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1、微生物标本采集、送检及处理原则一、标本采集的一般原则：1、病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。2、无菌采集应无污染，严格进行无菌操作。3、根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。4、注意在不同病程采集不同部位标本。5、采集标本时要防止传播和自身感染。二、标本的处理：1、标本保存在4C环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25C保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。2、标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。3、厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可
2、直接用抽取标本的注射器运送。I血液及骨髓标本：血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。1、采血时间及次数2、抽血部位及抽血量3、报告方式：培养5d无菌生长者报告“培养5d无菌生长”查见细菌报告菌名和药敏结果。4、菌血症、败血症的诊断标准：1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）；2）发病星期后血中抗体滴度上升。II脑脊液标本：脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。正常人的脑脊液是无菌
3、的检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。1、涂片检查：（1）一般细菌涂片检查：例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。（2）结核分枝杆菌涂片检查（3）新生隐球菌涂片检查2、分离培养3、报告方式：培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。Ill呼吸系统标本：（一）痰标本下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道
4、的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有上呼吸道感染。常见的病原菌主要有肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌和军团菌。1、标本的采集时间2、标本采集方法：（1）自然咳痰法（2）气管镜下采集法（3）气管穿刺法（4）结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液以提高阳性检出率。3、涂片检查：（1）一般细菌涂片（2）结核分枝杆菌涂片（3）放线菌及诺卡菌涂片4、培养：（1）培养标本的选择：应选择粘液痰作涂片。（2）痰标本培养前处理:用无菌盐水将痰洗涤3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6）
5、,37C水浴90min,使痰液均质化后备用。（3）分离培养5、报告方式：痰标本培养24小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告“正常菌群”。查出的致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌的量化指标。（二）咽拭标本正常咽拭有多种上呼吸道的正常菌群（如草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致病菌提示上呼吸道有细菌感染（如急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）常见的病原菌主要有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、微球菌和棒状杆菌等）。1、涂片检查（先培养后涂片）。2、分离培养3、报告方式：同痰标本检查。W穿刺液标本穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等。正常穿刺液是无菌的，若从患者穿刺液
6、中查见致病菌或条件致病菌提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠挨希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌多见。1、涂片检查（先接种后涂片）2、分离培养：（1）普通培养（2）厌氧培养（3）结核菌培养3、报告方式：培养24h无细菌生长，报告“培养24h无细菌生长”查见细菌，报告菌名和药敏结果。V泌尿、生殖道标本（一）尿液标本中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数105/m1,提示感染（膀胱炎，
7、肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。1、中段尿标本采集法2、涂片检查：（1）一般细菌及淋病奈瑟菌（2）念珠菌（3）结核分枝杆菌3、一般细菌培养：如培养2d无细菌生长，即可弃去。（1）倾注平板法（2）平板接种环法（3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001m1,则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数105/m1”4、特殊培养：（1）淋病奈瑟菌培养（2）厌氧菌培养（3）结核分枝杆菌培养5、报告方式：培养24h细菌生长，报告“24h无细菌生长”查见细菌，报告菌名及其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。（二）生殖道标本正常的内生殖器
8、是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄生。查见病原菌提示有细菌感染。常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形杆菌等。1、涂片检查：革兰染色镜检2、分离培养：（1）普通培养（2）淋病奈瑟菌培养（3）阴道加特纳菌培养（4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。“粪便标本正常情况下肠道中有多种细菌。引起感染性腹泻的病原微生物有：（1）细菌性：产毒素型腹泻、侵袭型腹泻、食物中毒、慢性腹泻；（2）真菌性；（3）病毒性。1、标本采集：（1）自然排便采集；（2）直肠试子。2、涂片检查：粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染
9、色性和形态无法分辩是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。3、养：（1）沙门-志贺菌培养（2）致病性大肠埃细菌培养（3）霍乱弧菌培养（4）副溶血弧菌培养（5）小肠结肠炎耶尔森菌培养（6）真菌培养（7）菌群失调的细菌学检验4、报告方式：W脓液及创伤感染分泌物标本化脓性感染可由单种或多种细菌引起。常见病原菌主要有金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌和结核分枝杆菌、诺卡菌，以及梭杆菌和拟杆菌等。1、标本采集：（1）开放性脓肿和脓性分泌物；（2）大面积烧伤的创面分泌物；（3）封闭性脓肿2、涂片检查：根据形态和染色特点，可报告“查见革兰X性细菌，形似XX菌”或报告“未查见细菌”。3、养：1）普通培养2）厌氧菌培养3）嗜血杆菌及奈瑟菌培养4）结核分枝杆菌培养5）真菌培养4、报告方式：查见致病菌，报告菌名和药敏结果。
