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1、东南大学 生物科学与医学工程学院实 习 报 告实习单位 江苏省肿瘤防治研究所 暨江苏省肿瘤医院 实 习 时 间 年 07 月 10 日至 年 09 月 06 日止学 生 姓 名 张薇 学 号 11206101 指引教师(单位) 马国建 陈森青 沈宗丽 指引教师(学校) 孙剑飞 目录阐明31 前言41.1实习背景41.2实习环境42 实习内容5-182.1实习过程52.2实习内容5-183 总结19-223.1实习小结193.2实习体会20-224 附录23-31附录1（染色体分组措施）23附录2（正常人体染色体分析成果）24-29附录3（卵巢癌病人染色体核型分析数据）30-31谢辞32学生实习
2、鉴定33实习生评价表34学校评语35说 明1 实习结束之后，每位学生都必须认真撰写实习报告。通过撰写实习报告，系统地回忆和总结实习的全过程，将实践性教学的感性结识升华到一定的理论高度，从而提高实习教学效果。实习报告的质量反映了实习的质量，它是实习成绩评估的重要根据之一。没有在规定期间前递交实习报告者将不能参与实习成绩评估。2 实习报告规定条理清晰，内容详尽，数据精确。3 实习报告涉及“学生实习鉴定”表，由实习单位填写。中英文2个版本任选一份填写即可。4 “前言”部分。 “实习背景”简介实习目的、学院有关实习的规定、通过何种方式到此单位实习、实习起止时间等内容；“实习环境”涉及实习单位全称、地址
3、、实习单位性质、规模、简介、所含部门、部门重要工作等内容。5 “实习内容”部分。属报告的重要部分。“实习过程”概述实习各阶段所从事的重要工作等；“实习内容”选择某个阶段的工作进行具体描述。6 “总结”部分。“实习体会”涉及本次实习的收获、对后来学习工作的见解等。7 “谢辞”部分。重要指对实习单位、实习单位指引教师，以及合伙者的感谢。8 “学校评语”由学院实习负责教师统一填写。 1前言1.1实习背景应院系对06级学生的暑期实习规定，本着提高个人解决工作事宜和人际关系能力的想法，经由江苏省肿瘤医院工作人员李玫教师的引荐，本人于7月10日至09月06日在江苏省肿瘤医院进行了为期八周的暑期实习。1.2
4、实习环境江苏省肿瘤防治研究所暨江苏省肿瘤医院，前身系1960年建院的江苏医院。1969年江苏医院整体搬迁盱眙县后，原址由南京医学院第一附属医院接管创立肿瘤科。1973年12月正式成立江苏省肿瘤防治研究所，1991年增挂江苏省肿瘤医院牌子。该院是省内惟一的省属肿瘤专科三级甲等医院，是全省恶性肿瘤防、治、研、教技术指引中心。医院拥有固定资产1.4亿元。根据省级肿瘤专科医院特点，先后引进用于临床诊断、治疗的全身多排螺旋CT、E-CT、MRI、DSA、CR医学影像诊断系统、医用高能电子直线加速器、后装治疗机、钴治疗机、多叶光栏（MLC）、三维TPS、高能超声聚焦刀、冷冻治疗系统和热疗系统等；用于基本实
5、验研究的流式细胞仪、变性高效液相色谱仪、多规格基因扩增仪涉及适时定量扩增仪、大型液氮罐沉水系统等国内外先进的大型仪器设备。这些设备的应用大大提高了恶性肿瘤的诊断、治疗和科研水平。江苏省肿瘤医院设立职能部门20个，临床诊断科室18个，基本医学研究室5个。肿瘤诊治学科齐全，肿瘤放疗、化疗、肿瘤一般外科、肿瘤胸外科四大学科均为省级临床重点专科。其中放疗科为“135工程”重点学科，是江苏省放射治疗中心。医院作为国家药物临床实验机构之一，在肿瘤药物临床实验方面有一定优势,为近百余种新药进行了临床研究。研究高层次拓展，开展了具有高科技水平的肿瘤分子生物学和癌基因研究。基因芯片的开发和应用研究参与国家863
6、攻关项目。江苏省消化道肿瘤的病因学研究获日本文部省项目资助，遗传性大肠癌的分子生物学研究获国家留学基金管理委员会和德国学术交流中心资助。开展的肿瘤遗传性突变、体细胞突变的分析和基因诊断在全国同类研究中处在前列。分子生物学研究室拥有国内最大肿瘤标本库、DNA库和血清库。肿瘤遗传与分子生物学中心实验室现阶段研究项目重要针对肿瘤病人抑癌基因的突变及遗传易感性分析，研究基因涉及MLH1、MSH2、APC、MYH、BRCA1、BRCA2 及MTHFR等。拥用省内最大的肿瘤标本库。配有流式细胞器、DNA序列分析仪、变性高效液相色谱仪、凝胶成像系统等仪器设备。本次实习重要是在分子生物学研究室进行，对该实验室
7、的研究方向以及某些基本的实验操作进行了系统学习。2实习内容2.1实习过程6月16日提交实习申请；7月10日人事处报告；7月13日7月20日：分子生物学实验室的参观理解，文献查阅，流式细胞术检测实验的见习，参与了医院的早会。(指引教师：陈森青、沈宗丽、吴晓柳、戴立玲)；7月27日9月6日：综合实验(第一阶段：细胞水平7月27日8月12日)教师讲述肿瘤遗传学分子生物学中心实验室以及遗传学研究室的重要研究内容、技术平台，对于该科室的研究有了整体的理解；重点是核型分析实验的实际操作；实验期间兼有文献翻译等等内容。（指引教师：马国建）(第二阶段：分子水平8月13日-9月6日)试剂盒提取实验、DNA甲基化
8、实验、以及高压液相色谱分析仪的使用学习。(指引教师：马国建、李金田、张元颖)。2.2实习内容1、 对于实验室的理解本实验室重要是进行细胞水平的研究和分子水平的研究。其中分子水平的研究重要是对于细胞形态进行的组织学研究，涉及可靠的诊断学研究，病理学和影像学的研究，所采用的措施重要是荧光原位杂交技术。分子水平的研究重要是在基因的，是更加先进的研究措施。而本科室的重要研究内容有：基因体现、基因遗传多态性以及表遗传学（甲基化体现）科室的技术平台有：PCR、遗传多态性（高压液相色谱分析）、测序分析以及MSP。2、 流式细胞术检测（Flow Cytometry）1） 实验原理：除电源外，流式细胞仪重要由四
9、部分构成：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完毕了信号的产生、转换和传播的任务。 信号的产生、转换和传播在压力作用下，鞘液管中的鞘液被持续不断地压入流动室，形成一股稳定地持续的液流，保证了样本液稳定地处在鞘液液流的轴线上，并以单个细胞形式直线通过激光照射区。激光照射区又称测量区，是指液流与激光束垂直相交的点。当细胞携带荧光素标记物通过激光照射区时，产生代表细胞内部不同物质、不同波长的荧光信号，这些信号以细胞为中心，向空间360。立体角发射，产生散射光和荧光信号。在免疫分析中常要同步探测两种以上波长的荧光信号，就采用
10、二向色性反射镜，或二向色性分光器，来有效地将多种荧光分开。 经荧光染色的细胞受到适合的光激发后产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。最常用的光电转换器是光电倍增管(PMT)。从PMT输出的电信号需要通过放大后才干输入分析仪器。流式细胞仪中一般备有两类放大器：线性放大器和对数放大器。在免疫学测量中常使用对数放大器。 放大后的电信号被传送到计算机，再经模一数转换器传播到微机解决器形成数据文献，保存在计算机上。保存在计算机上的数据可在脱机后再进行数据解决和分析。 流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完毕的。由喷嘴射出的液流柱在电信号作用下发生振动，断裂形成均匀的小液滴。根据选定的某个参
11、数由逻辑电路判明与否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中。使用不同孔径的喷孔及变化液流速度，也许会变化分选效果。从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间。精确测定延迟时间是决定分选质量的核心，可根据具体规定进行合适调节。数据的显示和分析数据解决重要涉及数据的显示和分析。单参数直方图是使用最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析。单参数直方图是由x、Y二方向构成的二维平面图。横座标x是所测的荧光或散射光的强度，用“道数”(Channel No)来表达。选择的放大器类型不同，标度不同。纵座标Y一般表达被测细胞的绝对数目
12、。正常状况下，数据分析得到的图形为具有一种或若干个峰的曲线图。对曲线图的解释应当具体问题具体分析。 除直方图外，数据显示方式还涉及二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。二维点图也是比较常用的数据显示类型。它显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系，也是二维平面图，横纵坐标可以根据自己选定的被测参数自行决定，点的位置表白了细胞和颗粒具有的二个被测参数的数值。二维点图所提供的信息量要不小于单参数直方图。 2）实验目的： 在本实验室进行流式细胞术检测的目的是通过对于免疫细胞的常规检测，对肿瘤病人各个化疗阶段的状况进行检测对比，从而对于其病情进行评价以拟定下一阶段的治疗方案。采用多参数流式细胞术，
13、对PB中淋巴细胞比例，及淋巴细胞中T、B、NK细胞的比例，及T细胞亚群进行检测。这方面的临床应用有：原发性或继发性免疫缺陷病、自身免疫性疾病、淋巴细胞增殖病、肿瘤疗效观测与预后判断、移植免疫检测等。 3）实验环节： 1、取病人血液作为样本。通过胰酶等解决。标本如果是属于淋巴细胞等血细胞、骨髓细胞或白血病细胞系或类淋巴细胞系，要经Ficoll分离，作单细胞分离解决，但若为实体组织或贴壁生长的上皮成纤维样细胞，需采用酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶等)，化学法（EDTA、EGTA和柠檬酸盐）消化分散液或洗液最佳用无钙、镁PBS，柠檬酸盐的浓度为40mol/L，并同步采用机械分散法。 2、本次检测采用的显示方式是二维点图：全血流式术XCF-FCM图 4）实验记录（免疫常规记录）以及成果分析测量对象测量因素测得值正常细胞参照值（%）T细胞CD3+64.210.4CD4+35.18.1CD8+24.76.0CD4/CD81.440.41NK 细胞CD3-/CD(15+16)+)21.259.20B细胞CD19+8.633.44对于消化道癌、肝癌、肺癌来说，CD8+的会超过常人，其她数值均低于正常值。流式细胞术在肿瘤学的作用很广。对于多种肿瘤有其相应的措施。例如对DNA含量进行检测，对DNA倍体和S期比例可以对于某些初期癌症的治疗进行指引。本次实验通过对于几种不同的
