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1、保健食品中免疫球蛋白IgG的测定Determination of immunoglobulin content in health food1适用范围本方法规定了初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定本方法适用于初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定本方法最小检出量：2.0卩g。本方法最小检出浓度：当取样量0.1g，稀释至25mL进样量20卩L时，最小检出浓度为 0.5mg/mL本方法最佳线性范围：0.2 1.0mg/mL2 方法原理根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免 疫球蛋白IgG3 试剂3.1 pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓
2、冲液 A液3.2 pH2.5 0.05mol/L甘氨酸盐酸缓冲液B液3.3 IgG 标准贮备液：称取IgG标准品（Sigma化学公司）O.OIOOg,用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解并定容至10.0mL,摇匀，浓度为 1.0mg/mL。3.4 IgG 标准系列溶液：以 IgG标准贮备液，用 pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液稀释成含 IgG 0.2mg/mL, 0.4mg/mL, 0.6mg/mL, 0.8mg/mL, 1.0mg/mL 的标准系列。临用时配制。4 仪器和设备HPLC仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。5 分析步骤5.1试样处理：称取0.1g （精确至0.00
3、1g ）试样，用 A液稀释至25.0mL,摇匀，通过0.45卩m微孔滤膜后进样。先用5倍柱体积的重蒸水洗柱，再用10倍柱体积的A液平衡柱，进样，按洗脱程序进行洗脱522 HPLC参考条件色谱柱Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。波长：280nm移动相:A液B液进行梯度洗脱，见下表o梯度洗脱表：TimeFlowA%B%GradientmL/min00.410004.50.4100065.50.40100615.00.40100615.50.41000622.00.4100066分析结果表示6.1计算C V 100x =m 1000式中 x :试样中IgG的含量，g/100g ;m :试样的质量，g;C:被测液中IgG的含量，mg/mL；V:试样定容的体积，mL。6.2结果表示：计算结果保留三位有效数字。7技术参数允许差： 5%回收率：94.495.1%8色谱图NnfH峰Gg峰G g芒：二QCM绘 VSCW父、二、二 Ja?UZEC5
