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1、总述1）提取前文献查阅综述和药材生药鉴定2）提取方法 粉碎成粗粉 有机溶剂法和水提法水蒸气蒸馏法升华法3）分离纯化法 根据物质溶解度的不同进行分离a.温度不同，溶解度不同b.改变溶液的极性去杂c酸碱法d.沉淀法 根据物质分配比不同极性分离a. 液液萃取法b. 反流分布法c液滴逆流层析法d.高速逆流层析法e.GC法 f.LC法:LC分配层析载体主要有-硅胶,硅藻土，纤维素等; 有正反相之分;压力有低、中、高之分;载量有分析、制备之 分。 根据物质吸附性不同极性分离a. 极性吸附剂（如SiO2,Al2O3.）极性强，吸附力大非极性吸附剂（如活性炭一对非极性化合物的吸附力强（洗脱时 洗脱力随洗脱剂的
2、极性降低而增大）。b. 化合物的极性大小依化合物的官能团的极性大小而定;溶剂的极性大小可按其介电常数（e）大小排列(极性渐大 ):醇31.2己烷苯无水乙醚CHC13 AcOEt 乙醇甲水e 1.882.294.47 5.206.1126.081.0C氢键力吸附聚酰胺吸附层析洗脱剂的洗脱力由小到大为:水 甲醇 丙酮 NaOH液 甲酰胺 尿素水液 根据物质分子的大小进行分离如葡萄糖凝胶(Sephadex G and LH-20.)过泸法等 根据物质解离程度不同的分离法离子交换法:强酸：-SO3H强碱：-N+(CH3)3Cl-弱酸：-CO2H弱碱:-NH2(NH,N)一、糖及苷类的提取和分离1溶剂处
3、理法2铅盐沉淀法3大孔树脂处理法甲 EtOHEtOH提取物v减压回收EtOH浓缩物I 石油醚提取石油醚部分残留物（多为油脂）Et2O或CHC13提取tEt2O或CHC13残留物提取物（昔元）EtOAc提取EtOAc提取液残留物（含单糖昔或含糖较少的昔）, n-BuOH 提取n-BuOH提取液（含糖较多的昔）4柱色谱分离法二醌类化合物的提取和分离一提取方法:一般选用甲醇或乙醇为溶剂，可同时将游离态和成昔的蒽醌类化合物从药材中提取出来，浓缩后再依次用有机溶剂提取（多用索 氏提取法），可根据极性大小不同进行初步分离（如将昔和昔元分开）。对于多羟基蒽醌或具有羧基的蒽醌（如大黄酸），在植物体 内多以盐的
4、形式存在，难以被有机溶剂溶出，提取前应先酸化使之游离。二分离方法：1蒽酶昔类和游离蒽醌衍生物的分离：用分步提取法（如前述）2游离蒽醌衍生物的分离：可选用分步结晶法、梯度pH莘取法或层 析法进行。梯度pH萃取法是分离游离蒽醌衍生物的经典方法：1. 局限性2. 原理性质相似，酸性差别不大的混合物不适用3有些蒽酮虽然存在酚羟基，但在稀碱溶液中较相应的蒽酶难溶， 如大黄酚蒽酮-9,故蒽醌衍生物的苯提取液用极稀的NaOH液萃取， 可除去蒽醌而使蒽酮留在苯液中。示例色谱法在蒽醌昔元分离中的应用：一般先用经典方法（如梯度pH萃取）对其进行初步分离，再结合柱色谱法或制备性TLC法作进一步的分离，多用硅胶吸附色
5、谱，而氧化铝一般不用，也常用聚酰胺作为柱色谱的填料。三、黄酮类化合物的提取与分离M3（一）提取黄酮甙类以及极性稍大的甙元（如羟基黄酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖甙类可用沸水提取在提取花青素类化合物时，可加入少量酸（0.1%盐酸，应 当慎用，避免发生水解）。大多数黄酮甙元宜用用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极性 溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取。对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有: （一）溶剂萃取法 利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选 用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸 液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、
6、胡萝卜素等脂溶性色素。而 某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等 水溶性杂质。有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统 有：水醋酸乙酯，正丁醇石油醚等。溶剂萃取过程在除去杂质的同时,往往还可以收到分离甙和甙元 或极性甙元与非极性甙元的效果（二）碱提取酸沉淀法黄酮甙类虽有一定极性，可溶于水，但槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。槐却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取 液中加入酸，黄酮甙类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮 甙、黄芩甙的提取都应用了这个方法。 、八 r r I 、| . 、.P、丫、 rm、一、. l米 （槐树
7、Sophora japonica L.花蕾）加约6倍量水，煮沸，在搅拌 下缓缓加入石灰乳至pH89,在此pH条件下微沸2030分钟，趁热 油滤，残渣同上再加4倍水煎1次，乘热抽滤。合并滤液在6070C 下，用浓盐酸调至pH为5,搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，60C干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，7080C干燥得 芦丁纯品。在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免 在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜 过强，以免生成（金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解， 降低产品收率。当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药 材，宜用
8、石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述 含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的 纯化处理。（三）碳粉吸附法主要适于甙类的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性检 查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集吸甙炭末，依次用沸甲醇、 沸水、7%酚冰、15%酚/醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定性检 查（或用PPC鉴定）。通过对Baptisia lecontei中黄酮类化合物的研 究证明，大部分黄酮甙类可用7%酚/水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩 至小体积，再用乙醚振摇除去残留的酚，余下水层减压浓缩即得较纯 的黄酮甙类成分。二、分离现将较
9、常用的方法介绍如下：（一）柱层析法分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。1.硅胶柱层析：此法应用范围最广，主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类 少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多 羟基黄酮醇及其甙类等。2.聚酰胺柱层析：对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位 置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括甙及甙 元、查耳酮与二氢黄酮等黄酮
10、类化合物从聚酰胺柱上洗脱时大体有下列规律：（1）甙元相同，洗脱先后顺序一般是：参糖甙 双糖甙单糖甙甙元2）母核上增加羟基，洗脱速度即相应减缓3）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇（4）分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，故查耳酮往往比相 应的二氢黄酮难于洗脱。上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄 层上的行为。3.葡聚糖疑胶（Sephadex gel）柱层析对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝胶：Sephadex-G 型及 Sephadex-LH-20 型。葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是:分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附 程度
11、取决于游离酚羟基的数目。但分离黄酮甙时，则分子筛的属性起 主导作用。在洗脱时，黄酮甙类大体上是按分子量由大到小的顺序流 出柱体，葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：（1）碱性水溶液（如01mol/L NH4OH），含盐水溶液（05mol/L NaCl 等）。（2）醇及含水醇，如甲醇，甲醇水（不同比例）、t-丁醇甲醇（3:1）、 乙醇等。（3）其它溶剂：如含水丙酮、甲醇氯仿等（二）梯度pH萃取法梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮甙元的分离。根据黄酮类 甙元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物 溶于有机溶剂（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaO
12、H及4%NaOH水溶液萃取，来达到分离的目的。酸性： 7,40-二 OH 7或 40-OH溶于）： 5%NaHCO3 液5%Na2CO3 液一般 OH5-OH0.2%NaOH 液4%NaOH 液）三）根据分子中某些特定官能团进行分离 在黄酮类成分的混合物中， 具有邻二酚羟基成分与无此结构的成分，可用铅盐法分离。有邻二酚 羟基的成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀，达到分离的目的。与黄酮类成分混存的其它杂质，如分子中有羧基（如树胶、粘液、 果胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等）或邻二酚羟基（如鞣质等）时, 也可为醋酸铅沉淀达到去杂目的。具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀，滤集后按常
13、法悬在浮在乙醇中， 通入H2S进行复分解，滤除硫化铅沉淀，滤液中可得到黄酮类化合 物。但初生态的PbS沉淀具有较高的吸附性，因此现多不主张用H2S 脱铅，而用硫酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树脂脱铅。有邻二酚羟 基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此也可与不具上述结构 的黄酮类化合物相互分离。在实际工作中，常将上述柱层析法与各种经典方法相互配合应用，以达到较好的分离效果五、萜类化合物的提取分离萜的昔亲水较强，昔元脂溶性较强。1、溶剂提取法2、碱提取酸沉淀法3、活性炭吸附法4、大孔树脂吸附法一、挥发油的提取1、水蒸气馏法；2、油脂吸收法；3、溶剂萃取法 用石油醚（3060C ）等有机溶剂；4、
14、二氧化碳超临界流体萃取法；5、冷压法二、挥发油成分的分离1、冷冻析晶；2、真空分馏法；3、化学方法：1）利用酸、碱性不同进行分离，2）利用官能团特性进行分离；4、层析分离法三萜皂昔元提取与分离方法:1、醇类溶剂提取后，提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶剂进行分部提取，然后进 一步分离；2、制备成衍生物再作分离；3、以皂苷形式存在的，水解后用氯仿等溶剂萃取，然后进行分离。三萜皂昔提取与分离方法：用稀醇提取，提取液减压浓缩后，加适量水，必要时先用石油醚等萃取，去杂，后 用正丁醇萃取，减压蒸干，通过大孔吸附树脂，水洗去糖等，后用30%80%甲醇或乙醇梯 度洗脱，洗脱液减压蒸干，得粗制总皂昔。用重
15、结晶、层析等方法分离纯化皂昔。五、生物碱的提取和分离一）提取1）非极性有机溶剂提取法：常用溶剂为氯仿, 二氯甲烷，乙醚，苯等。由于生物碱在植物体中往往与酸（咖啡酸，草酸等）生成盐，故一般在用 有机溶剂提取前，先将生药粉末与少量碱水（如10%氨水或碳酸钠液或石灰水）搅匀放置（使 生物碱转为游离状态）再用有机溶剂进行浸泡后用渗漉法等法进行提取。提取的有机溶液部 分用稀酸脚性有机溶剂提取法无生物碱反应为止）。此后，含有生物碱的酸水部分，经过泸后 用乙醚或氯仿等洗去脂溶性杂质（有些生物碱也能溶于氯仿中，故氯仿部分应进一步检查）； 酸水部分加 后可进行干燥稀酸水（如1-2%盐酸）”提多次有机溶剂部分稀酸部分一 项 一V机剂部分稀酸部分I|分别去杂乙醚啊 稀酸分| CHClL乙醚部分分别用乙BCHCI3提取|加1%氨水
