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1、学科分类号: 081801 本科学生毕业论文题 目（中文）： 半边莲提取物的抑菌效果研究 （英文）：Study on the Bacteriostatic Effect of Extract fromLobelia Chinensis 姓 名 学 号 200907002133 院 （系） 生命科学与化学工程系 专业、年级 生物工程 2009级 指导教师 2013年5月6日目录摘 要IAbstractII第1章 绪论11.1半边莲简介11.2半边莲中的有效活性成分11.3半边莲的药理作用11.4半边莲的研究现状21.5研究的目的与意义3第2章 实验材料与方法42.1实验材料42.1.1实验原材料
2、42.1.2实验菌株42.1.3试剂42.1.4实验仪器与设备42.2实验方法42.2.1 原材料的预处理42.2.2半边莲提取物的制备42.2.3培养基的配置52.2.4样品的处理52.2.5菌种活化与菌悬液母液制备52.2.6菌悬液浓度测定52.2.7滤纸圆片法测试62.2.8细菌最小抑菌浓度的测定(MIC)7第3章 实验结果与分析83.1菌悬液浓度的测定83.2半边莲提取物对六种菌的抑制作用93.3半边莲提取物最低抑菌浓度(MIC) 的确定10第4章 结论与讨论124.1结论124.2讨论12参考文献14附录16致谢17半边莲提取物的抑菌效果研究摘 要本实验主要采用了滤纸片法、试管两倍稀
3、释法、平板划线分离法、平板菌落计数法等方法对半边莲的抑菌效果进行了研究，研究结果表明半边莲提取物为1.0 g/mL时大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、青霉菌、酵母菌抑菌圈直径分别为21.3 mm、19.2 mm、16.4 mm、15.6 mm、12.5 mm、12.0 mm。根据最小抑菌浓度的测定可知半边莲提取物对大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌四种细菌的最小抑菌浓度分别为12.5 mg/mL、12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL。因此半边莲提取物对革兰氏阴性细菌的抑制效果要强于对革兰氏阳性细菌的抑制效果，对真菌的抑制效果最差。 【关键词】半
4、边莲；黄酮；抑菌；提取 Study on the Inhibitory Effect of Extract from Lobelia Chinensis AbstractFour main methods were adopted to examine the inhibitory effects of Lobelia Chinensis: Filter paper method, Two times dilution method, Streak plate method and Plate count method. Research results show that when extr
5、acting 1.0 g/mL of Lobelia Chinensis, the bacteriostatic diameter of Escherichia coli, Bacillus termo, Staphylococcus aureus, Bcillus subtilits, penicillium, and Saccharomyces cerevisiae is 21.3 mm, 19.2 mm, 16.4 mm, 15.6 mm, 12.5 mm, 12.0 mm respectively. According to the assessment of the minimal
6、inhibitory concentration (MIC), the MIC of Lobelia Chinensis extract on Escherichia coli, Bacillus termo, Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis is 12.5 mg/mL, 12.5 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL respectively. Therefore, this experiment concludes that the extract of Lobelia Chinensis has stronger in
7、hibitory effects on gram-negative bacteria than on gram-positive bacteria and has the weakest inhibitory effects on fungus.Keywords Lobelia chinensis alkaloid bacteriostasis extract第1章 绪论1.1半边莲简介半边莲(Lobelia chinensis Lour)为桔梗科多年生小草本植物，又名急解索、细米草、蛇舌草等。被子植物门，双子叶植物纲，菊目，桔梗科 ，半边莲属，半边莲。生于水田边、沟旁、路边等湿处。产于华东、
8、华南、西南、中南各地。半边莲全草入药，具备利尿消肿，清热解毒等功效，可用于治疗大腹水肿、面足浮肿、痈肿疔疮、蛇虫咬伤等。全草主要含生物碱，此外还有黄酮苷、皂苷、氨基酸、多糖等1-6。1.2半边莲中的有效活性成分半边莲中的有效成分主要有生物碱、黄酮类、皂苷、氨基酸等，此外还有琥珀酸钠、延胡索酸、对羟基苯甲酸钠和酚类等7-10。(1)生物碱：半边莲内主要含有的生物碱为山梗菜碱、山梗菜酮碱、山梗菜醇碱、异山梗菜酮碱。这些物质具有中枢兴奋剂作用。(2)黄酮类：含有芹菜素、木犀草素、香叶木素等，黄酮类化合物的生理活性广泛， 具有生物抗氧化性、消除自由基、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂降血压、降低血糖、
9、抗癌、镇痛、免疫、抗炎作用、抗菌和对消化性溃疡的保护作用等药用保健功能。(3)皂苷：具有镇咳祛痰平喘作用，还有抑菌功能。(4)琥珀酸钠：对热有较好的稳定性，溶解性能好，广泛用于方便面海鲜汤料、肉制品、酱油、海鲜类产品、调味品、腌制咸菜等(5)延胡索酸：用于制造聚酯树脂及多元醇，以及作为染料的媒染剂或是调味料。它是一种普遍的食物添加剂及膳食补充剂，且有时在饮料或发酵粉中作为酒石酸的代用物 (6)对羟基苯甲酸钠：广泛用于食品、化妆品、医药的防腐、防霉剂和杀菌剂等方面。1.3半边莲的药理作用(1)利尿利胆作用：正常大鼠灌服半边莲浸剂，以及正常人口服半边莲粉剂，均有显著而持久的利尿作用。尿量、氯化物排
10、出量均显著增加。半边莲水煎醇提物犬静脉注射有利胆作用，使胆汁流量增加两倍以上胆汁中固形物、胆酸盐、胆红素的浓度均下降11。(2)对神经系统的作用：半边莲碱对植物神经节、肾上腺髓质、延脑各中枢、神经肌肉接头以及颈动脉和主动脉体的化学感受器都有先兴奋后抑制作用，其作用与菸碱相似，但强度较弱。半边莲所含的琥珀酸与戊巴比妥钠合用有协同镇痛作用，并能镇静和降低体温。另有报道，半边莲碱可致吐，其原理既与延脑催吐化学感受区有关，亦有周围机制参与12,13。(3)呼吸兴奋作用：其水煎剂和生物碱能刺激颈动脉体化学感受器，反射的兴奋呼吸中枢。剂量过大则引起呼吸麻痹而死亡。半边莲碱吸入有扩张支气管的作用14。(4)
11、抗蛇毒作用：小鼠注射最小致死量的眼镜蛇蛇毒，在半小时前灌服半边莲制剂及其所含的琥珀酸钠、延胡索酸钠、对羟基苯甲酸钠，均有较高的保护作用。(5)抗溃疡作用：本品所含的琥珀酸，可对抗大鼠幽门结扎产生的胃溃疡，是由于抑制胃液分泌和扩张胃肌而呈抗溃疡作用。(6)轻泻作用：半边莲煎剂口服，有轻泄作用，并能抑制食欲15。(7)抑菌作用：体外试验，山梗菜煎剂对常见致病性真菌有明显的抑制作用。对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌亦有抑制作用。(8)凝血作用：腹腔注射给药可缩短小鼠断尾的出血时间。1.4半边莲的研究现状中药作为我国的传统医药，在应用上具有悠久的历史，在治疗因细菌而引起的感染类疾病中应用广泛，尤其是近年来中
12、药复方制剂或提取物的应用进一步提高了临床疗效。研究表明：清热解毒中药抑菌作用肯定并且对一些耐药菌有一定抑菌和降低耐药性作用，对一些局部感染、肠道疾病、呼吸道疾病均有较好的疗效中药复方制剂作用优于单味中药，尤其中药注射剂与抗生素合用可以提高临床疗效。并且中药还有天然无毒害、无残留、广谱抗菌、高效、成本低廉、技术依赖小等优势，这为中药在抗菌领域的全面推广奠定了基础。半边莲在我国分布广泛，资源丰富，同时，半边莲中存在许多生理活性物质，具有抗菌作用，这为开发植物源天然食品防腐剂，抑菌剂研究提供了宝贵资源。近年来，由于天然提取物的安全优势，从植物中提取活性物质是天然物质研究的热门课题。研究表明，不同性能
13、的抗菌剂间适当配合，可增强抗菌作用，这对于高效、广谱、无毒、天然食品防腐剂的寻找和筛选，对于农产品的深加工和促进食品工业的发展有着重要的科学意义和应用价值16,17。目前针对半边莲提取物对各种类微生物的抑制效果差异性方面的研究非常缺乏，主要集中在对它的药理方面、临床应用和其内物质的提取工艺的研究较多。如黄礼德18等人研究的半边莲不同提取物镇痛抗炎作用得出结论：半边莲具有一定的镇痛抗炎作用，其镇痛抗炎作用可能涉及中枢及外周神经系统，而生物碱类和黄酮类物质可能是半边莲提取物镇痛抗炎的药效部位。但对该药的具体作用机制不详，待进一步深入研究。林雪群19等人研究的半边莲生物碱对高血压鼠脑动脉血管重构的作
14、用得出结论：半边莲生物碱可抑制高血压鼠脑基底动脉ET-1蛋白及ET-1mRNA的表达，提示半边莲生物碱在预防和治疗高血压诱发的脑血管重构中有重要的作用。对半边莲内物质的提取工艺主要集中在对其内生物碱、黄酮苷和多糖的提取上。还有一些人对半边莲的化学成分展开了研究，如杨靖华20等人对半边莲的化学成分展开了较为全面的研究，通过对具体化学成分的分析了解了理论上的功能作用。这为对半边莲在某一方面的研究奠定了一定的基础。同时也有部分人员的研究涉及到了半边莲的抑菌效果，但几乎都是只涉及到半边莲提取物对细菌有抑制作用，而没有研究半边莲提取物对各种类型细菌的抑制效果差异21。1.5研究的目的与意义半边莲在我国是一种分布广泛，且容易采摘的中草药，具有一定的药用价值，现今国内外对半边莲的研究较多，但大部分都是在围绕半边莲内所含物质的提取、鉴定及单一药理作用，而对其本身无需过度处理就能达到抑菌效果的特性研究较少，本实验就是针对这一现象，对半边莲进行较为简单的处理并以此来直接研究其对不同种类的细菌的抑制效果。本实验通过测得半边莲提取物对各种类细菌的最小抑菌浓度，以研究其对不同种类细菌的抑菌效果差异，从而总结出半边莲提取物对不同种类的细菌的抑菌优劣，以期在以后研究半边莲对新细菌的抑菌效果时提供一定的参考依据。第2章
