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1、实验4从茶叶或茶叶下脚料中提取茶多酚一、实验目的（1）掌握从茶叶或茶叶下脚料中提取茶多酚的方法。（2）掌握用分光光度法测定茶多酚总量的方法。二、实验原理目前，茶叶消费日趋高档化，而中、低档茶受国际市场影响常滞销、积压严重，这种现象制约的茶叶产业的发展。与此同时，在茶叶生产及加工过程中还有大量修剪枝叶及加工副产品，这些产品多作为废物而为加以充分利用。因此，寻求经济新增长点及开辟茶叶新用途成了各国各地区茶学界的重要议题。茶叶综合利用已成为茶叶发展中的新亮点。茶的综合利用是以茶（含茶树的根、茎、花、果、种子等）为原料，对茶的内含物进行综合开发，达到物尽其用，以增加收益。众所周知，茶叶有诸多保健作用，
2、这与茶叶中富含茶多酚、咖啡因、茶多糖和茶氨酸等有效成分有密切关系。茶多酚不仅是一种天然的食品抗氧化剂，而且还是多种保健品及药品的生产原料；咖啡因是多种饮料的添加剂，在医药上也有广泛的应用；茶多糖有降血糖、血脂和增强机体免疫力等功效；美国科学家发现茶氨酸能使人体抵御SARS病毒感染的能力增强5倍，是极有潜力的新型抗病毒、细菌和真菌的新型药品和保健品的成分。由此可见，对这些有效成分进行制备并加以利用，不仅是解决中、低档茶及茶副产品出路的有效途径之一，而且可产生重大的经济效益和社会效益。从清洁生产的思想出发，对有效成分进行有效提取，提出清洁生产工艺，考虑到实验整体安排这里主要以提取茶多酚为主开展讨论
3、。茶叶中富含多烃基的酚性物质-茶多酚。茶多酚的主要组分是儿茶素，占茶多酚含量的80%左右。茶多酚中几种主要儿茶素所占的比例分别为：L-表没食子儿茶素没食子酸酯（L-EGCG）50%60%,L-表儿茶素没食子酸酯（L-ECG）15%20%,L-表没食子儿茶素（L-EGC）10%15%丄-表儿茶素（L-EC）4%6%。它们的结构式如下：茶多酚不仅是构成茶叶色、香、味的主体化学物质,而且是一种理想的天然食品抗氧化剂,已被列为食品添加剂。此外,它还具有清除自由基、抗衰老、抗辐射、减肥、降血脂、防癌等多方面的功能。茶多酚在食品加工、医药保健、日用化工等领域具有广阔的应用前景。近十年来,国内外特别是我国和
4、日本对探索新的茶多酚提取分离工艺日益关注。本实验是研究从茶叶中提取天然抗氧化剂-茶多酚的制备方法,工艺包括沸水提取、沉淀、酸化转溶、萃取及真空干燥,其特征在于提取液中加入能使茶多酚沉淀的可溶性无机盐,分离沉淀后,在沉淀中加入强酸或中强酸剂至沉淀完全溶解,制得酸化液,再用乙酸乙酯萃取,浓缩干燥制得茶多酚,并对茶多酚进行定量分析。过量酒石酸铁在茶多酚溶液中与茶多酚反应生成稳定的紫褐色配合物,溶液颜色的深浅与溶液中茶多酚的含量成正比。因此,可通过比色法定量测定茶多酚的含量。三、实验试剂与仪器（1）试剂：氯化锌、碳酸钠、盐酸、乙酸乙酯、硫酸亚铁（FeSO47H2O）、酒石酸钾钠（C4H4O6NaK4H
5、2O）、十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、蒸馏水。（2）仪器：粉碎机、离心机、旋转蒸发器、干燥箱、分光光度计、真空泵、pH计、布氏漏斗。四、实验步骤（一）试剂的制备酒石酸铁溶液：称取1g硫酸亚铁（FeSO47H2O）和5g酒石酸钾钠（C4H4O6NaK4H2O）,混合后加蒸馏水溶解，定容到1000ml。此溶液可稳定使用10d。pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液：配制1/15mol/l十二水磷酸氢二钠溶液，即称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）,加水溶解后定容至1L；配制1/15mol/l磷酸二氢钾溶液，即称取经110C烘干2h的9.08g磷酸二氢钾（KH2PO4）,加水溶解后定容
6、至1L；取上述磷酸氢二钠溶液85ml和磷酸二氢钾溶液15ml混合均匀备用。（二）茶叶准备用粉碎机粉碎茶叶若干。（三）沸水浸提称取5g粉碎后的茶叶若干克，加入100ml沸水（90C）提取30min,用滤布过滤，再用100ml沸水浸提一次，合并两次的上层清夜。（四）离子沉淀向合并后的提取液中加入12g的氯化锌，用0.1mol/LNa2CO3溶液把提取液的pH值调至7.0，使茶多酚沉淀完全，离心分离。（五）酸化转溶在沉淀中加入40ml2mol/LHCl溶液，离心分离少量未溶解的沉淀。（六）萃取转溶后的茶多酚溶液用同体积的乙酸乙酯萃取(30C,15min)两次，合并萃取液。(七) 减压浓缩干燥合并萃取
7、液，用旋转蒸发器减压浓缩，将浓缩液转移至蒸发皿，在真空干燥箱(40C)中干燥，得到茶多酚的粗晶体。(八) 茶多酚总量测定(1) 样品试液制备：准确称取茶多酚的粗晶体，用少量重蒸水溶解，定容。(2) 测定：吸取样品试液1ml于25ml容量瓶中，加入4ml蒸馏水和5ml酒石酸铁溶液，充分摇匀,再加入pH值为7.5的磷酸盐缓冲液稀释至刻度，用10mm比色杯，在波长为540nm处，与试剂空白溶液做对比，测定吸光度(A)。茶叶中茶多酚的含量以干态质量分数表示，按下式计算：式中，L1-试样的总量，mL；L2-测定时的用液量，mL；M0-试样的质量，g；m-试样干物质的质量分数；A-试样的吸光度；1.957-用10mm的比色皿，当吸光度为0.5时，每mL茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
