《综述：高效液相色谱法的应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《综述：高效液相色谱法的应用（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、综述：高效液相色谱法的应用背景：液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,通过改进填料的 粒度及柱压,在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压 输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化,这种 色谱技术被称为高效液相色谱法。为解决日益复杂的分析任务，多维液相色谱和联用技术得到了快速发展，在HPLC中迅 速发展起来全二维液相色谱技术，如阳离子交换色谱和反相液相色谱联用已在蛋白质组学研 究中发挥了重要作用。HPLC已实现与质谱或核磁共振联用，在解决复杂组成物质的结构分 析中，已成为重要工具。现在 HPLC 经历
2、近 40 年的发展，色谱工作者可对任何类型的分离提供适用的色谱柱及 相应的分离条件，并可在短的时间内，利用计算机提供的软件计算程序，获得可包含40 个 组分的优化完全分离。现在除低沸点化合物使用GC分析外，其他样品都可用HPLC进行分 析。但随着质谱分析技术的快速发展，可以预见质谱分析将在当代发展成为继色谱分析之后 的，一种通用的分离和分析方法。高效液相色谱法的应用：1. 高效液相色谱法在食品安全中的应用在食品检测中应用较广泛的是高效液相色谱法 (HPLC) , 近几年发展起来的高效液相色 谱-质谱联用技术(HPLC- MS),集液相色谱对复杂基体化合物的高分离能力和质谱独特的选 择性、灵敏度
3、、相对分子质量及结构信息于一体而广泛应用于食品检测方面, 为食品工业中 原材料筛选、生产过程中质量控制、成品质量检测等提供了有效的分析检测手段。(1) 食品中残留农药的检测HPLC-MS 日益广泛地应用于不同类型兽药, 农药及毒素类有毒有害物质的检测 分析, 与其他液相色谱应用不同的是, 食品及农产品的残留分析对灵敏度、重现性与 选择性的要求非常高，常常需要在复杂的基质中检测ppb级甚至更低浓度水平的痕 量残留物质。若想达到上述目标, 不仅需要良好的样品前处理手段来净化复杂的食 品及农产品本底，浓缩目标成分，而且需要选择高性能、高灵敏度的HPLC或HPLC/MS 系统进行检测分析1 。韩红新、
4、吴莉宇等2 应用 HPLC- MS 同时分析蔬菜中氟铃 脲、伏虫隆、虱满脲、氟虫脲4种农药残留。采用C18柱，大气压化学模式电离，多 反应离子监测方式检测, 方法对氟铃脲、伏虫隆、虱满脲、氟虫脲的检出限分别为 0.102、0.102、0.102、0.102 mg#kg- 1, 在0.105 0.15 mg # kg- 1 范围内回收率为75.12% 84.15%, 其研究结果达到农药残留分析要求, 可以满足我国在食品质量安全检测 技术方面的要求。(2) 食品中有害添加剂、违禁物质的检测HPLC-MS 只需对样品进行简单预处理, 适用于含量少、不宜分离得到或在分离 过程中容易发生变化或损失的成分
5、。因此HPLC- MS联用技术在对食品中违禁物质 和有害添加剂的分析研究中得到了广泛的应用。黄芳, 黄晓兰等建立了食品中三聚 氰胺的高效液相色谱- 质谱测定方法 3 , 用 Kromasil C18 柱( 416 mm#250 mm, 5 Lm) , 流动相: 乙腈- 0.11% 甲酸( 体积比 5：95) , 采用正离子模式的电喷雾质谱检 测，线性范围为 0.101 0.15 mg# L- 1,检出限0.101mg#L- 1( S/ N= 3),回收率为 80% 99% 。胡青等建立了减肥类保健食品中非法添加酚酞的液质联用鉴别法及高效液相 色谱含量测定法, 对减肥类保健食品中添加的酚酞以液相
6、色谱分离 , 采用离子阱质 谱进行定性鉴别，流动相为0.15%甲酸-乙腈(70B30),离子化模式为ESI( + ),阱内 击碎电压为 0.186V; 然后采用反相液相色谱对酚酞进行定量 , 流动相为水 2 乙腈 (70B30),检测波长为230 nm。结果该质谱条件下，酚酞产生M+ H +分子离子峰， 二级质谱的特征碎片离子明显, 液相色谱定量法的线性范围为0.1109 0.218 mg# L- 1, 平均回收率为 99.157% ,方法定性准确、可靠。(3) 保健食品中的有效成分检测HPLC- MS 联用技术在对保健食品功效成分进行分析时 , 可以同时得到化合物 的保留时间、在线紫外光谱、
7、分子量及特征结构碎片等丰富的信息, 具有高效快速、 准确、灵敏度高的特点, 适合保健食品中功效成分的分析。文开齐建立了高效液相 色谱2紫外2电喷雾质谱(HPLC2UV2ESI/MS)联用测定槟榔食品中槟榔碱的方法4 。 以甲醇和0.11%三乙胺水溶液作流动相，在反相C18( 5 Lm, 250 mm416 mm)柱上 梯度淋洗, 以质谱定性, 紫外定量进行检测。结果在0.12 0.20 Lg#mL- 1内峰面积和 浓度呈良好的线性关系。该方法抗干扰能力强, 可以快速、准确地测定槟榔食品中 的槟榔碱。2. 高效液相色谱法在化妆品安全性检测中的应用(1) 七种性激素的检测性激素(sex hormo
8、ne)俗名荷尔蒙，包括己烯雌酚、甲基睾丸酮、睾丸酮、 B -雌二醇、雌三醇、雌酮和孕酮等物质。近年来，含性激素的化妆品不断被开发 使用。研究表明：性激素影响人体糖、脂肪、蛋白质和盐等物质的代谢；直接作用 于皮肤，有促进毛发生长、丰乳、防止皮肤老化、除皱、增加皮肤弹性等作用。但 长期使用添加性激素的化妆品会对人体产生有害作用并有致癌危险。如雌性激素化 妆品已有报道致细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、睾丸癌和儿童性早熟等。袁金华，黄薇，查河霞，宋黎军5建立了高效液相色谱法同时检测化妆品中 七种性激素的方法。 简化了预处理步骤，提高了化妆品中7种性激素检测的准确 度、精密度。利用乙醇溶解超声分散离心过滤，
9、选择合适的色谱条件，实现 7 种 性激素的完全分离和同时检测。实验中的预处理步骤能满足测定需要，确定检测波 长为230 nm,选择流动相乙腈：水(40 : 60，体积比)，保留时间 30 min，7种 性激素组分完全基线分离，能避开杂质峰的干扰。 7 种性激素的工作曲线在 0.150.0 mg/L 的范围内呈良好的线性关系，回归方程的相关系数0.999。回收率 为84%104%，相对标准偏差为1.9%8.3%，最低检出限0.010.06 mg/L。按照本 实验预处理方法进行测定，可实现 7 种性激素组分完全基线分离和同时测定。准 确度、精密度和检出限均满足实验测定要求。(2) 八中有害物质的检
10、测 随着人们物质生活水平的提高，化妆品需求量的急剧增加，使得对化妆品质 量的检测和监管工作愈加艰巨。在化妆品卫生规范(2007 年版)中列出了1286 种 禁用物质和 193 种限用物质6。尼泊金酯(亦称对羟基苯甲酸酯)是一类常用于化妆 品的防腐剂，三氯生常用于祛痘类化妆品，氯霉素、甲基睾丸酮和己烯雌酚等物质 因具有抗菌和消炎、抗皱、抗衰老的作用，也常被添加到某些功能性化妆品中。目 前这 8 种有毒有害物质的常用检测方法有液相色谱法、气相色谱法、气相色谱质 谱联用法、分光光度法等，但一般都按照防腐剂、性激素和抗生素的类别分别检测。 为了完善和补充原有的测定方法，贾芳，王继才，李慧勇，谭建华，赵
11、田甜，席绍 峰7采用高效液相色谱法同时测定化妆品中的尼泊金甲酯、乙酯、丙酯、丁酯和 三氯生、氯霉素、甲基睾丸酮、己烯雌酚。法采用C18柱(4.6X250 mm，5 p m)；进样体积10 “L,以乙腈-水为流动相，用梯度洗脱方式，实现了对8种物质的良 好分离。小结与展望 由于具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围 宽、流出组容易收集、适用范围广等优点， HPLC 法已经广泛应用于食品、药品、化工、矿 业等各个行业。近年来随着快速高效液相色谱及衍生化高效液相色谱的发展以及普及，加上 近年来应用日益广泛的 HPLCMS 技术， HPLC 法将成为药物监测、化工检验
12、以及蛋白质、多 肽、细胞色素同工酶、激素等生物大分子分析的重要检测技术。随着仪器以及技术的不断进 步， HPLC 将被更多、更广泛的利用到更多研究领域，为科学研究做出不可估量的巨大贡献。参考文献：【1】 安蓉 1 液相色谱技术及液质联用技术在食品及农产品残留检测中的应用 现代学仪 器, 2003, ( 1)【2】 韩红新, 吴莉宇, 等 1 液质联用( ESI ) 检测蔬菜中4 种农药残留 农药, 2008, 47( 3)【3】 黄芳, 黄晓兰, 等 1 高效液相色谱 2 质谱法对饲料及食品添加剂中三聚氰胺的测定 分析测试学报,2008, 27( 3)【4】 文开齐 1 高效液相色谱/ 质谱联用法测定槟榔食品中槟榔碱的含量 中国实用医药, 2008, 3( 8)【5】 袁金华，黄薇，查河霞，宋黎军 高效液相色谱法同时检测化妆品中 7 种性激素的 条件选择及简化前处理 环境与职业医学 2010 年 8 月 第 27 卷第8 期【6】 赵同刚化妆品卫生规范(2007 年版) 军事医学科学出版社2007 年 3-99【7】 贾芳，王继才，李慧勇，谭建华，赵田甜，席绍峰 高效液相色谱法测定化妆品中8 种有毒有害物质广东化工2010年第九期第37卷p130
