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1、一、名词解释（20）1、植物组织培养:是指用无菌方法，使植物体的离体器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、 分生组织、花药组织、韧皮部、皮层等）和细胞（体细胞和生殖细胞）在人为提供的条件下生长和发育的 培养技术的总称。2、细胞全能型：离体的体细胞，具有母体植株的遗传物质，在适宜的条件下，能按其母株的表型完整地 加以表达。在形态建成上具有再生成完整植株的潜势，在代谢上具有合成原植物体所含有的代谢产物的能 力。3、培养基：人工配制的、适合于植物生长发育的“人工土壤”。它含有植物生长所需的各种无机营养元 素、有机营养元素、水分、植物生长调节物质以及培养基的支持体等。4、母液（贮备液）：在组织
2、培养工作中，配制培养基是日常工作，为简便起见，将配方中的药品一次称量 供一段时间使用，即配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液就是贮备液或母液5、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体6、快速繁殖：在无菌条件下，利用植物体的一部分，包括细胞，组织或器官，在人为控制的营养和环境 条件下快速繁殖植物的方法。7、顶芽萌发：又称器官型再生，是指由培养的顶芽或腋芽直接萌发形成小茎后，再诱导小茎生根而形成 完整植株的过程。8、胚状体发生型：是指外植体在适宜的培养环境中，形成类似于合子胚结构的胚状体或体细胞胚。体细 胞胚与合子胚一样具有胚根和胚芽两极性。成熟的胚状体可以像合子胚一样
3、长出根、芽，萌发再生植株。9、不定器官发生型：离体培养条件下不定器官的发生可以通过直接或间接途径由外植体表面分化出不定 芽或不定根等器官，并进一步发育成完整植株。10、原球茎形成型：原球茎形成型是兰属植物特有的再生植株途径。兰属植物外植体接种于培养基上，经 过一段时间的培养便能形成原球茎，然后每一个原球茎可以进一步发育成完整植株，且原球茎可以进一步 增殖。11、玻璃化:是指无菌苗生长异常，茎叶呈透明或半透明的水浸状，植株矮小肿胀、失绿、叶片皱缩成纵 向卷曲，脆弱易碎的现象。12、褐变：指外植体在培养过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色， 外植体也随之进一步变褐而死
4、亡的现象。二填空（20）1根据培养对象的不同大致可分为六种类型器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养、组织培养、 植株培养2从所用培养基的角度来分，植物组织培养可分为固体培养、液体培养（静置培养旋转培养振荡培养纸桥培养）3组织培养室培养条件包括（1）温度（2）湿度（3）光照4培养基的分类固体培养基和液体培养基。组成基本培养基和附加成分培养基中的各种组分在培养中的作用（一）水配制培养基时，使用的水原则上以重蒸馏水或蒸馏水为 好，可减少水中杂质对植物材料分化生长的影响。（二）无机营养成分是指植物在生长发育时所需要的各 种化学元素。根据植物对无机营养的吸收量，可将它们分为大量元素和微量元素，前者
5、是植物的生长发育 的基本营养物质，所需的量较大，后者虽然需要量较少，但却具有重要的生理作用。（三）有机营养元素 植 物组织培养中，分化后的植物体处于异养或半异养状态。因此，在基本培养基中必须加入植物生长发育所 需的各种有机物质，如碳水化合物（糖类）、维生素类、氨基酸类等。（四）植物生长调节物质植物组织 培养中常用的是生长素类、细胞分裂素类和赤霉素（五）活性炭类 活性炭具有较强的吸附功能，可吸收 培养物分泌的抑制物质和琼脂中含有的杂质。从而抑制褐变、促进生根（相对黑暗的条件）、减轻玻璃化。（六）抗氧化物质主要作用是抑制外植体的褐变（七）硝酸银培养基中加入适量的AgNO3，能促使某些原 来再生困难
6、的植物分化出再生植株，在某些情况下能促进愈伤组织器官发生和体细胞胚胎发生（六）培养 基支持体5有机营养元素包括碳水化合物（糖类）、维生素类、氨基酸类。6植物组织培养中常用的植物生长调节物质有生长素类、细胞分裂素类和赤霉素7外植体消毒原则（1）能全都杀灭外植体附带的微生物；（2）不能伤害材料的生活力；（3）能够易于去除。 8无性繁殖的四个阶段阶段无菌培养体系建立阶段、继代增殖阶段、生根成苗阶段、移栽成活阶段。9弓|起植物材料褐变有哪几方面原因植物材料、光照、温度、培养基、培养方式10防止病毒病的方法有哪几种1、物理学方法2、化学方法3、生物学方法11茎尖苗病毒检测的方法有哪几种1、生物检测2、电
7、镜观察3、血清学检测4、开花鉴定三、简答题1. 根据培养对象的不同大致可分为六种类型：答（1）器官培养：包括茎尖、茎段、叶片、叶柄、根、花器官及未成熟的果实等。多用于无性系快速繁 殖及脱毒培养。（2）胚胎培养：包括成熟及未成熟的胚的培养。多用于植物育种方面，培养新品种。（3） 细胞培养：培养单细胞或液体悬浮、分散的小细胞团（4）原生质体培养：培养脱壁后仍具有生活力的原 生质体。（5）组织培养：指以分离出植物各部分的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、 皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等）或已诱导的愈伤组织为外植体的无菌培养-狭义的组织培养。（6） 植株培养：指以完整植株形态的材料为外
8、植体的无菌培养（如幼苗和较大植株的培养）。2培养基配置步骤答：（1）、先在洁净的不锈钢锅里放入蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好能在水浴锅里将琼脂溶化， 如果直接加热应不停地搅拌，防止在锅底烧焦或沸腾溢出。（2）、加入贮备液，按需要加入植物激素和其 它准备加入的物质。（3）、加蒸馏水将最终体积调整到要求的体积。（4）、充分混合好以后，用1N HCl （或 NaOH）调整pH值到所需值（借助精密pH试纸或酸度计）。（5）、趁热将培养基分注到瓶子或试管中，按 容器的大小和培养要求放入适当量的培养基。分装时注意不要把培养基沾附到瓶口或管口接近的内壁上， 以免今后引起因污染。（6）、包扎覆盖物。（7）
9、、高压灭菌后取出，放至室温即可使用。3、灭菌方法答：常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类：（1）物理方法：干热（烘烤和灼烧）、湿热（常压或高压蒸 煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗等措施；（2）化学方法：使用升汞、甲醛、过氧化氢、 高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精等化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的 不同材料和目的进行选用。4消毒时应掌握三个原则：答：（1）能全都杀灭外植体附带的微生物；（2）不能伤害材料的生活力；（3）能够易于去除。5植物组织无菌操作的一般步骤：答：外植体取材自来水冲洗（1h或更长） 70%酒精表面消毒（2060s） 一 无菌水冲洗消
10、 毒剂处理一无菌水充分洗净（34次）一*切割接种 6、快速繁殖的特点答：（1）繁殖系数高、繁殖速度快（2）用材少（3）占用空间小（4）周年生产（5）便于种质保存和交换（6）有利于无病毒苗的培育（7）有利于其他的相关科学研究7、快速繁殖比较完善的五个阶段答：阶段O母株选择和栽培管理阶段、阶段I无菌培养体系建立阶段（外植体选择，植物材料消毒、接种）、 阶段II继代增殖阶段、阶段B生根成苗阶段、阶段W移栽成活阶段8、玻璃化苗与正常苗的对比、玻璃化起因、产生玻璃化苗的因素答：玻璃化苗与正常苗相比有以下特点：（1）外表呈玻璃状，茎叶透明；（2）玻璃化苗含水量增加，干鲜 重比例下降，出现畸形；（3）生长缓
11、慢，甚至死亡（4）生根率、移栽成活率低。起因：细胞生长过程中的环境变化，试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。产生因素：主要有激素浓度、琼脂用量、温度、离子水平、光照时间、通风条件等。9、病毒病的危害有哪些答：病毒的危害是多方面的：寄主代谢异常，使激素的正常平衡受到破坏，造成抑制植物生长的现象; 形态畸变，产生皱缩、花叶、杂斑等许多症状，产量大幅度下降；品质（如花色、花数、果实商品 性等）变劣。10、愈伤组织培养获得无病毒植株的原理答：研究中发现，在由感染组织得到的愈伤组织中，并非全部细胞都清一色地带有病原，从感染的TMV 的烟草愈伤组织机械分离得到的单个细胞中，经鉴定，只有40%带有病毒。在
12、对某些细胞的培养后获得了 无病毒植株。在一个被感染的愈伤组织中某些细胞能够逃脱病毒感染的原因可能有两种：（1）病毒复制 速度赶不上细胞增殖的速度。（2）通过发生诱变，某些细胞获得了对病毒感染的抗性。能够抵抗病毒浸袭 的细胞甚至与对病毒敏感的细胞共存于同一组织中。11、无病毒植株培养程序答：母株选择剥离大小合适的茎尖接种培养再生植株切段或其它繁殖形成无性系病毒鉴定大量 繁殖无病毒原原种扩大繁殖生产体系供给农户四问答题（30）1植物组织培养的应用现状植物组织培养研究和应用范围十分广泛（1）无性系快速繁殖目前国内外都认为无性系快繁是组培应用的主流之一，用组培的方法进行无性繁殖，具有用材料少、速度 快
13、，并不受自然环境条件的影响等特点。（2） 植物脱病毒 病毒在植物体内的不均匀分布在感染的植株体内，顶端分生组织一般无病毒或病毒 数量极少甚至无病毒。因此，可以用组织培养的方法，切取一定大小的茎尖（分生组织）进行培养，可从 已感染病毒的植株上获得无病毒植株。（3）种质保存和交换 目前世界上许多国家对种质资源的保存十分重视（基因成为战略资源），不少国都 建立了“种质库”。保存植物种质资源的传统方法是贮存种子、块茎、根、鳞茎、球茎、根茎、芽和插条等。除贮存室 外，温室和田间也是保存种质资源的场所。然而，以这些方式保存种质资源时的确面临许多困难。因此， 植物组织培养技术日渐发展成为种质资源保存的有效手
14、段，可以代替田间资源圃、苗圃或温室来保存植物。（4）植物育种：在当代的作物育种上，国内外已普遍地采用植物组织培养方法，大体上有以下几个方面: 胚培养、花粉培养、原生质体培养与细胞杂交（细胞融合）、突变体筛选、遗传转化（转基因）等。（5）有用次生代谢物质生产：利用植物组织培养技术生产有用物质。天然色素：食品添加剂、化妆品类葫萝卜素-从葫萝卜、单冠毛菊、薄荷、蔷薇、万寿菊等植物的愈伤组织中提取。叶黄素从葫萝卜、薄荷、蔷薇、万寿菊中提取。药物、保健品：人参皂甙、人参二醇、人参三醇（均从人参根愈伤组织中提取）。因此，利用单细胞培养方法，将植物体内合成某种特殊物质能力强的细胞筛选出来，使之投 入工业化生
15、产，用以提取对人类有用的酶制品、医药制品和食品添加剂。这也是组织培养广泛应用的一个 方面。2、组织培养室设计及基本设备。建筑设施：资料室、培养基配制室（准备室）、接种室、培养室、驯化室（一）培养基配制室（准备室、前处理室）：主要用于器具的洗涤、干燥、培养基的制作、植物材料的 粗调整等。主要仪器设备：1、药品柜：。2、试验台：3、天平：1）药物天平（2）托盘式扭力天平（2）托盘式扭 力天平4、冰箱：普通冰箱（2）低温冰箱：5、烘箱：6、电热蒸馏水器7、磁力搅拌器：8、pH计：9、 高压消毒锅：10、电炉（电磁炉）：11、锅（或其它容器）（二）接种室（无菌室）：该室是植物组织培养成败的关键场所。主
16、要用于植物材料的后期处理，杀菌接 种，继代培养时移植等。因此，该室无菌条件的好坏，对组培影响很大。主要设备：1.超净工作台2、解剖镜3、显微镜4、器械类：镶子、弯头镶子、钝头镊子：尖头镊子。 解剖刀、解剖针： 打孔器5、紫外灯：6、低速离心机：用于沉淀细胞或制备原生质体7、抽气泵：8、 细菌过滤器9、磨砂口玻璃瓶：用来对植物材料进行表面灭菌。10、酒精灯：用来进行接种器材的表面灭 菌（三）培养室：植物组织培养室与动物组织、微生物培养室略有不同，其特殊之处是需要有一定的照明设 备。培养室的大小可根据生产规模和现有条件来设计，为了保证培养材料的正常生长，必需要满足一定的 温度、湿度、光照及空气的无
