还原糖和可溶性总糖

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1、(1) 试剂:葡萄糖标准液:称取80C烘至衡重的葡萄糖lOOmg,用蒸馏水定容至100mL,测定还原糖时 不用稀释,测定总糖时再稀释10倍,即100p g/ml。蒽酮试剂:蔥酮lOOmg溶于100ml稀硫酸(76m 1浓硫酸加30ml水中),贮于棕色瓶内冰箱 保存,可使用 23 周。3, 5二硝基水杨酸试剂:1g3, 5二硝基水杨酸,溶于20mL2mo1/LNaOH溶液中,加50mL 蒸馏水,再加 30g 酒石酸甲钠,溶解后用蒸馏水定容至 100mL。 盖紧瓶塞,勿使co2进入。若溶液浑浊可过滤后使用。( 2) 样品提取:称取研碎样品0.5lg放入刻度试管中,加入510mL蒸馏水(用80%乙醇

2、更好),在 80C水浴中30min, 3500转离心10min,上清液转入25ml容量瓶,洗净掺杂并定溶至刻度, 该提取液用于测定还原糖和可溶性总糖。(3)还原糖的测定Q测定还原糖的标准曲线:试剂12345671mg/ml葡萄糖标液 ( ml)00.20.40.60.81.01.2蒸馏水(ml)2.01.81.61.41.21.003, 5二硝基水杨酸2222222(ml)各试管摇匀,在沸水浴中加热5分钟,取出后立即放入冷水中,加蒸馏水定容至20mL, 混匀。以1号管为空白调零,在540nm波长下比色。以吸光度为纵坐标,葡萄糖含量为横 坐标,绘制标准曲线。葡萄糖含量按顺序分别为0、0.2、0.

3、4、0.6、0.8、1.0、1.2,单位mg。 Q样品中还原糖含量的测定吸取可溶性糖提取液2mL,置刻度试管中,加入2mL3, 5二硝基水杨酸试剂,与标 准曲线同法测定。Q计算:还原糖含量=CV/WV X100%;ts式中,C:从标准曲线上查得样品中还原糖含量(mg); Vt:样品中提取液总体积(mL); V :测定时取样体积(mL); W:样品重(mg)。注意样品重是mg(4)可溶性总糖测定Q总糖标准曲线:试剂123456100p g/ml葡萄糖标液 ( ml)00.20.40.60.81.0蒸馏水(ml)2.01.81.61.41.21.0蒽酮硫酸试剂(ml)555555加蒽酮试剂时试管最

4、好放在冷水中,并沿管壁加入,待全部加完后再混匀。将以上试管 同时放入100C水浴中准确加热10min,取出后冷却至室温后在620nm波长下测定吸光度。 以吸光度为纵坐标,糖溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。糖溶液浓度按顺序分别为: 0、 20、40、60、80、100,单位p gQ样品测定:取提取液适当稀释(1050倍)后取2mL测定,方法同标准曲线测定。Q计算结果:可溶性总糖含量=CVtn/WV 1000X100%;式中,C:从标准曲线上查得样品中葡萄糖含量(p g); V :样品中提取液总体积(mL); n: 稀释倍数;V :测定时取样体积(mL); W:样品重(mg);1000是换算系数。注意样品重是 smg

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