荧光显微镜原理和应用

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1、荧光显微镜原理和应用荧光显微镜原理和应用（一）荧光显微镜的原理和结构特点：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统 发出一定波长的光（如紫外光3650入或紫蓝光4200入）作为 激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光 后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬 背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细 胞结构和功能以及化学成分等的研究。url=http:/ /url的基本构造是由url=http:/ 显微镜/url 加上一些附件（如url=http:/ 荧光光源/url、激发滤片、双色束分离器和url=http:/ m阻断滤片/url等）的基础上

2、组成的。荧光光源一一般采用超 高压汞灯（50 200W），它可发出各种波长的光，但每种 url=http:/ m荧光物质/url 都有一个产生最强荧光的url=http:/ 发光波长/url，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫色、 蓝色和url=http:/ 发滤片/url），仅使一定波长的激发光透过url=http:/ 本/url上,而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后， 在极短时间内发射出较照射波长更长的url=http:/ url=http:/ 弱，为能观察到专一的url=http:/ 在物镜后面需加阻断（或压制）滤光片。它的作用有二：一是 吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和

3、损伤眼睛，二 是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种 滤光片必须选择配合使用。url=http:/ url=http:/ .htm透射式荧光显微镜/url:激发光源是通过聚光镜穿过标 本材料来激发荧光的。常用url=http:/ m暗视野集光器/url，也可用普通集光器，调节反光镜使激 发光转射和旁射到标本上这是比较旧式的 url=http:/ 光显微镜/url。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大 倍数增加其荧光减弱所以对观察较大的标本材料较好。2. url=http:/ .htm落射式荧光显微镜/url 这是近代发展起来的新式 url=http:/ C.htm荧光显微镜/u

4、rl,与上不同处是激发光从物镜向下落 射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的 物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角， 激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧 光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入 物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激 发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片/双色束分 离器/阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需 要。此种url=http:/ m荧光显微镜/url的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大 倍数愈大荧光愈强。（二）url=http:/ 光显微镜使用方法/url 1. 打开灯源，超高

5、压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。2. url=http:/ 求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。url=http:/ 射式荧光显微镜/url需在光路的插槽中插入所要求的激发滤 片/双色束分离器/阻断滤片的插块。3 用低倍镜观察，根据不同型号url=http:/荧光显微镜/url的调节装 置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。4放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意：末装滤 光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标 本时，必须用无荧光的特殊油镜；高压汞灯关闭后不能立即 重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响 汞灯寿命。（三）观察在示教台上的url=http:/ %的丫 啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种 不同颜色的荧光（暗绿色和橙红色）。