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1、红辣椒中辣椒红素的提取、分离及鉴定一、实验目的1、学习从红辣椒中提取辣椒红素的原理和方法。2、掌握萃取、干燥、浓缩、薄层层析、柱层析等基本操作。3、学习色谱分离方法的原理与操作，学习红外光谱鉴定有机化合物的方 法。二、实验原理红辣椒中含有辣椒红素、辣椒玉红素和8-胡萝卜素等几种色泽鲜艳 的色素，其中以辣椒红素为主。这几种物质都是由8个异戊二烯单元组成 的四萜类化合物，难溶于水和乙醇，易溶于石油酷、氯仿和二氯甲烷。最 大吸收波长入max=470nm。在实验室中，常用二氯甲烷作溶剂从红辣椒中 提取辣椒红素。二氯甲烷沸点为。C。用二氯甲烷提取的物质除上述几种物质外还有辣椒素等，可利用辣椒 红色素易于
2、溶于正己烷而辣椒素较难溶于正己烷的性质将两者进行分离。 得到辣椒红素、辣椒玉红素和8-胡萝卜素等的混合物，可通过薄层层析 和柱层析将它们分离。在薄层层析中，有三个斑点，Rf值约为的较大红色 斑点为辣椒素，Rf值稍大的较小红色斑点为辣椒玉红素，Rf值最大的黄色 斑点是8-胡萝卜素。O0L柱层析时，以硅胶为吸附剂，以二氯甲烷为洗脱剂可比较容易得将3 种物质分开。最后，用红外光谱仪做辣椒红素的红外光谱图，并将它与标准谱图比 较，便可证明所得到的主要物质是否为辣椒红素。下图为辣椒红素的标准 红外光谱图。三、仪器、试剂及实验材料1、仪器：50m圆底烧瓶1个、25ml锥形瓶3个、50ml量筒、50ml烧杯
3、2 个、研钵、载玻片、球形冷凝管、层析板、层析缸、层析柱、抽滤瓶、布 氏漏斗、蒸馏装置一套。2、实验材料及试剂：干红辣椒、二氯甲烷、正己烷、硅胶G、硅胶（60200 目）。四、实验步骤1、预处理：称5g干红椒，将干红辣椒去蒂、去籽，研磨成粉末。2、色素提取：装好回流装置。在50ml圆底烧瓶中，加入3g磨细的红辣 椒粉和25ml二氯甲烷，再放2粒沸石，回流30min。冷却至室温后抽滤， 除去固体物，得鲜红色滤液。将滤液用蒸馏法蒸去溶剂，即得粗产品。3、制备层析板：取4块载玻片（X），洗净后用蒸馏水淋洗，再用少量乙 醇淋洗，晾干；在50ml烧杯中加6ml水和3g硅胶G,用玻璃棒搅匀（切勿 剧烈搅拌
4、，以防带入气泡，影响薄板质量）。迅速将调好的匀浆倒在两块 玻璃板上，拿住玻片的两端，前后左右轻轻摇晃，使匀浆均匀铺在玻片上。 将铺好的薄层板水平放置晾干，然后放入烘箱，缓慢升温至110笆，恒温 半小时后取出放在干燥器中备用。4、薄层层析分离：取少量粗产品放入小试管中，加入10滴二氯甲烷溶解， 用毛细管取此溶液在硅胶G板上点样，斑点直径不超过，再将此板放入盛 有二氯甲烷展开剂的层析缸中进行层析。当展开剂达到该板的指定前沿 时，取出层析板，用吹风机吹干或晾干，将该板与红辣椒色素的薄层色谱 图比较，并计算辣椒红素的Rf值。5、柱层析分离：取12g硅胶（60200目）放入小烧杯中，加入适量的二 氯甲烷
5、搅拌均匀后，装填到层析柱中，在装A1cm厚的无水硫酸钠，并使 柱中二氯甲烷液面高于硫酸钠的上表面。打开层析柱活塞，慢慢放出二氯 甲烷，当液面降至硫酸钠上表面时关闭活塞，用长滴管加入已用二氯甲烷 溶解好的粗色素，上样时色带要窄，并避免样品溶液粘附在层析柱的内壁， 上样后用二氯甲烷洗脱。随着洗脱的进行清晰地看到3个谱带，由下至上 依次为8 -胡萝卜素、辣椒玉红素和辣椒红素。分别用3个25ml锥形瓶收 集流出液，其中第三个锥形瓶内为辣椒红素。6、辣椒红素的鉴定：（1）最大吸收波长入max:取上述辣椒红素溶液5滴于一试管中，加入 5ml正已烷，并以正已烷为空白在紫外分光光度计上测其不同波长下的吸 光度，找出其入max。(2)红外光谱：取上述辣椒红素溶液少量，在红外光谱仪上做红外光谱 图，并将谱图与标准辣椒红素红外光谱图作比较。
