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1、综述摘要：一、什么是多糖多糖(polysaccharide)是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10 个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物，可用通式(c6h10o5) n表示。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的 混合物。二、多糖的结构多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合、失水而成，是 一类分子机构复杂且庞大的糖类物质。凡符合高分子化合物概念的碳 水化合物及其衍生物均称为多糖。多糖多糖在自然界分布极广，亦很重要。有的是构成动植物骨架结构 的组成成分，如纤维素；有的是作为动植物储藏的养分，如糖原和淀 粉；有的具有特殊的生物活性，像人体中的肝素有抗凝血作用，肺炎
2、 球菌细胞壁中的多糖有抗原作用。多糖的结构单位是单糖，多糖相对 分子质量从几万到几千万。结构单位之间以苷键相连接，常见的苷键 有a-1, 4-、。-1, 4-和a-1，6-苷键。结构单位可以连成直链，也可 以形成支链，直链一般以a-1, 4-苷键(如淀粉)和。-1, 4-苷键9 如纤维素)连成；支链中链与链的连接点常是a-1, 6-苷键。由一种类型的单糖组成的有葡萄糖、甘露聚糖、半乳聚糖等，由 二种以上的单糖组成的杂多糖(hetero polysaccharide)有氨基糖的 葡糖胺葡聚糖等，在化学结构上实属多种多样。就分子量而论，有从 0.5万个分子组成的到超过106个的多糖。比10个少的短
3、链的称为 寡糖。不过，就糖链而论即使是寡糖，在寡糖上结合了蛋白质和脂类 的，就整个分子而论，如果是属于高分子，则从广义上来看也属于多 糖，因此特称为复合多糖(conjugated polysaccharide，complex poly saccharide)或复合糖质(glycoconjugate)(糖蛋白、糖脂类、 蛋白多糖)。三、多糖的功能通常具有贮藏生物能和支持结构的作用。不均一多糖通过共价键与 蛋白质构成蛋白聚糖发挥生物学功能，如作为机体润滑剂、识别外来 组织的细胞、血型物质的基本成分等。多糖类化合物广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中，是 由醛基和酮基通过苷键连接的高分子聚合
4、物，也是构成生命的四大基 本物质之一。细胞膜和细胞壁的多糖成份不仅是支持物质，而且还直接参与细胞的 分裂过程，在许多情况下成为细胞和细胞，细胞和病毒，细胞和抗体 等相互识别结构的活性部位。生物合成通常是由结合在细胞膜质（高 尔基体、原生质膜、粗面内质网等）上的转糖基酶进行，利用各种糖 苷作为前体。在细菌细胞壁和聚多糖的生物合成中，多萜醇衍生物（特 别是称为细菌萜醇的）作为中间体参与反应。另一方面，在分解过程中，有对糖链的糖排列次序和键的性质有特异 性的多种糖苷酶参与。动物细胞中则多以溶酶体系统的酶存在。此外， 常能看到因缺损这些酶中的某种所导致的遗传病。这是显示多糖代谢 重要性的典型例子。12
5、0世纪50年代发现真菌多糖具有抗癌作用，后来又发现地衣、花粉 及许多植物均含有多糖类化合物，并进行分离提纯，确定了其化学结 构、物理化学性质、药理作用，尤其对多糖类化合物的抗肿瘤和免疫 增强作用进行深入研究。多糖无甜味，在水中不能形成真溶液，只能形成胶体，无还原性，无变旋性，但有旋光性。五、多糖的提取方法（柚子皮）1、试验目的通过本试验，掌握多糖的性质，测定方法的基本原理，熟悉S54 紫外可见分光光度计，KQ5200超声波清洗器的使用方法。2、试验原理植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚 糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的 糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合
6、成一种橙红色化合物，在10100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸 收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊 糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存 在的影响，3、设备3.1试剂:3.2仪器:葡萄糖，苯酚，碳酸氢钠，浓硫酸，乙醇等。粉碎机、S54紫外可见分光光度计，电子分析天平，3.3提取:KQ5200超声波清洗器称曲=取粉碎饮片20.0027g,加入300ml蒸馏水浸泡4h,加热回流提取2次（300|次），1.5h|次。合并水提液，过滤减压浓缩至100ml，静置，离心，上清液减压浓缩至100ml，再向其中加入3倍量9
7、5%的乙醇，于4度冰箱中静置18h,离心弃上清液，收集白色沉淀物，冷冻干燥，得粗多糖。4多糖含量的测定4.1 5%苯酚试剂的配制取苯酚 100.0422g,加铝片 0.1057g 和 NaHCO3 0.0499g,常压蒸馏，收集182度馏分，称取7.5g,加水150ml溶解，置棕色瓶内放 冰箱备用。4.2葡萄糖标准液储备液的配制精确称取150度干燥恒重的葡萄糖50.00mg，加适量水溶解，转移至50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀配成浓度为1mg|ml葡萄 糖标准储备液备用。4.3标准曲线的制备葡萄糖标准储备液1mg|ml，移取0,0.5,1.0,2.0，3.0,4.0,5.0,6.0ml分别定
8、容于50ml容量瓶中，制备成标准使用溶液，分别取1ml标准使用溶液置试管中，加入1ml5%苯酚溶液，迅速加 入5ml浓硫酸，振荡放置15min,置于沸水浴中加热30min，冷水冷 却至室温。用紫外分光光度计测定吸光度A，以吸取光度对浓度做图 校准曲线，计算回归方程。4.4最大吸收波长的选择精密移取1ml|ml，葡萄糖标准液3ml,加入1ml5%苯酚溶液，迅 速加入5ml浓硫酸，振荡，放置15min,置于沸水浴中加热30min,冷 却至室温，采用蒸馏水同法做空白参比溶液，分别在 480,485,495,500nm处测定吸收光度，绘制曲线，找出最大吸收波长。 4.5换算因子的测定取粗多糖样品10m
9、g置100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释摇匀， 精密吸取1ml于50ml的容量瓶中，加入1ml5%苯酚溶液，迅速加入 5ml浓硫酸，振荡摇匀放置15min，置于沸水浴中加热30min，冷却 至室温，采用水同法做空白参比溶液。于490nm处比色测定吸光度 A,利用公式f=w|c*d计算换算因子（w为多糖含量mg,c为多糖稀释液中葡萄糖浓度mg|ml,d为多糖的稀释因素）4.6样品溶液的配制精密称取柚子皮粉末20.0027mg, 用 80%的乙醇浸泡24h,回流提取1h,抽滤弃去滤液，洗涤后连同滤纸于烧杯中加热蒸馏水， 在沸水浴回流1h，过滤反复洗涤，合并滤液定容于100ml的容量瓶 中，移取1ml，
10、溶液与试管中备用如2.4方法进行操作，记录吸光度 的值。再由下式计算柚子皮中多糖的含量:多糖的含量（%）=CDf|W（C 为样品中葡萄糖的含量，D为样品的稀释因素，f为换算因子，W为 样品质量）。4.7稳定性试验精密吸取样品，按照2.4方法分别于0,0.5,1.0,1.5,2.0H通过 标准曲线的方法测定吸光度A，并记录。4.8精密度试验精密吸取同一样品，按照2.4方法重复测定吸光度6次，记录吸 光度A数值并计算。5试验结果5.1最大吸收波长的测定通过紫外分光光度计进行扫描后，以选择波长为横坐标，以吸光 度为纵坐标绘制曲线，确定最佳吸收波长为490nm, 5.2标准曲线的绘制通过紫外分光光度计
11、测定，对葡萄糖溶液含量（X）和吸光度（Y）进行回归处理，得到回归方程为y=10.97x+0.1082,R=0.9969。表明 在06ml范围内葡萄糖的含量和吸光度成良好的线性关系。5.3换算因子计算结果通过标准曲线的方法测定吸光度，从回归方程计算换算因子样 品中葡萄糖的含量，利用公式f=w|c*d=0.21。5.4样品多糖的含量计算结果通过标准曲线的方法测定吸光度，测得的吸光度值带入回归方 程算出柚子皮中葡萄糖含量，得出柚子皮中粗多糖的含量（%） =CDf|W=2.71%5.5稳定性试验柚子皮多糖的稳定性试验表明，在2h测得，吸光度A值无明 显变化，RSD=0.26%，稳定性较好。五、多糖的测
12、定植物体内的碳水化合物营养状况以及农产品的品质性状，常以可 溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性 糖和淀粉的方法。（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖 和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水 生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10 100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下 有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化 的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受 蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。【实验仪器
13、及试剂】1.仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻 度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。2.试剂：（1）90%苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL 溶解，在室温下可保存数月。（2） 9%苯酚溶液：取3mL 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现 配现用。（3）浓硫酸（比重1.84）。（4） 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80C下烘至恒重，精确称取 1.000g。加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸， 用蒸馏水定容至刻度。（5） 100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1 %蔗糖 标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。【实验步骤】1.标准曲线的制作：取
14、20mL刻度试管11支，从0 -10分别编号，按表27-1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加 入1mL 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5-20s。加入5 mL浓 硫酸，摇匀。比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。显色。 然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标， 光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。2.可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称 取0.10-0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL蒸 馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过 滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容
15、至刻度。3.测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL, 同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并 测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖 含量。（二）蒽酮法测定可溶性糖【实验原理】糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基 糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生 物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定 量。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定 戊糖与己糖，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维 素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应X所
16、以用愈酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水 化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用意酮 法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但 在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入 反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与意酮试剂发 生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度 不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显 色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差， 但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有 色物质在可见光区的吸收峰为630nm，故在此波长下进行比色。【实验仪器及试剂】1
