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1、香菇菌种生产的措施与环节 (一)母种生产培养基的配方选择一是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PA):去皮马铃薯20克,葡萄糖20克,琼脂123克，水1 00毫升。氢离子浓度1 0010000纳摩/升(56),用于分离、培养菌种。二是PDA改良培养基(甲):马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾(KH4)2克，硫酸镁(gSO4）5克,维生素B0毫克,琼脂0克,水00毫升,灭菌后氢离子浓度316310000纳摩升(pH5.05.5),用于培养、分离菌种。 三是D改良培养基（乙):马铃薯(去皮)200克,麸皮或米糠50克，硫酸镁0.5克,维生素B0毫克,琼脂0克，灭菌后氢离子浓度3133981
2、纳摩升(5455)。 四是P改良培养基(丙):心材木200克,细米糠(或麸皮)10克，硫酸铵1克,麦芽糖(或葡萄糖)20克,琼脂20克，水1 0毫升，灭菌后氢离子浓度3161000纳摩升(pH5.05.5),用于分离菌种。 五是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基（Y):麦芽浸膏克,葡萄糖10克,酵母浸膏克,琼脂20克，蛋白胨5克,水1 000毫升(用于菌种培养)。 六是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA):麦芽浸膏225克,蛋白胨10克,琼脂20克，水 00毫升（用于分离、培养、保存菌种)。 上述6个培养基配方中，马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。在此着重简介PDA培养基的配制措施与环节:
3、 1制备培养基的操作程序 选择优质马铃薯，去皮或挖去发芽眼，削去发青皮，切成薄片,称取00克，置于钢精锅,加水1 00毫升，煮沸后小火保持3分钟,趁热用8层纱布过滤后放人有1 00毫升刻度的量杯(或量筒)中，补充水到 000毫升，倒回钢精锅,加琼脂继续加热，待琼脂溶化后,再加葡萄糖,再补水至000毫升,用玻璃棒搅均匀，趁热分装试管,或装入三角瓶备用。2.分装试管 将配制好的A培养基，趁热(60)倒人事先准备好的量杯或玻璃漏斗，分装试管。每支试管装培养基为管长的/4，培养液不可贴附管口内壁，如有沾附物必须揩拭干净。做棉塞 取适量棉花做成较紧实的棉塞,塞入试管约2厘米左右，外留1厘米,紧贴试管内壁
4、,松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜，光圆不起皱(如图31），尔后将试管放入铁丝筐内。 4灭 菌 将装有培养基的试管放人灭菌锅的铁丝筐内,上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜，包扎好,以防棉塞受潮。加热灭菌时,排尽锅内的冷气,当温度升到21时，维持30分钟后停止加热。待指针回到零点，先打开锅盖的1/10开度，等到无直冲蒸气时，再打开所有锅盖，取出试管。 5在斜面上摆放试管 将取出的试管冷却到060后，放到用木架或木条摆成一定角度的斜面上,小试管斜面长厘米，大试管(80)斜面长6厘米左右。待完全凝固后,收取备用。 灭菌效果检查 随机取管斜面,放在28下进行空白培养57天后，检查斜面上有无细菌和霉菌菌落
5、。如果发既有杂菌,阐明灭菌不彻底,要重新灭菌。 (二）接种与培养1.接 种在无菌室(接种室)或接种箱内,酒精灯火焰旁进行无菌操作。具体程序如下：左手拿菌种管和待接种的斜面试管,右手拿接种耙,在火焰上来回烧红,拔去菌种管的棉塞,将管口在火焰上烧一下，再把接种耙烧一下，迅速插入种管,稍加冷却，切取米粒大小菌丝块(一定要带培养基)，迅速放入待接种管斜面中心位置(为争取时间，在斜面接两点以上为宜)，拿出接种耙后,再把管口烘烤一下，烧一下棉塞,迅速塞好棉塞,灼烧一下接种耙。到此即完毕了一种接种程序，如下依此类推。 2培 养 将接种后的试管，放入培养箱或培养室进行恒温培养(51),或运用合适的自然气温培养
6、。要保证培养室空气新鲜,环境干净，无光或弱光。为此，必须保持空气相对湿度70左右，在试管上盖上纱布,或盖上薄棉毯,拉上窗帘,形成无光培养。因试管斜面长短不同，一般需经84天培养，才干长满试管斜面。(三)母种质量检查及提高纯度对策 1.斜面优质菌丝形态 在马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)培养基斜面上,菌丝生长洁白，呈棉绒状，密度一致,前沿菌丝(先端）整洁，粗壮。有的棉绒状菌丝发达，如苏香1号，Cr-2；有的棉绒状菌丝不发达,如71,71B,早生一号。后者比前者菌丝生长快，但菌龄较长。 2斜面菌丝不纯现象 在斜面上菌丝灰白，棉毛菌丝不平坦不整洁,前沿菌丝不齐、有缺口,这阐明有杂菌污染。如斜面上有异色
7、,也许是镰刀菌污染。如斜面上特别是菌丝边沿浮现粘稠状物即蜡状、油状，也许是细菌污染。如斜面上呈黄、绿、黑等颜色，则可肯定是霉菌污染。若斜面产生色素，也表白有杂菌污染。将斜面对着光看背面，如有小黑点遮光,阐明杂菌菌落被香菇菌丝覆盖了。3.提高香菇母种纯度的措施必须使培养基彻底灭菌，严格无菌操作,保持培养环境干燥、清洁、恒温、无光、空气流畅，从而保证菌丝强健生长。如发现母种有异常现象,应予剔除。二、原种生产与质量原则及保证对策 原种和栽培种的培养料配方制作技术基本相似,只是装料容器大小不同。因此，本节只简介原种生产技术，栽培种生产技术在有关章节中简介。(一）培养料配方选择共有7个配方可供选择，前3
8、个为常用配方，后个为参照配方。木屑78%，麸皮(或米糠)20%，蔗糖%,石膏1%。木屑3%,棉籽壳0%,麸皮5,蔗糖%，石膏1。木屑60%,蔗渣18 %,麸皮20,蔗糖,石膏。稻草(麦草)5 %,砻糠3%,木屑10%,糖1，石膏。发酵松树、杉树木屑50%,木屑8，麸皮20,糖1，石膏1%。棉籽壳40%，木屑40%，麸皮1 %,糖1，石膏1%。花生壳0%，杂木屑19，石膏%。 上述7个配方都规定含水量在60%左右,氢离子浓度(pH值)随自然状况。配方中各原料一般在3个月前备好。(二)培养料配制的措施和环节1.时间安排 春、秋、冬季节皆可，晴天或阴天配料装瓶最为抱负。夏天宜在每天早、晚配料装瓶,应
9、在小时内装好瓶。.生产组织 使用一台机器,由人操作。其中人向斗内铲料,1人装瓶,人洗瓶,2人做棉塞,1人运送。 3.配料前的木屑解决一方面过筛(2目)，用竹筛或铁筛皆可,筛除掉有棱角的木块、木条、木片等硬物。然后,按照生产筹划和配方成分(百分率),称好主料、辅料和添加剂。接着，将多种原料混合拌匀，有机器用机器拌，无机器用人工来回拌34次。最后,再加入适量的水,继续用机器拌3分钟或用人工拌34次。对浮现的团块一定要拍散,或用铁筛过筛。在配料过程中，需灵活掌握如下3点： (1）灵活掌握含水量：对干料、细料、质松料，加水宜多某些;对粒硬、吸水差的料,加水宜少某些。在晴天、高温、秋千天气而水蒸发量较大
10、时，加水宜多些;在阴雨、空气偏湿而水不易蒸发时,则加水宜少某些。在水泥场地拌料,加水可少某些;在干泥渗水场地拌料,加水宜多某些。在高海拔地区,加水宜多某些（2)拌料要均匀：要做到主料、辅料、添加剂均匀,干湿均匀,酸碱度均匀，不结块。 (3)操作要敏捷迅速：在气温8，如拌料灭菌时间过长，则料易变酸,接种后轻则发菌慢，重则不发菌,并且易使杂菌病毒发生。因此,必须根据机械化水平和劳动者的技术纯熟限度,安排好每日的生产量，保证适时迅速装袋（瓶)，及时灭菌。在高温期间从拌料到灭菌,不能超过4小时；在低温期间从拌料到灭菌,规定但是夜。（4)搞好环境卫生：选用的原材料要无霉变，配料前要曝晒,拌料装瓶环境要清
11、洁,尽量减少空气中的杂菌孢子率。(三)装瓶(袋) 使用机器装瓶，平均每人每日可装720多瓶。具体操作程序如下：装料至瓶颈,清洁瓶口,用小木棒或试管将料压实，并呈凹式，将瓶口内外壁洗净。(四)做好棉塞取一块完整而略不小于掌心的棉絮，其大小厚薄正好适合瓶口的大小长短，平摊在左掌心，右手捏住棉絮边沿往内卷成圆形，尔后用右手的拇指和中指相对捏住棉絮,接着用左手的拇指和食指也相对捏住棉絮,再用右手趁势捏成棉球，塞人管口或瓶口23处。(五)灭菌 常用的高压灭菌锅分为立式或卧式两种。在高度密封的高压锅内，通入高压蒸气,达到彻底灭菌的措施,称为高压蒸气灭菌,又叫湿热灭菌。原种和栽培种的培养料，由于不易被蒸气穿
12、透，灭菌时必须在150千帕即.5公斤/厘米2。条件下灭菌2.02.5小时。在灭菌的全过程中，要严格操作规程,并注意掌握点：料瓶和料袋排放密度要合适,使蒸气流畅,无死角。通蒸气前，检查安全阀与否灵活,有无端障。通蒸气后,打开排气阀,驱散锅内冷空气(自身发生蒸气的高压锅应加足水)，或关上排气阀，接通蒸气。待压力升至.5公斤/厘米。时，开阀放气。待指针回到0位时,保持5分钟，再关上排气阀。等压力升到1.公斤/厘米。时,灭菌202.5小时。然后让其自然冷却，当压力指针回到0位时，打开锅盖或门的14开度,继续让热烘烤棉塞,避免骤冷。接着趁热取出料瓶(袋）,送入清洁消毒过的冷却室。 也可以用常压灭菌法，常
13、用的是灭菌灶或灭菌箱。以低压蒸气进行灭菌的措施，称为常压蒸气灭菌法。这种灭菌法投资省，可自行建造,取材容易，成本低廉，合用于农村。缺陷是灭菌时间长，能耗大。常压灭菌法的具体操作程序是:当点火发生蒸气时,打开放气阀排出冷空气，直至见到放出的直冲蒸气后，再排气5分钟，接着关上阀门，待气温升到10102时,开始计时,持续保持8小时以上。料瓶叠放,瓶颈朝内,瓶底朝外。料袋按品字形叠放,以求压力平衡。行间要留有间隙。点火前,将铁锅内加足水。在灭菌的全过程中要注意铁锅内的水位，保持通水流畅,且水温较高。在灭菌的全过程中，火力应按猛攻恒温徐降的程序掌握。即开始升温火力宜猛，尽快达到0,避免升温缓慢,时间过长
14、，引起原料变酸。当温度升到100时，要保持温度不变,不能时高时低,以免影响灭菌效果。当达到灭菌时间后，让仓(膛)内温度缓缓减少,直降至60,方可开门取物。(六)冷却接种 接种前必须使料瓶(袋)冷却到合适温度,避免高温接种热死种菌。接种前半小时，将原种瓶、接种工具及用品放入接种箱（或接种室）,然后用5 %石炭酸液向上下周壁喷雾消毒,并启动紫外线灯照射灭菌半小时。启用久停不用的接种箱（室)，事先必须用高锰酸钾和甲醛薰蒸解决。接种时,操作人员进入接种室前，先用肥皂洗手,换工作服,戴上口罩和工作帽,穿上工作鞋，手在%来苏儿液或0.5%新洁尔灭液中浸泡2分钟。尔后，用%石炭酸液,对接种室上下及四壁、工作台、凳等喷雾消毒，边喷边后退到缓冲室,关上接种室的门。待5分钟后,将菌种带入室内进行接种操作。接种前分钟,用75%酒精擦手，严格无菌操作(同母种无菌操作法)，规定有序不乱，操作敏捷迅速,减少室内空气流动。接种时，将种管用脱脂棉蘸上75%酒精,进行种管外壁消毒。接着，拔取棉塞,用火焰烧一下管口(或瓶口），把烧过的接种耙迅速插入种管内冷却。尔后将斜面前端1厘米长的菌丝块挖去，剩余斜面提成46段,分别取出接人原种瓶的穴位中心。一管母种可接4瓶原种。 (七）接种结束后的工作接种完毕后,立即将台面收拾干净，将多种剩余物,如种管、洒落的培养基、消毒用过的棉花等均拿出室外，照前述措施进行第二轮接种前解决
