《犬血管生成素1ANG1酶联免疫分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《犬血管生成素1ANG1酶联免疫分析（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、如有你有帮助，请购买下载，谢谢!犬血管生成素1(ANG-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T70ng/L-2000ng/L使用目的：本试剂盒用于测定犬血清、血浆及相关液体样本中血管生成素1(ANG-1)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬血管生成素1(ANG-1)水平。用纯化的犬血管生成素1(ANG-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管生成素1(ANG-1),再与HRP标记的血管生成素1(ANG-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
2、用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管生成素1(ANG-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中犬血管生成素1(ANG-1)浓度。试剂盒组成120倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液3mlx1瓶2酶标试剂3mlx1瓶8标准品(4000ng/L)0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X4条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液3mlx1瓶10说明书1份5显色剂A液3mlx1瓶11封板膜2张6显色剂B液3mlx1/瓶12密封袋1个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C
3、保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3勺样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2000ng/L5号标准品150U的原倍标准品加入150口标准品稀释液1000ng/L4号标准品150U的5号标准品加入150M标准品稀释液500ng/L3号标准品150U的4号标准品加入150M标准品稀释液250ng/L2号标准品150U的3号标准品加入150M标准品稀释液125ng/L1号标准品150U的2号标准品加入150M标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各
4、步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50此待测样品孔中先加样品稀释液40出然后再加待测样品103（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37c温育30分钟。4 .配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸储水20倍稀释后备用5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂50空白孔除外。7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色剂A50dl,再加入显色剂B50科1,轻轻震荡混匀，37c避光显色15分钟.10
5、 .终止：每孔加终止液504,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，
6、稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释?稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。10 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1 .试剂盒保存：；2-8C。2 .有效期：6个月1页
