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1、 海 南 大 学毕 业 论 文（设计）题 目：散尾葵叶枯病病原鉴定及其生物学特性 学 号：B0711019 姓 名： 李龙年 级：07制药工程（农药方向） 学 院： 环境与植物保护学院系 别：制药工程系 专 业： 制药工程（农药方向） 指导教师： X荣意 教授 完成日期：2010年 11 月 5 日 摘要散尾葵（ChrysalidocarpuslutescensH.Wendl）叶枯病是散尾葵上的一种重要病害，该病严重影响了散尾葵的生长发育及其观赏价值。目前，国内对该病的防治报道较多，但还未查到对其病原物相关研究的报道，为了进一步做好防治工作，本文对该病害病原的鉴定及生物学特性进行了基础性研究。
2、散尾葵叶枯病病原主要危害散尾葵叶部，尤其是幼嫩叶尖，轻者使整片叶片干枯，重者会导致植株整株死亡。通过试验及相关资料显示，该病原菌为真菌门半知菌类，丝孢纲，丛梗孢目，丛梗孢科，帚梗柱孢属，帚梗柱枝菌（Cylindrocladium quinqueseptatu Figueredo）。该属真菌常引起植物焦枯病害（如桉树焦枯病Eucaly puts dicback）和根、茎腐败病（如水稻叶鞘腐败病Rice sheath rot）等，对种植农业、园艺行业等有较大影响。关键词：散尾葵；叶枯病；鉴定；生物学特性AbstractChrysalidocarpus lutescens （Chrysalidoca
3、rpuslutescensH.Wendl）leaf blight is an important disease on the Chrysalidocarpus lutescens, Chrysalidocarpus lutescens the disease has seriously affected the growth and development and ornamental value. At present, there is no report on the prevention and treatment of disease, but has not yet found
4、its coverage of pathogen research, in order to further improve relevant prevention and control work, this pathogen in the disease and the biological characteristics of the basic research .Chrysalidocarpus lutescens leaf blight pathogen primarily affecting San Chrysalidocarpus lutescens leaves, espec
5、ially the young tip,the light so that the entire piece dry leaves, weight of whole plant could cause death. By testing and related information, the pathogen fungus isFungiImperfect, Hyphomycetes, Moniliales, moniliaceae, Cylindrocladium，Cylindrocladium quinqueseptatu Figueredo. The fungi cause plant
6、 scorch diseases and more (such as Eucaly puts dicback) and the root and stem rot disease (such as Rice sheath rot) and so on for agricultural, horticultural industries have a greater impact. Keywords Chrysalidocarpus lutescens； leaf blight；Identification； Biological characteristics；目 录1 材料与方法41.1 材
7、料来源 41.2 病原菌的分离及菌种的纯化 41.3 分离菌株致病性测定 51.4 生物学特性测定 51.4.1 不同温度对菌丝生长的影响 51.4.2 不同光照对菌丝生长的影响 51.4.3 不同pH值对病原菌菌丝生长的影响 51.4.4 不同碳源对病原菌菌丝生长的影响 61.4.5 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响 61.4.6 病原菌菌丝致死温度测定 61.4.7 病原菌产孢诱导及病原菌鉴定 62 结果与分析 72.1 症状描述 72.2 病原菌致病性测定 82.3 不同温度对菌丝生长的影响 92.4 不同光照对菌丝生长影响 102.5 不同pH值对病原菌菌丝生长的影响 102.6 不同碳
8、源对病原菌菌丝生长的影响 112.7 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响 122.8 病原菌菌丝致死温度测定 142.9病原菌产孢诱导及病原菌鉴定 143 结论与讨论 15致谢17参考文献 18散尾葵叶枯病病原菌鉴定及其生物学特性散尾葵（ChrysalidocarpuslutescensH.Wendl），又名黄椰子，为丛生常绿灌木或小乔木，棕榈科 Palmaceae，散尾葵属 Chrysalidocarpus H. Wendl.植物1。散尾葵原产非洲的马达加斯加岛，世界各热带地区多有栽培，我国引种栽培广泛，常栽种于草地、树荫、宅旁，也用于盆栽，是布置客厅、餐厅、会议室、家庭居室、书房、卧室或阳台的
9、高档盆栽观叶植物。散尾葵易发生叶枯病、根腐病和介壳虫类危害等，尤以叶枯病为害较重。散尾葵叶枯病是一种常见病害，其植株发病率高达36%，其中病株单株叶片发病率平均约为23%，对散尾葵生长影响很大，轻者使叶片干枯，重者会导致植株整株死亡。病菌最先侵染叶尖和叶缘，发病初期染病处呈褐色斑点或条块状斑块，中期斑点或斑块逐渐扩大并相互连接，后期叶片呈现灰白状干枯，严重影响到了散尾葵的观赏性2。为了更深入地了解该病害病原菌及其病害特点，笔者对该病害病原进行了鉴定及其生物学特性的测定。1 材料与方法1.1 材料来源散尾葵病叶于2009年10月采自某两院。1.2 病原菌的分离及菌种的纯化采用常规组织分离法34分
10、离病原菌。采集田间自然发病典型的散尾葵叶片，剪取病健交界处组织，大小约为5mm5mm；用70%乙醇消毒10s，0.1%HgCl2(g/V)表面消毒30s；灭菌水冲洗34次，无菌操作接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）5上，培养34d。在平板上标记上面PDA长出的不同类型的菌落，编号1号、2号，无菌操作分别将1号、2号菌种接种到PDA平板上，培养45d。采用单菌丝分离纯化（由于未观察到孢子，所以选择使用菌丝段纯化）4，用分别用灭菌水将1号、2号菌株配置成菌丝悬浮液（注意打散菌丝，使菌丝成为单个菌丝段，不互相缠绕），用接种环取1环菌丝悬浮液与10mL已融化的PDA培养基（约40）充分混合，倒入灭
11、菌的培养皿中，置于28恒温培养箱中培养。2d后，从培养皿中挑取单个分散的菌落移植到PDA培养基上进行纯化培养，然后转入PDA试管斜面保存5。1.3分离菌株致病性测定根据柯赫氏法则6进行寄主活体接种测定。在田间选取健康的散尾葵叶片18片，用无菌水清洗叶片表面，在每其中9片叶面用消毒过的针轻轻刺伤叶片表皮，将纯培养在PDA上的1号、2号菌打菌饼（菌饼大小约为3mm）然后接种到叶片的伤口处，以无菌的PDA培养基块做对照并进行分组为A（1号）、B（2号）、C（CK），每组三个重复，剩余9片叶片按上述方法进行无伤接种处理（不刺伤叶片表皮），分别依次编号为D（1号）、E（2号）、F(CK)，保温保湿，5d
12、后观察。如果该病原菌能使散尾葵发病，并与田间自然发病症状相比较，若存在相同症状则将长出的病斑采用1.2所述方法分离得到病原菌，并将两次获得的病原菌作比较，判断两次提取的病原菌是否相同，以确定该菌为致病菌。1.4生物学特性测定1.4.1不同温度对菌丝生长的影响在无菌操作条件下，将直径5mm菌龄相同的菌饼移到PDA培养基平板中央，分别置于15、20、25、28、30和37的恒温培养箱中培养，观察菌丝生长情况，每天测量菌落直径，比较在不同温度下菌丝生长速率。5d后用十字交叉法测量菌落直径。每处理三个重复。1.4.2不同光照对菌丝生长的影响将直径为5mm的菌龄相同（培养4d）的菌饼接种到PDA培养基平
13、板中央，分别置于24h完全光照，12小时光照和黑暗交替，24小时完全黑暗3中环境中，在28恒温培养箱中培养，6d后测量菌落直径。每处理三个重复。1.4.3不同pH值对菌丝生长的影响制作PDA培养基，用0.1mol/L的HCl和NaOH将其pH值分别调节到4、5、6、7、8、9、10这7个梯度，湿热灭菌（121,20min），再用无菌的0.1mol/L的HCl和NaOH重新调节pH值后倒入已灭菌的培养皿中制成平板7；用直径为5mm的打孔器，取菌落边缘的菌饼（在PDA平板上培养4d），接种到不同pH值的培养基平板中央，置于28恒温培养箱中培养，6d后观察菌落状况。每处理值三个重复。1.4.4不同碳
14、源对菌丝生长的影响使用Czapek固体培养基8为基础培养基：MgSO47H2O 0.5g, KH2PO4 1g，KCl 0.5g，FeSO47H2O 0.01g，NaNO32g(纯氮约0.3294g)，琼脂20g，蒸馏水定容至1000mL。另外，分别以等当量的葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、D-果糖、D-甘露糖、D-木糖作为碳源（以20g葡萄糖含碳量为标准），配置成不同碳源7的培养基，湿热灭菌（121，20min），然后制成平板，在平板中央接入直径为5mm菌龄相同的菌饼；置于28恒温培养箱中培养，5d后观察菌落状况。每处理三个重复。1.4.5不同氮源对菌丝生长的影响使用Czapek固体培养基为基础培养基：MgSO47H2O0.5g, KH2PO41g，KCl
