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1、临床医师临床检验基础一红细胞检查 考纲要求红 细 胞 检 查(一)概要(1)红细胞生理掌握(2)血红蛋白分子结构、成 分、合成和代谢了解红细胞计数血红蛋白测定(1)检测原理掌握(2)方法学评价掌握(3)质量控制熟练掌握(4)参考值熟练掌握(5)临床意义掌握(6)操作方法了解概要一、红 细 胞 生 理R BC生成红系祖细胞一造血干细胞原红 早幼红 中幼红 晚幼红 网织红 红细胞 衰亡衰老红细胞主要在脾破坏，分解为铁、珠蛋白和胆红素。f 原吓蹄二、血 红 蛋 白(h e m o g l o bi n,H b)l.H b分子结构及成分色素部分为亚铁血红素蛋白质部分为珠蛋白类链：a,6 和 8 梃；B
2、 类糙：B，$，V.铤。每 个Hb分子由2条a类肽链和2条B类肽链组成。红细胞计数【检测原理】1.手工显微镜法：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入血细胞计数池，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求出每升血液中红细胞数量。稀释一充池f计数一计算2.血液分析仪法：用 电 阻 抗 和(或)光 散 射 原理。【稀释液】1.Ha5rem 液氯化讷(jfaa)硫酸讷(Na:SO,)氯化晟 汞(IfeClj)-调节遨透浓度-防止红细胞聚集 防腐剂，有毒氛调遨，硫防聚，高贡防腐且有毒。2.枸椽酸讷稀释液:枸椽酸讷 抗凝和维持渗诱压巴 蒙 防腐和固定红细胞氯化讷-调节渗透浓度3.普通生理盐水或加1%甲
3、醛的生理盐水。改良牛鲍计数板(血细胞计数板)计数池计数池*H!，型沟槽0.1m m间隙计数池微观结构面积容积1m m20.W (U-l)11nm 5个大方格四角大方格单线1 6中方格中央大方格双线2 5中方格，1 6小方格【血细胞计数板口诀】改良牛鲍H型，上下两池容点1,四角中央五大格，四角单线白细胞，单线分成16中，中央双线红与血，双线分成2 5中，每 中 分 成16小。3nun血细胞计数区白细胞计数区域是四角的4个大方格红细胞和血小板计数区域中央大方格四角和中间5个中方格【操 作 方 法】稀释液2ml+血lO ulf混匀 充池f静止35min 一循检一次完成充池，如充池过少、过多有气泡、继
4、续充液，应重新操作。充池后不能移动盖玻片。计算计数倍 m计数区域计数原则32 3:3 a 3 21)2 2.e 4.O2，2 035O0O计数原则压线细胞【计 算】红细胞数/L=NX25/5X10X200Xl()6/L=N(5个 中 方 格 内 红 细 胞 数)/1OOX1O7L白细胞影响通常白细胞总数较少，仅 相 当 于 红 细 胞 的1/10001/500,对结果影响很小，可以忽略不计。但白细胞过 高 者(W B 0100X 107L),红细胞计数结果应进行校正。校正方法有两种：一 是：直接将患者红细胞数减去白细胞数。二是：在高倍镜下勿将白细胞计入，白细胞体积常比红细胞略大，中央无凹陷，细
5、胞核隐约可见，无黄绿色折光。【方法学评价】1.手工显微镜法是传统方法，不需要特殊设备，但操作复杂、费时。2.血液分析仪法是常用方法，比手工法精确（如电阻抗计数法的变异系数为2%,手工法则大于11%）,且操作简便、快速。当白细胞数量明显增高时，会干扰红细胞计数和体积测定而产生误差。成本高，环境条件要求高。【质量控制】1.手工法：误差原因样本：血液发生凝固，使细胞计数减少或分布不均。操作：稀释、充池、计数不规范。器材：微量吸管、计数板不标准。固有误差（计数域误差）估计细胞计数的95%可信限和变异系数，采用下列公式：标准差s=；95%可信限=计数值 2 s；变异系数=（：丫=$/11乂100%=4*
6、100虬2.仪器法：应严格按规程操作，并定期进行室内质控和室间质评。【参考值】男性：（4.05.5）X 10,2/L女性：（3.55.0）X lOVL新生儿：（6.07.0）X1012/L医学决定水平：高于6.8X10/L,应采取治疗措施；低于参考值低限，为诊断贫血界限。低 于1.5X102/L应考虑输血。【临床意义】1.生理性变化增多年龄、性别、精神因素、剧烈体力劳动或运动、新生儿、高原居民等。减少老年人、妊娠等。2.病理性变化（1）RBC和 Hb减少贫血：单位容积血液中RBC数量、Hb量或HCT低于参考值的下限。1）急、慢性红细胞丢失过多：各种原因出血，如消化性溃疡、痔疮、十二指肠钩虫病等
7、。2）红细胞寿命缩短：各种原因溶血，如输血溶血反应、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症等。红血比低于下限见贫血，出血红细胞丢失多，溶血红细胞寿命缩短，原料骨髓抑制生成少。3）造血原料不足：如慢性失血者、先天性或后天性红细胞酶缺陷者、铁粒幼细胞贫血；某些药物，如异烟肿、硫嗖嚓吟等；继发于某些疾病，如类风湿关节炎、白血病、甲状腺功能亢进、慢性肾功能不全、铅中毒等。4）骨髓造血功能减退：某些药物，如抗肿瘤药物、磺胺类药物、保泰松、有机珅、马利白消安等可抑制骨髓造血功能；物理因素，如 X线、60钻、镭照射等可抑制骨髓造血功能。（2）RBC增多1）相对增多：呕吐、严重腹泻、多汗、多尿、大面积烧伤、晚期消化道肿
8、瘤而长期不能进食等引起血液浓缩、血液中有形成分相对增多，多为暂时性增多。继发性2）绝 对 增 多 v 血中Epot一原发性继发性心血管病：各种先天性心血管疾病，如房室间隔缺损。肺部疾病：肺气肿、肺源性心脏病、肺纤维化、矽肺和各种引起肺气体交换面积减少。异常血红蛋白病。肾上腺皮质功能亢进（库欣病）：可能与皮质激素刺激骨髓使红细胞生成偏高有关。某些药物，如肾上腺素、糖皮质激素、雄激素等。原发性：真性红细胞增多症（PV）o血红蛋白测定【检测原理】1.氟化高铁血红蛋白HiCN测 定 法:除 SHb外高铁甄化理Hb-Hi+CLT HiCN九540nm-AI C S H 推荐参考方法，具有操作简单、显色快
9、、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。致命的弱点是氟化钾（K C N）试剂有剧毒，使用管理不当可造成公害。2.十二烷基硫酸钠血红蛋白S D S 测定法：5 3 8 mH b +S D S -S D S-H b （粽红色）-A具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认，不能直接用吸光度计算Hb 浓度，而且S D S 试剂本身质量差异较大，会影响检测结果。【参考值】成年男性：1 2 0 1 6 0 g/L成年女性：1 1 0 1 5 0 g/L新生儿：1 7 0 2 0 0 g/L【临床意义】Hb 的临床意义与红细胞计数相似，但判断贫血程度
10、优于红细胞计数。根据Hb 浓度可将贫血分为4度。轻度贫血：Hb 1 2 0 g/L（女性 Hb V 1 1 0 g/L）；中度贫血：Hb 9 0 g/L；重度贫血：Hb 6 0 g/L；极重度贫血：Hb 3 XIO12/LO目前国际推荐测定血红蛋白方法是A.十二烷基硫酸钠比色法B.氧化高铁血红蛋白比色法C.碱羟血红蛋白比色法D.酸化血红蛋白比色法E.血细胞分析仪测定法r正确答案B 答案解析 目前国际推荐测定血红蛋白方法是氟化高铁血红蛋白比色法 考纲要求红 细 胞 检 查(二)红细胞形态检查血细胞比容测定红细胞平均指数(1)检测原理掌握(2)方法学评价了解(3)质量控制掌握(4)参考值熟练掌握(
11、5)临床意义掌握红细胞形态检查【检测原理】红 细 胞 形态检查与H b测 定、RB C计数结果相结合可粗略推断贫血原因，对贫血诊断和鉴别诊断有很重要的临床价值。将细胞分布均匀的血涂片，进 行 染 色(如 瑞 氏 染 色)后，根据各种细胞和成分各自的呈色特 点，在显微镜下进行观察和识别。【质量控 制】1 .选择细胞分布均匀的区域。2 .注意检查顺序的完整性 1的购分做均匀.立体将由也弟漕(中央照英)先在低倍镜下估计细胞分布和染色情况，再用油镜观察血膜体尾交界处细胞形态，同时浏览是否存在其他异常细胞，如幼稚或有核红细胞等，有时异常成分常集中分布在血片边缘。【参考 值】瑞氏染色血涂片成熟红细胞形态为
12、双凹圆盘形，细胞大小一致、平 均 直 径7.2u m,淡粉红色，中 央1/3为生理性淡染区，胞质内无异常结构。*RBC大小改变*Hb含量改变*RBC形态改变*RBC结构改变【临床意义】1.R B C 大小改变(1)小红细胞直径6 um的红细胞，H b 合成障碍，生理性淡染区扩大，见 于 I D A、珠蛋白生成障碍性贫血。66(2)大红细胞直径1 0 Um的红细胞，见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血等。(3)巨红细胞直径 1 5 u m 的红细胞，因叶酸、维生素B 1 2缺乏使幼稚细胞内D N A 合成不足，不能按时分裂，脱核后成为巨大红细胞，血涂片还可见分叶过多中性粒细胞。见于巨幼细胞性
13、贫血。(4)红细胞大小不均红细胞间直径相差一倍以上，大者可达1 2 N m,小者仅2.5 B m,与骨髓粗制滥造红细胞有关。见于严重的增生性贫血(如M A)。2.1 1 b 含量(染色异常)(1)高色素性红细胞中央浅染区消失，整个红细胞染成红色，胞体增大,平均红细胞H b 含量增高，平均H b 浓度正常。见于M A(2)低色素性红细胞中央生理性浅染区扩大,成为环形红细胞。见 于 IDA、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血等。0 o Oc（3）多色性是尚未完全成熟的红细胞，胞体较大，胞质内尚存少量嗜碱性物质（RNA）,红细胞染成灰红色或淡灰蓝色。见于正常人（占现左右）、骨髓造红细胞功能活跃（
14、如溶血性或急性失血性贫血）。啊红大小染色常小红低色缺铁珠大红不均高巨贫多色骨髓功能跃建。O3.红细胞形状改变（1）球形红细胞见于遗传性和获得性球形细胞增多症（如自身免疫溶血性贫血等）。（2）椭圆形红细胞见于遗传性椭圆形细胞增多症（可达25%75%）、大细胞性贫血（可达25%）、缺铁性贫血、正常人（约 占 1%,不超过15%）（3）靶形红细胞细胞中央染色较深，外围为苍白区域，而边缘又深染，形如射击之靶。见于各种低色素性贫血(如珠蛋白生成障碍性贫血、H b C 病)、阻塞性黄疸、脾切除后。(4)口形红细胞细胞中央有裂缝，中央淡染区呈扁平状，似张开的口形或鱼口，细胞有膜异常，N a 通透性增加，细胞
15、膜变硬，使脆性增加，细胞生存时间缩短。见于口形红细胞增多症、小儿消化系统疾患引起的贫血、酒精中毒、某些溶血性贫血、肝病和正常人(4%)。(5)镰形红细胞：细胞呈镰刀状、线条状或L、S、V形等，是含有异常血红蛋白S (H b S)的红细胞,在缺氧情况下，溶解度减低，形成长形或尖形结晶体，使细胞膜发生变形。检查镰形红细胞时需加还原剂如偏亚硫酸钠后观察。见于镰状细胞贫血(H b S-S,H b S-C)、镰状细胞特性样本(H b A-S)。(7)裂红细胞为红细胞碎片或不完整红细胞，大小不一、外形不规则，呈刺形、盔形、三角形、扭转形等，是细胞通过阻塞的、管腔狭小的微血管所致。见于弥散性血管内凝血、微血
16、管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤和正常人(0.7,RBC为（710）X lOVL,Hb 180g/L即可诊断。【操作方法】温氏法取EDTA-K2或肝素钠抗凝静脉血2 n d,加入温氏管中，用水平离心机以2264g,离心30分钟。离心后血液分为5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红细胞层（紫黑红色）、带氧红细胞层（鲜红色）。读取还原红细胞层柱高的毫米数，乘以0.0 1,即为每升血液中红细胞体积的升数。六、红细胞平均指数【检测原理】手工法.每升血液中血细胞比容 Het每升血液中红细胞个数RBCrcu每升血液中血红蛋白含量 Hb,、每升血液中红细胞个数 RBC一 cue每升血液中血红蛋白含量 Hb,八、M CHC=-=-（q/L）每升血液中血细胞比容 Het【参考值】如表不同人群红细胞指数的参考范围M C V (f l)M C H (p g)M C H C (g/L)新生儿8 6 1 2 02 7 3 62 5 0 3 7 01-3 岁7 9 1 0 42 5 3 22 8 0 3 5 0成人8 0 1 0 02 6 3 43
