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1、 名词解释植物组织培养：是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程。培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。污染：在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。褐变：在组培过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢而死亡的现象。玻璃化：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。脱分化：已有特定结构与功能的植物组织，在一定的条件
2、下，细胞改变原来的分化状态，失去原来的结构和功能，转变为具有分生能力的细胞，这个过程称为脱分化。再分化：在愈伤组织生长到一定阶段后即可通过更换培养基或改变培养条件，诱导促使其中的“芽点”或“原始胚状体”逐渐发育成一个幼小的植物体，这一过程就叫做再分化。愈伤组织：植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经脱分化等一系列过程，转变为分化细胞，继而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。驯化：开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象称为“驯化”。种质：亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。植物种质保存：利用天然或人工创造的适
3、宜环境，使个体中含有的遗传物质保持其遗传完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。常温保存：在常温（205）OC条件下，通过改变培养基中某些营养物质的浓度，改变培养的环境条件，可达到种质保存的目的。低温保存：低温保存也称为缓慢生长保存，是通过改变培养基和环境条件使培养基的生长降到最低限度，又不致死亡，以达到延长保存时间的目的。超低温保存：也称为冷冻保存，主要是指在液氮的超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜的条件下细胞可迅速繁殖，再生出新的植株，并保持原来的遗传特性。1、 简述植物组织培养技术的主要特点。（1） 基础理论 植物组培的基础理论是植物细胞全能性的理论，即每个细
4、胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件适合的情况下能够发挥该物种的各种功能和具有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。（2） 技术特点 无菌培养和外植体培养（3） 生产特点 不占用耕地，生产不受季节控制 周年连续生产，不受灾害天气和病虫害限制 生长环境可人工控制并人为创造2、 植物组培的意义和作用主要有哪些？（1） 培育新品种的有效手段（2） 种质资源保存的有效方法（3） 去除病毒、真菌和细菌等病害和无性系的快速繁殖（4） 促进有机物的生产和生理学的研究3、 简述通用实验室的构成和用途。 此区包括药品储存室、洗涤室、培养基配制室和灭菌室等。（一） 药品储存室 药品储存室主要存放组织培养常用的
5、各种化学试剂，如无机盐、有机物、生长调节剂、消毒剂及各种生化试剂等。（二） 洗涤室 洗涤室用于清洗各种培养器皿、用具及培养材料等。（三） 培养基配制室 培养基配制室用于培养基的配制、分装、封口，以及培养基灭菌前暂时存放。（四） 灭菌室 灭菌室用于培养基、器皿、工具的灭菌消毒工作。4、 接种室包括哪些设备和用具？ 接种室又称无菌室，是进行菌种分离和接种的专用房间，室内安装一空调，使室温可控，接种室外面设缓冲间门不宜对开，最好安装滑动门窗，接种室内的地面和墙壁要求光滑洁净，室内根据要求配置一定数量的超净工作台、接种用的小推车以及接种工具和消毒用的乙醇、酒精灯等，室内和缓冲间装紫外线灯和日光灯。5、
6、 培养设备是什么，主要包括哪些？培养设备是指专为培养物创造适宜的光、温、水、气等条件的设备，包括：空调器、定时器、恒温器、增湿机或去湿机、培养架、摇床或旋转床、光照培养箱、照度计及温、湿度计。6、 简述一个标准组培实验室应具备设施。（1）玻璃器皿和其他实验器皿的清洗和储存（2）培养基的制备、灭菌和存放（3）植物材料的无菌操作（4）将接种材料培养在适宜的温度、湿度和光照条件下（5）培养材料的细胞学及解剖学观察、实体照相、切片观察7、 玻璃器皿的清洗的总体要求、标准和不同玻璃器皿的清洗方法。(1)总体要求：有机物、油脂等污物去掉（2）标准：瓶壁透明发亮，内外碧水膜均一，不形成水珠（3）不同器皿的清
7、洗 新器皿1%稀HCl浸泡12h，再用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗1遍，晾干后备用 用过器皿 先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用温肥皂水或洗洁精洗净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1次，晾干后备用 污染器皿 在121OC高温蒸汽灭菌30min后，倒去残渣，用清水冲洗，蒸馏水，晒干，有菌斑用毛刷刷净，再用清水冲洗干净，浸泡于浓的重铬酸钾洗涤液中，浸泡2小时，清水冲洗后用蒸馏水洗，晾干8、 组织培养工厂有哪些厂房和场地组成？各自的功能和作用是什么？组培育苗工厂一般划分为以下几个生产车间：培养瓶清洗车间、培养基母液调配车间、培养基制备车间、无菌操作车间、培养车间、炼苗温室和苗圃。（1）
8、 培养瓶清洗车间 可承担大量的培养器皿如三角瓶、试管、培养皿等的洗涤与试管苗出瓶工作。（2） 培养基母液调配车间 已知的培养基组成成分不下10种，为了减少工作量，提高工作效率，在配制培养基时，一般先配成比所需浓度高10100倍的母液，配制使用时可按比例稀释。（3） 培养基制备车间 完成培养基配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。（4） 无菌操作车间 也称接种车间，是组培工厂最核心和关键部分。（5） 培养车间 将接种的材料在人为控制温度、湿度和光照等条件下进行培养生长的场所。（6） 炼苗温室和苗圃 炼苗温室 创造适宜温度条件 苗圃 直接向社会提供各种良种壮苗，可根据市场信息、林业生产等需要灵活安排各
9、种林业苗木、观赏花卉等的育苗计划。9、 组织培养工厂有哪些主要设备？这些设备各有什么作用？（1）超净工作台 是一种提供局部无尘无菌工作环境的单向流型空气净化设备。（2）高压蒸汽灭菌锅 最基本的灭菌装备，用于培养基的灭菌。（3）培养架 摆放大量培养物，以利于大量生产的需要。（4）照明光源 补充植物光合作用的需要。10、 培养基的成分主要有哪些？主要包括5大类：无机养分、有机养分、植物生长调节物质、糖（碳源）以及介质或载体（纸桥或琼脂等），此外还含有大量的水分，可提供植物所需的碳、氢、氧，配制培养基时一般用离子交换水、蒸馏水或重蒸馏水。11、 什么是外植体？如何进行外植体的选择？外植体是指第一次接
10、种用的植物材料。（1） 选择合适的部位 木本植物、较大的草本植物采取茎段，本身矮小或缺乏显著的茎的草本植物采用叶片、叶柄、花葶或花瓣等作外植体，满天星、勿忘我、情人草和菊花等都是带芽的材料作为外植体。（2） 取材季节合理 多年生植物生长期取材，特别是春芽 一年生植物幼嫩组织（3） 考虑器官的生理状态和发育年龄 幼嫩年龄的组织器官更适于组培（4） 选择合适大小的外植体 0.51cm（5） 选择健壮的植株 （6） 选择优良的种质 （7） 选择合适的植物种类 双子叶单子叶、草本木本12、 外植体的接种主要有哪些技术步骤？（1） 在接种前4h用甲醛熏蒸接种室，并打开室内紫外灯进行灭菌。（2） 在接种前
11、20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯。（3） 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等。（4） 上工作台后，用乙醇棉球擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面。（5） 先用乙醇棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干。（6） 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等。（7） 接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌1次。13、 简述培养基配制的主要技术步骤。将已配种好的各种母液按顺序排好，根据母液倍数或浓度计算和吸收相应量的各种母液和生长调节物质；计算和称取琼脂
12、和蔗糖。由于琼脂较难溶解，所以先在烧杯或量杯中放入一定量的水，加入琼脂，在电炉上加热并不断搅拌，使之溶解。按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物和生长调节物质母液的顺序倒入已融化的琼脂中，继续加温，不断搅拌，使之均匀溶解。若母液在贮藏过程中产生沉淀或结晶，或是变色，则不能使用，应重新配制。加入蔗糖，待蔗糖溶解后，加水定容至所需体积。调整培养基的pH。大多数的园林植物都要求在pH5.65.8的条件下进行组织培养。一般用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH调节。培养基的分装：一般占培养容器的1/41/3为宜。14、 外植体为什么褐变？如何防止其褐变？（1） 原因 由于外植体中的酚类化合物与多
13、酚氧化酶作用被氧化形成褐色的醌类化合物，醌类化合物在酪氨酸酶的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，导致组织代谢紊乱，生长受阻，最终逐渐死亡。（2） 措施 正确选择外植体 选择适宜的培养基 创造合适的培养条件 连续转移15、 配制母液的原则。（1） 相同类型试剂混合（2） 容易形成沉淀的药剂要分开（3） 母液浓度适宜（4） 用量认真计算核对（5） 药品准确称量16、 用于外植体灭菌的常用药剂有哪些？各自特点如何？最常用的是次氯酸钠，所需的灭菌时间稍长，但性质比较温和，对植物材料杀伤较轻，比较灭菌的材料经常用它，但灭菌的彻底程度不如氯化汞，使用质量浓度2%，灭菌时间5
14、30min。氯化汞相对灭菌效果最好，但必须较严格地掌握灭菌时间，并需多次无菌水冲洗才能洗脱表面附着的残液，否则植物材料易产生毒害或受到强烈抑制，使用质量浓度0.11%，灭菌时间530min。乙醇 使用体积分数7075%，灭菌时间0.22min。17、 各种植物组织器官的灭菌方法。外植体消毒程序备注前处理消毒冲洗茎段自来水冲洗后，70%乙醇中浸泡数秒2%次氯酸钠溶液中浸泡1530min无菌水冲洗34次以茎段或顶芽为外植体叶片自来水冲洗后，70%乙醇中浸泡数秒0.1%氯化汞溶液中浸泡1min，再在2%次氯酸钠溶液中浸泡1530min无菌水反复冲洗，吸干过多的水分以叶片或叶柄切段为外植体器官自来水冲
15、洗后，70%乙醇中浸泡数秒2%次氯酸钠溶液中浸泡2030min无菌水冲洗34次，无菌滤纸吸干水分以芽眼或内部器官为外植体果实70%乙醇中浸泡数秒2%次氯酸钠溶液中浸泡10min无菌水冲洗34次培养幼胚获得植株或取果肉为外植体种子70%乙醇中浸泡数分钟，无菌水冲洗10%次氯酸钙浸泡2030min，再用1%的溴水浸泡5min无菌水冲洗34次，无菌滤纸吸干水分以萌芽的幼苗各部位为外植体18、 组培中污染原因有哪些？如何预防？（1） 微生物细菌感染 材料带菌或培养基灭菌不彻底 操作人员不慎 工作人员使用了未经充分灭菌的工具及呼吸时呼出的细菌，或手接触材料或器皿边缘，使微生物落入材料或器皿 器械环境 周围环境不清洁或空气不洁净，灰尘很多，或超净工作台的过滤装置失效，培养用器皿口径过大，瓶口边缘污染真菌（2） 防止材料带菌 外植体灭菌 玻璃器皿的灭菌 金属器械灭菌 布质制品灭菌 操作室培养室 操作人员严格按照无菌操作规范操作19、 玻璃化的原因及预防措施。（1） 激素浓度 高浓度的细胞分
