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1、稻谷、玉米脂肪酸值测定操作练习实验项目稻谷、玉米脂肪酸值测定时 长: 4h目的要求1. 熟悉和掌握脂肪酸值检验流程；2. 掌握微量滴定管的使用和滴定终点的判断。练习重点1. 调节配制0.01mol/L氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液所需95%乙醇至中性；2. 0.01mol/L氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液的配制；3. 样品制备：去杂、粉碎、称量、提取、过滤；4. 脂肪酸值滴定速度控制；5. 滴定终点的判断；6. 脂肪酸值检测结果的的报出。练习难点1. 滴定速度控制； 2. 滴定终点的判断。 预习要点1. 脂肪酸值测定原理。2. 脂肪酸值测定方法中对锤式旋风磨的要求有哪些？3. 脂肪酸值测定用样品粉碎粒
2、度要求？4. 如何配制脂肪酸值测定所用0.01mol/L氢氧化钾-乙醇溶液？5. 如何将稀释氢氧化钾标准溶液用的95%乙醇溶液调节至中性？6. 影响脂肪酸值测定因素有哪些？7. 脂肪酸值滴定应在什么条件下进行？8. 脂肪酸值滴定速度应如何控制？9. 如何判断脂肪酸值滴定终点？10. 应怎样报出脂肪酸值检测结果？实验原理在一定温度（1525）条件下，以无水乙醇提取谷物及制品中的游离脂肪酸，用氢氧化钾标准溶液滴定，游离脂肪酸与氢氧化钾发生中和反应，以中和100 g试样中游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数表示。谷物脂肪酸值测定的实质是酸碱滴定。但由于谷物成分比较复杂，溶于乙醇的组分比较多，用乙醇提取游离
3、脂肪酸的同时，还有其他醇溶性物质，如：醇溶蛋白、色素、植酸等也被提取出来，而且提取的游离脂肪酸不是单一的脂肪酸，因此，提取液组分非常复杂，酸碱滴定也就与通常的强碱滴定单一的弱酸有所不同，是强碱滴定混合弱酸。试 剂与仪器无水乙醇：A.R；1%酚酞-乙醇溶液：1.0g酚酞溶于100 mL 95（V/V）乙醇；不含二氧化碳的蒸馏水：将蒸馏水煮沸10min，加盖冷却；0.5mol/L氢氧化钾标准储备液；0.01mol/L氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液。 锤式旋风磨：具有风门可调和自清理功能，不易发热，粉碎后的样品一次通过CQ16（40目）筛的达95%以上；往返式振荡器，振荡频率为100次/min ；微量滴
4、定管：5mL，最小刻度为0.02mL；10mL，最小刻度为0.02mL；移液管：50mL，25mL；天平：感量为0.01g； 具塞锥形瓶：250mL；锥形瓶：150mL。实验步骤10.01mol/L KOH-乙醇标准滴定溶液的配制准确移取20mL已经标定好的0.5mol/L氢氧化钾标准储备液，用事先调节至中性的95（V/V）乙醇稀释定容至1000mL，盛放于聚乙烯塑料瓶中。临用前稀释。（V浓=c稀V稀/c浓）注：需要组织单位提供事先配制并已经标定的0.5mol/L氢氧化钾标准储备液。2试样制备稻谷试样的制备：从混合均匀的平均样品中分取100 g左右，去除杂质（保留谷外糙米），得到净稻谷样品。用
5、锤式旋风磨粉碎，粉碎后的样品一次通过CQ16（相当于40目）筛的应达到95%以上。粉碎样品（筛上、筛下的全部筛分范围样品）经充分混合后装入磨口瓶中备用。 玉米试样的制备：从混合均匀的平均样品中分取100 g左右，去除杂质，得到净玉米样品。用锤式旋风磨粉碎，粉碎后的样品一次通过CQ16（相当于40目）筛的应达到95%以上。收集筛上、筛下的全部筛分范围的粉碎样品样品，经充分混合后装入磨口瓶中备用。3. 试样处理称取制备好的试样约10 g，精确到0.01 g，于250 mL具塞磨口锥形瓶中，并用大肚移液管（或同等精度加液器）加入50.0 mL无水乙醇，置于往返式振荡器上振荡提取30 min，（振荡频
6、率为100次/min）。静置1 min 2 min，在玻璃漏斗中放入折叠滤纸过滤。弃去最初几滴滤液，收集滤液25 mL以上。 注：样品粉碎后应在2h内进行提取。4. 测定用大肚移液管移取25.0 mL滤液于150 mL锥形瓶中，加50 mL不含二氧化碳的蒸馏水，滴加34滴酚酞指示剂后，用氢氧化钾标准滴定溶液滴定至呈微红色，30 s不消褪为止。记下耗用的氢氧化钾标准滴定溶的体积（V1）。注1：滴定速度宜先快后慢，不能太慢或太快，一般控制在（68）mL/min，即每秒（23） 滴，滴定液成串不成线。临近滴定终点时，要适当放慢滴定速度，注意观察样液的颜色变化。注2：有的样品由于受提取液本身颜色的影响
7、，到达滴定终点时样液不可见微红色，当样液颜色与参照样液有明显色差时，即为滴定终点。5. 空白试验用移液管移取25.0 mL无水乙醇于150 mL锥形瓶中，加50 mL不含二氧化碳的蒸馏水，滴加35滴酚酞指示剂，用氢氧化钾标准滴定溶液滴定至呈微红色，30 s不消褪为止。记下耗用的氢氧化钾标准滴定溶液体积（V0）。6. 结果计算按公式 计算结果。7. 报出结果每份试样取两个平行样进行测定，两个测定结果之差的绝对值符合重复性要求时，以其平均值为测定结果；不符合重复性要求时，应再取两个平行样进行测定。若4个结果的极差不大于n=4的重复性临界极差CrR95(4)，则取4个结果的平均值作为最终测试结果；若
8、4个结果的极差大于n=4的重复性临界极差CrR95(4)，则取4个结果的中位数作为最终测试结果，结果保留三位有效数字。实验记录1（稻谷）稻谷脂肪酸值测定记录样品名称编号试样质量(g)试样耗标液体积（mL）空白耗标液体积（mL）制备样水分（%）脂肪酸值（mg/100g）双试验差值（mg/100g）四平行极差（mg/100g）脂肪酸值报出结果（mg/100g） 注:制备样水分按13.0%计。实验记录2（玉米）玉米脂肪酸值测定记录样品名称编号试样质量(g)试样耗标液体积（mL）空白耗标液体积（mL）制备样水分（%）脂肪酸值（mg/100g）双试验差值（mg/100g）四平行极差（mg/100g）脂肪
9、酸值报出结果（mg/100g） 注:制备样水分按14.0%计。思考题1. 脂肪酸值测定方法中对锤式旋风磨的要求有哪些？答：要求具有风门可调和自清理功能，不易发热，粉碎后的样品一次通过CQ16（40目）筛的达95%以上。2. 测定脂肪酸值所用的粉碎样品是通过CQ16（相当于40目）筛的样品吗？答：测定脂肪酸值所用的粉碎样品不仅仅是通过CQ16（相当于40目）筛的筛下物，而是筛上、筛下的全部筛分范围样品，也即除了筛下物而外，还应该包括残留在筛上的样品。3. 脂肪酸值测定为什么要做空白试验？答：为了消除试剂的影响，减少系统误差。4. 脂肪酸值滴定应在什么条件下进行？答：滴定应在散射日光或日光型日光灯
10、下对着光源方向进行，光线不能太强或太暗，阳光不能直射；环境温度应控制在1525之间。5. 脂肪酸值滴定速度应如何控制？答：滴定速度宜先快后慢，不能太慢或太快，一般控制在（68）mL/min，即每秒（23） 滴，滴定液成串不成线。临近滴定终点时，要适当放慢滴定速度，注意观察样液的颜色变化。滴定手法应尽量一致，振摇速度一致，滴定操作要熟练，整个滴定过程一气呵成。6. 如何判断脂肪酸值滴定终点？答：对提取液颜色很浅的样品，可将滴定至微红色出现视为到达滴定终点；但有些样品由于受提取液本身颜色的影响，到达滴定终点时样液不可见微红色，终点难以判定，可用一个已加入提取液和去二氧化碳蒸馏水尚未滴定的锥形瓶作参
11、照，当被滴定样液颜色与参照样液有明显色差时，即可视为已到滴定终点。7. 影响脂肪酸值测定结果准确性的因素有哪些？答：脂肪酸值测定是较低浓度的强碱滴定多种混合弱酸的体系，加之提取液中除了酸性物质以外，还有一些其他的醇溶性物质如色素等也被提取出来，使提取液本身有一定颜色，而颜色及颜色的深浅因粮食种类和品种的不同而有所不同，从而增加了准确测定脂肪酸值的难度。因此，影响脂肪酸值测定结果准确性的因素很多，如：粉碎磨升温、样品粉碎细度、样品粉碎后到提取的间隔时间、计量器具、环境温度、振荡频率、振荡提取时间、指示剂用量、背景干扰、滴定速度、滴定操作的熟练程度、二氧化碳的影响、终点判定（每个人对颜色的敏感程度、每个人对微红色或明显色差的理解不同）、数据读取等等，都会对检测结果产生不同程度的影响，因此，要求在脂肪酸值测定的全过程都要严格、规范操作。
