家兔休克实验自主设计

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1、糖皮质激素及人参皂甙对治疗失血性休克的实验观察08级八年制一大班一小班第1小组，丁家骏、吴炜、项杨威、张赟翔、张嘉惠、王一卉【实验目的】1. 学会家兔失血性休克的造模方法。2. 观察失血性休克各阶段家兔的各项生理指标变化，从而进一步了解休克发生发展的机制及 对机体的影响。3. 观察休克过程中家兔肠系膜微循环变化特点。4. 探讨糖皮质激素氢化可的松对治疗失血性休克发生，以及人参皂甙在急救治疗中疗效观 察。【实验原理】失血可使有效循环血量减少。失血的程度不同，对机体的影响也不同。少量失血可通过机体 的一系列抗损伤措施，使血压不出现明显的降低；当机体快速失血过多、过快时，可超出机体的 抗损伤能力，导

2、致休克的发生。但积极的药物治疗措施和及时的补充循环血量可有效改善血流动 力学变化和增强机体的抗休克能力。休克的淤血缺氧期时微循环血液减慢，毛细血管静水压增高， 加之血管壁通透性增加，水与低分子物质大量漏出血管外，使血液浓缩，血液粘稠度增加，红细 胞聚集趋向性增加。平衡盐溶液可补充血容量和稀释血液，使血流加速，从而改善微循环；同时， 也能纠正酸中毒，有利于微循环改善和心功能的维持。糖皮质激素对细胞器有保护作用，还有利 于增强应激能力，进而提高了抗休克的能力。人参皂甙（什么类型？）可抑制心肌膜的过氧化， 抑制交感肾上腺髓质过度兴奋性，从而改善微循环，增强心肌收缩力，也能达到抗休克的目的。【实验材料

3、】1. 实验对象：家兔；2. 实验试剂：25%乌拉坦溶液，0.9%生理盐水，0.7%肝素，乳酸钠林格液1000ml，氢化 可的松25mg （5ml），10%葡萄糖溶液，人参皂甙注射液10ml。（人参皂甙是什么类型？能否 静脉注射？注射剂量，请在周一下午告诉我，以便购买。）3. 实验仪器：铁架台，电子秤，powerlab生物信号采集系统，i-STAT血气分析仪，微循环 生物信号处理系统，心电图仪器，体温计1支，手术器械一套，兔手术台，50ml、10ml注射器各 1支，5ml、2ml、1ml注射器各2支，及针头8个，血管插管，动脉夹2个，呼吸、血压换能器 各1个，输液装置，棉线若干，纱布。4. 手

4、术步骤和失血性实验前各观察指标的准备工作4.1. 称重与麻醉：家兔称重后，将25%乌拉坦溶液以3ml/kg的体重剂量由兔耳缘静脉内缓 慢注入，注射速度不得大于2ml/min，同时密切观察家兔的肌张力和反射等的变化估计合适的麻 醉剂用量。一般地说，当出现耳朵下垂，角膜反射和夹肢反射明显迟钝或消失，四肢瘫软时，即 可停用麻醉剂。4.2. 固定：先用绳子系4个活扣，分别套在家兔的四肢上，上肢套在腕关节以上，下肢套在 踝关节以上。2个同学，1个抓住两上肢，1个抓住两下肢，把兔子翻过来，使它腹面朝上，将四 肢固定在兔台的金属柱上，最后用粗线绳经兔前牙齿固定在兔台的金属柱上，使家兔的颈部保持 平直，有利于

5、手术操作。4.3 .剪毛：手术部位是颈部和腹部，先将两部位的兔毛剪干净。剪毛的时候，用左手把皮肤 绷紧，右手用粗剪刀贴近皮肤剪毛。4.4. 气管插管：颈部剪毛（8x10cm）区，正中切口，切口长约5-7cm，逐层钝性分离组织， 暴露出气管并在其下穿一根粗结扎线，在甲状软骨下约1cm处的气管上剪一 “出切口，插入Y 形气管插管并结扎固定。气管插管一端通过压力换能器与PowerLab 10T型生物信号处理系统连 接，记录一段正常呼吸曲线。4.5. 分离血管：4.5.1. 双侧颈总动脉分离在气管的背外侧找到左、右侧颈总动脉，它被包在血管神经鞘里，颈总动脉的特点是搏动明 显、粉红色、壁韧，很容易分辨。

6、细心地分离掉周围组织，游离出一段长约34cm的左、右侧颈 动脉，下面分别穿两根线备用。4.5.2 .颈外浅静脉分离颈外浅静脉位于颈部两侧皮下，很容易分辨。它的特点是壁薄，粗大，色暗，没有明显的搏 动。在左侧部位找到颈外浅静脉后，用血管钳夹钝性分离，尽量游离得长一些（长度约34cm）， 下面穿两根细线备用。4.6. 血管插管：4.6.1. 动脉插管：插管的时候三通管要关闭，该动脉导管已充满0.7%肝素溶液，动脉结扎线 提前要湿润一下。在右颈总动脉的近心端夹一动脉夹，然后结扎其远心端（保留此结扎线头），在 动脉夹与结扎之间一般应相距2cm以上。在结扎端的下方用眼科剪作一斜口，向心脏方向插入 动脉插

7、管，用已穿好的丝线扎紧插入管尖嘴部分稍后处（注意此处务必扎紧），并以远心端丝线将 插管缚紧固定，以防插管从插入处滑出。随后，打开三通开关与压力换能器相连接。记录一段正 常血压曲线。用相同的方法在左颈总动脉上插管，完成后用动脉夹夹闭左颈总动脉。其插管与放 血装置相连接，备放血与回输血液之用。4.6.2. 静脉插管：用一丝线将右侧颈外静脉远心端提起，用眼科剪在其下方做一斜口，向心 脏方向插入静脉插管，用已穿好的丝线扎紧插入管尖嘴部分稍后处，并以远心端丝线将插管缚紧 固定，结扎血管同时防插管从插入处滑出，静脉插管成功后立即注射生理盐水进行充管，防止血 液凝固。4.7. 肠系膜微循环变化观察在腹部剑突

8、与耻骨之间的中央，沿腹白线作长约10cm的正中切口，打开腹腔。将曲臂显微 镜移至切口最近处，固定曲臂，并在微循环观察水槽内注入加温的生理盐水。选一段游离度较大 的小肠祥（常在左上腹部易于找见），轻轻将其拉出，放在微循环观察水槽内。打开光源调节钮， 调整光亮度，在4倍物镜下，选择微循环血管丰富，血流情况良好，并能观察清晰的部位后，用 盖板固定肠系膜（注意肠系膜不可被过度牵拉或受压）。微循环观察：选择有代表性的1-3条血管，采用微循环显微镜摄像分析和文字记录微循环血液 的流态。4.8心电图描记操作取针型电极三枚，分别在二前肢和一后肢远端，刺入皮下。把心电图线的外屏蔽线（黑色地 线）接在下肢，另外二

9、根导线分别接在上肢，以红左黑右为序。在微机屏幕上观察到心电图中R 波正立、波幅较高而干扰少，表示操作正确无误。调整测量阈值线，读出心率次数。5. 失血性休克实验的操作与观察步骤5.1. 记录正常呼吸与血压，以及其他生理指标完成以上步骤后，放开血压换能器侧的颈总动脉夹，观察血压曲线，应当有适当的收缩压和 舒张压的差幅波动，如果不明显，应检查导管的畅通性，考察导管有无曲折或导管内有无气泡等 情况。记录一段正常的血压及呼吸（用抓屏方法记录曲线），计数正常的呼吸频率，以及皮肤、 黏膜颜色，心电图记录。5.2. 第一次血气分析打开左侧颈总动脉的动脉夹，弃去最先流出的2、3滴血液后，立即将插管口直接对准电

10、极板 芯片的注血口，注入全血到标准刻度，盖上小盖，插入i-STAT血气分析仪，进行血气分析5.3. 微循环观察：用4倍物镜，观察屏幕上所显示的微循环的状态，选取有微动脉或微静脉存在部位，并有毛细 血管网或直接通路开放的区域，用文字笔记来记录微循环血液的流态，红细胞聚集状态，以及选 择有代表性的13条血管，用文字笔记来描记该血管中血液流速情况，如红细胞聚集状态（休克 代偿期，微循环血液灌流量减少，血液流速减慢，轴流消失，血细胞出现齿轮状运动；休克失代 偿期，血液流速显著减慢，红细胞聚集，微循环淤血；休克难治期，微循环血栓形成，血流停止）。5.4 .放血引起失血性休克及相关治疗5.4.1. 第1次

11、放血（淤血缺氧期复制）与治疗由左侧颈动脉缓慢放血（2ml/min），观察平均动脉压降至原来血压2/3时（休克指数=脉 搏/收缩压1.5 ），停止放血，记录失血量和失血时间。然后，每10min记录动物的体征和各种 指标的变化，并观察微循环的血流变化，以及机体是否出现代偿性变化。当动物皮肤黏膜出现紫绀，微循环出现血流缓慢、淤血，心电图出现R波压低后，立即进行第二次血气分析。当确定动物进入淤血缺氧期后，将放出的血液经颈动脉全部回输入动物体内。输血完成后每 10min记录体征和各种指标变化。当动物呼吸、血压恢复正常后，15min后进行第三次血气分析。5.4.2. 第2次放血后（淤血缺氧期复制）糖皮质激

12、素干预与人参皂甙治疗第2次放血，经左侧颈总动脉放血使血压水平维持在平静时期的2/3（休克指数=脉搏/收缩 压1.5 ）,记录失血量和失血时间，放血完成后于颈静脉内静脉滴注相当于失血量2倍量的平衡 溶液（约55ml），氢化可的松（1.5mg/kg）（约2.25mg）混合溶液，并观察记录动物呼吸、血压、 心率、心电图变化，以及微循环变化、皮肤黏膜变化等生理指标。治疗10min后，在观察记录生理指标后，再从静脉推注入人参皂甙（0.15ml/kg）（约0.22ml） 与10%葡萄糖溶液0.15ml。，随后输入相当于失血量的70%全血（约19ml）。输血完成10min后 测上述各项生理指标。比较动物复苏

13、速度与第一次治疗有何差异。当动物呼吸、血压恢复正常后， 15min后进行第四次血气分析（如果血气检测片有多余，进行第四次测定）。【试验结果纪录】4.1生理指标表1.生理指标1.手术前2.放血1后3.治疗1后4.放血2后5.治疗2后血压体温呼吸频 率心率微循环其他4.2血量与血量变化时间表2.血量与血量变化时间放血1放血2血量血量变化时间4.3血气分析项目第1次第2次第3次pHSBPCOPO,.NaKCl【预期结果】5.1第一次放血并维持低血压10min，交感-肾上腺髓质系统持续强烈兴奋，血容量持续降低， 血压下降，组织器官灌流持续降低，组织持续缺血缺氧，局部代谢产物增多：A：动脉血压下降，脉搏

14、细数，表情淡漠，甚至昏迷B：血液流变学变化，白细胞粘附，微循环淤血C：代谢性酸中毒，血管扩张D：体温下降第一次输血后10min后，由于循环血量的及时补充，血压上升，缺血缺氧改善，以上症状 ABCD四方面均有所改善，但微循环仍可能出现淤血5.2第二次放血后，由于血压仍旧降至原来2/3,休克指数1.5，动物可能出现与第一次放血 相类似的症状。第二次输液先输离子平衡液，可以有效补充细胞外液，维持晶体渗透压，改善微循环，预防 休克向DIC发展；血气分析酸碱平衡不发生严重紊乱：糖皮质激素使动物心率减慢，心脏收缩力 增强，血压可较第一次更快恢复。输液后补充血液可补充胶体渗透压，防止水肿的发生。动物的供氧也

15、可因输血得到恢复，酸 碱平衡更趋于正常5.3治疗休克的主要原则是补充血容量，改善微循环。根据资料报道，补液的原则应遵循，缺 多少，补多少”，失血量2-3倍量的晶体液有助于改善微循环，降低血液粘稠度，但是过多的晶体 液会导致胶体渗透压的降低，组织水肿，所以我们考虑再补充胶体液（采用新鲜血液）维持胶体 渗透压，同时血液的补充也有利于组织获得氧气，从而达到治疗目的。氢化可的松等糖皮质激素 在分子水平上促进iKB-a基因转录使细胞内iKB-a增加，抑制NF-kB的激活，拮抗全身炎症反应 综合症SIRS。在细胞水平上可使淋巴细胞重分布，抑制花生四烯酸代谢产物、补体C3以及IL-1 分泌，对细胞器有保护作用。糖皮质激素还有利于增强应激能力，纠正酸中毒，抑制0内啡肽的 释放，维持心脏功能，上调肾上腺素能受体密度，提高心血管系统对儿茶酚胺敏感性。生脉注 射液主要成分为人参和麦冬，具有益气固脱、养阴津、补心气和复脉作用。现代药理研究表明生 脉液具有B一受体激动剂效应，可抑制细胞膜上Na+-K+-ATP酶活性，从而影响Na+-K+和Na+ -Ca2+交换，使Ca2+内流增多，促使Ca2+收缩蛋白接触浓度