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1、食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认 识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后， 其中的微生物充分分散为 单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长 繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细 胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌 落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了 清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形
2、成单位 （colony-forming units， cfu） 而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测 定结果易受多种因素的影响， 但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌 的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或 污染度的检测三、试剂和材料1. 仪器恒温培养箱：（36 C 士 1 C, 30 C 士 1 C。）均质器或振荡器无菌吸管： 1 ml（ ml 刻度）、 1 0 ml（ ml 刻度）或微量移液器及吸 无菌锥形瓶：容量 250 ml 、500 ml 、无菌培养皿：直径 90 mm菌落计数器2. 样品
3、1 ）平板计数琼脂（plate count agar , PCA培养基：蛋白胨g、酵 母浸膏 g 、葡萄糖 g 、琼 脂 g 、蒸馏水 1 000 ml 、pH 。将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 C 高压灭菌 15 min 。注：用平板计数琼脂，称取 g 于 1 000 ml 蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解， 121 C高压灭菌20min,冷却至4547C左右备用。2 ）无菌生理盐水：氯化钠（NaCI）蒸馏水（纯净水）500ml称取g NaCl溶于500ml蒸馏水中，121 C高压灭菌20min。3. 器材100ml 无菌水、 9ml 无菌水、无菌平皿、天平
4、、称样瓶、记号笔、 酒精灯等。四、操作及实验步骤1. 样品的稀释： 25 g（ml） 样品+225 ml 稀释液,均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次,换用 1 次1 ml 无菌吸管或吸头。（注意 吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）选择 2个3个适宜稀释度的样品匀液， 各取1 ml分别加入无菌培养皿内。吸取1 ml空白稀释液作空白对照。每皿 中加入15 ml20 ml 平板计数琼脂培养基,并转动平皿使其混合均匀。2. 培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 士 1 C培养48 h士 2 h。水产品30 士 1 C培养72 h 士3 h。（如果有弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表 面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 ml ），凝固后翻转平板。）3. 菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming un its,CFU表示。五、计算公式：式中：N样品中菌落数；刀C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和;n1 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d 稀释因子（第一稀释度）。六、实验数据:10-1310-21空白0NaC l 水010-1010-21琼脂0
