研究主要结论如下： 根据Gaxiola等(1999)发表的拟南芥AtNHX1基因(Gene Bank acc
