2010年华科生化加答案

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1、华中科技大学2010 年招收硕士研究生入学考试试题考试专业：821 生物化学与分子生物学一名词解释1. homologous protein2. telomeres3. affinity chromatograph4. error-prone DNA repair5. serine protease6. RNA alternative splicing7. translation initiation complex8. leuine zipper二填空题1. 糖蛋白的连接方式（ ）（ ）。2. 有机磷抑制酶活性的部位（ ）。3. DNA 与蛋白质作用的研究的方法有（ ）（ ）。4. 碘值反应

2、脂肪酸（ ），皂化值可以计算（ ）。5. 在 pH6-8 有缓冲作用的氨基酸是（ ），茚三酮反应为黄色的氨基酸是（ ）。6.Edman 反应试剂（ ），检测 Tyr Pauly 反应的属于（ ）化合物。7. 三级结构驱动力是（）血红蛋白氧结合曲线为S型的原因（）。8. B 族作为辅酶的作用（）（） （ ）9. 耐寒植物富含（）脂肪酸，使流动性（ ）10. mRNA前体是（）,RNA聚合酶III的产物是（）（）（）。11. 大肠杆菌DNA连接酶需（），哺乳动物DNA连接酶需（）。12. 原核生物肽链延伸（）（）（），23SRNA有（）功能。13. 组蛋白的修饰方式（，（，（，（，。14. 链霉素

3、如何抑制蛋白质的合成（，。15. “Nick translation”方法标记DNA探针需要的酶是（）。 三计算题和简答题1.有酶溶液50mg/ml,取0.5ml测定活性，底物从3mol/L变成2.7mol/L,反应时间为10min, 总共反应体系为100ml,此时的反应速度为最大的60%。问：（l）1ml酶溶液的活力单位酶的比活力米氏常数2关于血红蛋白中婴儿中丫链取代成人的B链，143为由Ser变为His的意义，为什么BPG 和成人结合的紧密？3. 在原核生物中高效表达真核基因应注意什么？4原核和真核的RNA聚合酶的异同点？5. 免疫球蛋白的多样性的分子基础？6. DNA变形和复性的影响因素

4、？7. DNA甲基化抑制基因转录的机理？四论述题1. 形成蛋白质的寡聚体的意义？2. 简述五种重组DNA导入细胞的方法并说明其原理？3. 保持遗传信息的稳定性和表达的精确性的机制？4.从花药cDNA文库中筛选出一 300bp的在花药中特异表达的cDNA，设计实验: 得到该基因的cDNA全序列分析有无内含子获得基因启动子的序列并验证调控特异性一名词解释1. 同源蛋白质：在不同生物体内行使相同或相似功能的蛋白质2. 端粒酶：在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒 DNA 加至真核细胞染色体末端。3. 亲和层析：是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力，也即生物学亲和力，

5、 建立起来的一种有效的纯化方法。4. 易错修复：在DNA损伤时，缺乏校对功能的DNA聚合酶常在受损部位进行DNA 复制以避免细胞死亡，但同时又导致较高的差错率的修复方式。也叫SOS反应。5. 丝氨酸蛋白酶：胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶是一类蛋白水解酶，因为这 些酶的活性中心的特异丝氨酸残基起关键性作用，所以又称丝氨酸蛋白酶。6. RNA选择性剪接：是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式（选择不同的剪 接位点组合）产生不同的mRNA剪接异构体的过程。7. 翻译起始复合体：由核糖体亚基，一个 mRNA 模板，一个起始的 tRNA 分子和起始 因子组成并组装在蛋白质合成起始点的复合物。8.

6、 亮氨酸拉链：出现于 DNA 结合蛋白和其它蛋白质中的一种结构基元。当来自同一 个或不同多肽链的两个两用性的a -螺旋的疏水面（常常含有亮氨酸残基）相互作用 形成一个圈对圈的二聚体结构时就形成了亮氨酸拉链。二填空题1. N-糖肽链，O-糖肽链2. 丝氨酸羟基3酵母单杂交，DNA凝胶滞缓实验4. 不饱和程度，脂肪酸平均链长5. 组氨酸，脯氨酸6苯异硫氰酸酯PITC，重氮7. 疏水作用，正协同同促效应8. 传递CO?传递一碳单元，电子转移9. 不饱和，增加10. hnRNA， tRNA， 5SrRNA， snRNA11. NAD+， ATP12后续氨酰-tRNA与核糖体结合，肽键的生成，移位，催化

7、肽键形成13. 甲基化，乙酰化，磷酸化，泛素化14. 干扰fMet-tRNA与核糖体结合15. DNA聚合酶I三计算题和简答题1. 酶活力单位的定义：在最适条件下，每分钟内催化1p mol底物转化为产物所需的 酶量定义为一个酶活力单位，即1IU=1p mol/min。那么，0.5mol 酶溶液的活力单位为：（3-2.7）mol/LX0.1LX106/10min=3X103IU则，1ml酶溶液的活力单位为6X103IU比活力计算公式：比活力=活力U/总蛋白mg=6X103IU/50mg=120米氏方程式： V=VmaxX S/（Km+S）那么米氏常数 Km=Vmax/V-1XS=2/3X2.7=

8、1.82. 胎儿血红蛋白简称HbF,亚基组成为a 2y 2。HbF的Y链和B链很相似，也由146个 氨基酸组成，但Y链中的H21 （第143位）残基是Ser，而不是B链中的His。这样就 减少了 BPG （2,3-二磷酸甘油酸）分子结合部位的正电荷，也即减低了对BPG的亲和 力。HbF对BPG的亲和力减低使得它对氧的亲和力增高。因此独立循环系统的胎儿能 有效地通过胎盘从母体的血液循环中吸收氧。3. 用 cDNA 序列，不要用基因组序列（不要含有内含子），因为原核生物没有内含子 剪切系统。需要考虑原核生物密码子偏好的问题。高效表达需要强启动子。注意要表达蛋白的大小，一般情况下大于70KD的蛋白在

9、原核菌种不容易表达或表达 量地。所要表达的蛋白是否需要经过修饰才具有活性，原核生物中蛋白质修饰系统不同。4相同点以双链DNA为模板，以4种核苷酸作为活性前提，并以Mg2+为辅因子。 催化RNA链的起始，延伸和终止，不需要引物。是转录过程中的核心酶。结构形态相同。不同点分子组成不同：详细展开原核只有一种，真核生物有三种RNA聚合酶5.Ig多样性的机制：编码Ig各条多肽链的胚系基因结构是在不同的染色体或同一条染 色体的不同部位，各基因结构中包括编码V区，（D）, J基因片段群和编码C区的C基 因。在B细胞发育过程中通过基因重排，V, D，J片段或V, J片段随机连接，组成V 基因，众多V区基因片段

10、的组合和轻重链的组合，造成Ig的多样性。此外，片段连接 中的不准确或N-核苷酸的插入，也产生多样性。6. DNA变性的影响因素：（1）DNA的均一性G-C含量介质中的离子浓度DNA复性的影响因素：分子量（2）DNA浓度重复序列7. （l）DNA甲基化导致某些区域DNA构象变化,从而影响了蛋白质与DNA的相互作用， 抑制了转录因子与启动区DNA的结合效率。研究表明，DNA甲基化达到一定程度时， 会发生从常规的B-DNA向Z-DNA结构的过度，由于Z-DNA结构收缩，螺旋加深，使 许多蛋白质因子赖以结合的元件缩入大沟而不利于基因转录的起始。甲基化影响限制性内切酶对特异位点的切割。DNA甲基化与组蛋

11、白的修饰相关，DNA甲基化诱导组蛋白的去乙酰化从而抑制转 录。DNA甲基化甚至可以使整条染色体失活，如X染色体。启动子甲基化会降低甚至失去其起始转录的活性。 甲基化还会增加该位点的突变频率。四论述题1. 答案也就是四级缔合在结构和功能上的优越性降低比表面积，增加蛋白质的稳定性丰富蛋白质的功能，以行使更复杂的功能提高基因编码的效率和经济性使酶的催化基团汇集，提高催化效率形成一定的几何形状，如细菌鞭毛适当降低溶液渗透压具有协同效应和别构效应，实现对酶活性的调节2. （ 1）转化法转化：通过生物学，物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞，并在受体细 胞内稳定维持和表达的过程称为转化。如果外源

12、DNA分子是病毒（噬菌体）的DNA或cDNA，此过程也称为转染。 直接转化法有的微生物细胞就能直接提取外源DNA。 化合物诱导转化法感受态细胞：用二价阳离子（如Mg2+, Ca2+, Mn2+）处理某些受体细胞，可以使其成 为处于对外源DNA的接受比较敏感的生理状态的一种细胞。 接合转化法通过共体细胞同受体细胞间的间接接触而传递外源DNA的方法。整个转化过程涉 及到 3种有关的细菌菌株，称为三亲本接合转化法。此方法主要用于微生物细胞的 基因转化。 电穿孔转化法利用高压电脉冲作用，使细胞膜上产生可逆的瞬间通道，从而促使外源DNA的有 效导入。 微弹轰击转化法基因枪转化法 激光微束穿孔转化法 利用

13、直径很小，能量很高的激光微束照射受体细胞，可导致受体细胞膜的可逆性穿 孔。 超声波处理转化法超声波处理细胞时可击穿细胞膜并形成过膜通道，使外源DNA进入细胞。 脂质体介导转化法将 DNA 或 RNA 包裹于脂质体内，然后进行脂质体与细胞膜融合将基因导入。 体内注射转化法 将目的基因重组体通过显微注射装置直接注入细胞核内。 花粉管通道转化法植物授粉过程中，将外源DNA涂在柱头上，使DNA沿花粉管通道或传递组织通 过珠心进入胚囊，转化还不具正常细胞壁的卵，合子及早期的胚胎细胞。Q精子介导法精子同外源DNA共浴后再给卵子受精，使外源DNA通过受精过程进入受精卵并 整合于受体的基因组中。Q磷酸钙转染法

14、有的动物细胞能捕获粘附在细胞表面的DNA-磷酸钙沉淀oDNA同CaCl2混合制成 DNA-CaCl2溶液；逐滴加入不断搅拌的Hepers-磷酸钙溶液，形成DNA-磷酸钙溶 液共沉淀复合物；用吸管将沉淀复合物吸附在单层培养的动物细胞表面。（2）病毒（噬菌体）颗粒转导法用病毒（噬菌体）DNA （或RT-DNA）构建的克隆载体或携带目的基因的克隆载体, 在体外包装成病毒（噬菌体）颗粒后，感染受体细胞，使其携带的重组DNA进入 受体细胞，将此过程称为病毒（噬菌体）颗粒转导法。3. 从DNA结构的稳定性来说，双链互补。 DNA复制时采用多点复制，边解螺旋边复制，确保复制在短时间完成，避免发生基因 突变。

15、 DNA聚合酶的模板依赖性，使子代DNA与亲代DNA核苷酸顺序相同。 复制过程中各种修复机制，保证了遗传信息的稳定性。 翻译过程中，氨基酸与氨酰-tRNA特异结合，保证了表达的精确性。 翻译时，密码子与反密码子配对也保证了表达的准确性。 从大的方面讲，有丝分裂和减数分裂都在遗传信息稳定性的保持中起到了相当大的作 用。4. (1)得到该基因的cDNA全序列通过引物进行PCR扩增后，回收纯化后，测序分析可得cDNA全序列。( 2)分析有无内含子用该cDNA与花药中的mRNA做杂交。当RNA链与cDNA杂交时，互补区可形成双链, 非互补区依然保持单链结构。在电子显微镜下可以观察。如果存在内含子的话则可以看到非 互补区。(3)获得基因启动子的序列并验证调控特异性通过生物信息学的方法，在数据库中找到启动子序列。在启动子可能存在的片段的 5- 端和3-端相向分别进行缺失，然后再连接起来，利用Northern杂交法检测RNA的形成情 况。显然，不管是