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1、Siemens Advia 系列生化仪参数详解本详解主要针对的是市场上常见的四种西门子机型：ADVIA1200/1650/1800/2400。大致分为五个章节：简介、基本参数介绍、读点前移、前带监测、参数设置。一、简介：ADVIA1650是最早进入中国的拜耳生化仪，虽然师出日本，也是日本电子制造，但还是能看出拜耳的设计理念在里面。后来拜耳被西门子收购，ADVIA生化也保留了下来。ADVIA系列生化仪都是将ISE作为标配安装，ADVIA1200生化速度是800测试每小时，ISE400测试每小时；ADVIA1650和升级版1800的生化速度都是1200测试每小时，ADVIA2400的生化速度是18
2、00测试每小时。Advia系列的操作控制软件都大同小异，几乎没有什么本质上的变化，所以延续性较强。加上西门子特有的流水线兼容性，使ADVIA系列的生命力变得异常顽强，在国内流水线市场里占据相当大的份额。在ADVIA老版本的程序中，是支持四种试剂的，也就是R1、R2、R3和R4；但在后续版本中，四种试剂变为2种，只有R1和R2，这一点厂家并没有说明为什么。所有的Advia系列，都是两个试剂盘，两个试剂针，反应盘是单盘，塑料反应杯，一根样本针。除ADVIA1200外，都有一个稀释盘和稀释样本针，稀释样本针将原始样本加入到稀释样本盘中，按照最高可达1:75的比例进行样本稀释，然后通过样本针将稀释后的
3、样本转移到反应盘中。同样，在反应盘上也可以进行最高1:75的样本稀释，这样二者相乘，样本的稀释比例高达1:5625。稀释样本盘也是塑料杯，有自己单独的搅拌器、冲洗站。ADVIA的试剂也可以进行稀释，所以节省试剂。但由于设计理念的关系，其孵育介质有孵育油，也就是油浴。3M生产的孵育油价格较贵，而且需要半年更换。除常规的清洗剂外，反应杯空白比色也需要单独的活化剂，加上稀释样本或试剂用的生理盐水，总体下来ADVIA的耗材较多，而且总成本也不少。所有的ADVIA系列都是R1+S+R2方式。反应时间可选择：3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、15分钟、长程反应21分钟和31分钟。ADVIA1200没有稀释
4、样本盘，所以样本直接被转移到反应杯上。加样速度4.5秒，读点13.5秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点42个，R2在19点前加入。反应杯总数231个，反应体积为80-430ul，R1和R2加入体积范围在5-300ul之间。反应时间可选择：3分钟（最后读点14）、4分钟（最后读点18）、5分钟（最后读点21）、10分钟（最后读点42）、15分钟（最后读点63）、长程反应21分钟和31分钟。ADVIA1650和1800加样速度为3秒，读点时间是6秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点98个，R2在49点前加入。反应杯总数221个，反应体积为80-300ul，R1和R2加入体积范围在15-1
5、50ul之间。ADVIA2400加样速度为2秒，读点时间是14秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点41个，R2在22点前加入。反应杯总数340个，反应体积为60-180ul，R1和R2加入体积范围在10-100ul之间。二、基本参数介绍：主读点：M.DET.Pm/n 也就是Main Detect point的简写，m和n是主读点区的起止点，0mn，也就是说m和n两点是在启动反应后的两个点，m点的读点必须设置，n可以不设置（填写0就是不设置），双试剂中是指R2加入之后的一组时间点，据此计算吸光度速率或平均值用于浓度计算；子读点：S.DET.Pp/r。也就是subsidiary Detectp
6、oint的简写，p和r是子读点区的起止点，0pr,r点可以不设置。子读点是指需要读取反应空白的区域，一般指启动反应之前的试剂和样本空白，在双试剂中是指R2加入前的一组时间点。读点：N，在终点法反应中，读点不小于三个，如果小于三个，系统自动前移满足三个。在速率法当中，读点不能少于六个，如果小于六个，系统自动前移满足六个。根据反应方法，子读点可以选择也可以不选择。u/d和U/D旗标：U和u表示上限，D和d表示下限，当超过小写u/d范围时，用大写U/D显示。空白：Blank（u/d U/D），这里指的是试剂空白的上下限。就是以去离子水为样本的检测，主要用来监测试剂性能，是以主读点区主波长的吸光度值为
7、基准的，当试剂的空白吸光度超过u/d上下限范围，就会用U/D显示出来，提醒操作人员注意试剂问题。试剂空白是可以选择是否进行监测的。Blank u/d的定义是，在下降速率当中，Blank u也就是空白上限为2ABS，Blankd为主读点吸光度的50%；在上升速率当中，Blank u也就是空白上限为最高主读点吸光度的150%，Blank d为主读点吸光度的50%。图1 Blank u/U/d/D 示意图修正点： E2。E2表示试剂和样本加入后的几个点的吸光度值，用来进行LIH（乳糜、黄疸、溶血等标本）或底物耗尽的监测。E2都将监测试剂空白以及样本加试剂的结果，也就是说E2=样本+R1的E2吸光度
8、减去 试剂空白的E2吸光度。读点前移：Point-Forwarding。在速率法中，高浓度样本往往很快消耗完反应物，而底物却大量存在，速率反应很快停止。当系统监测到这种情况时，会自动将主读点前移至发生速率反应的区域。在使用读点前移的技术时，需要增加一个主读点M.DET.P l，lmn。如果m和n主读点被监测到发生底物耗尽，那么自动前移读取l和m之间的读点。图2 读点前移示意图图2所示中，m和n点之间出现底物耗尽现象，由于设置了l点，所以自动将读点移至l和m之间读取。同样，l和m以及m和n之间要多于6个读点。如果判断底物耗尽，就要借助样本吸光度限制这个概念。样本吸光度限制：Sampleu/d。S
9、ample u或d只能选择一个，这是根据反应方向的不同而设定的，下降速率反应将只有Sample d，上升速率反应将只有Sample u。其要求监测R2加入之前和之后的数个读点的吸光度值，依然是主波长的吸光度值。R2加入之前的监测点就是我们前面说的E2，R2加入之后的监测点是主读点区的最后两个点，叫做选择点。E2和选择点进行计算：Sample u/d=选择点的吸光度-（E2*K）其中：E2=样本和R1的E2点吸光度值 试剂空白的E2点吸光度值K=（R1+S）/（R1+S+R2）是体积系数。当E2用于底物耗尽探测时，读点自动选取第7点，这样会避开LIH因素干扰。判断依据，在下降速率反应中，当Sam
10、ple d大于选择点吸光度时，认为是底物耗尽；在上升速率反应中，当Sample u小于选择点吸光度时，认为是底物耗尽。图3 底物耗尽示意图图3的所示中，Sample d 大于主读点区m和n最后两点的吸光度值，所以判断为底物耗尽，自动将读点前移到l和m点。这里有一个问题，如果m点也处于底物耗尽的区域怎么办？前移的结果也会不准确。所以ADVIA的读点前移技术并不是那么可靠，为了保证可靠，其采用了非常复杂的计算方式，目的只有一个，规避东芝的弹性速率法。这里简单的介绍一下弹性速率法。其原理是监测速率反应的主读点区，并根据设置的吸光度差值进行没两个相邻读点的吸光度差，当实际读取的吸光度差值小于设定的吸光
11、度差值时，就会判断为底物耗尽。而底物耗尽判断后自动将读点前移至预先设置的两个点的区域，这样可以充分避开ADVIA中的如果m点也在底物耗尽区域的可能。读点前移不在这里做详细介绍，后面有单独的章节。反应方法：有五个选择，EPA、RRA、2PA、CRA和IMA；EPA反应方法：就是常说的终点法，可以是一点终点法，也可以是两点终点法。一点终点法时，子读点p和r无效，填为0；两点终点法时，子读点p和r要填写，而且要在R2加入之前。终点法读点要求至少三个点，不足三个点时，系统自动前移补足。图4 EPA终点法示意图RRA反应方法：也就是常说的速率法，可以是单速率法，也可以是双速率法。采用单速率法时，读取主读
12、点区的m和n的区域进行每分钟速率计算。采用双速率法时，还要读取R2加入之前的子读点区p和r的区域进行每分钟速率计算，然后主读点和子读点相减再进行浓度计算。使用速率法时，系统将自动进行E2吸光度计算。但在参数设置，可以选择是否选择E2 corre ，也就是是否选择E2修正。用DO或Not Do选择。在速率法当中，Blank u/d必须输入，并且可以选择在R2加入前一点插入检查点CHECK D.P.I，此检查点将于试剂空白数据进行比较，借以判断试剂是否有问题。但此法仅在下降速率法和IMA方法中使用。如果不使用，则填写0。当然，在速率法当中，也可以选择底物耗尽监测而增加的主读点M.DET.P.l。图
13、5 RRA速率法示意图2PA反应方法：也就是常说的两点速率法。也是速率法的变种，区别在于不进行主读点间的两个点的线性监测。其余与速率法完全一样。图6 2PA两点法示意图CRA反应方法：官方说法为随着时间的变化反应接近恒定，曲线由最小二乘法拟合，也有称为固定点法。大致意思是选择读点区的两个点进行吸光度值得最小二乘法计算。是根据时间和吸光度的数值进行计算的，无论是速率法还是终点法均可采用。当子读点被采用时，p=r0，或p0，r=0时，是速率法，速率计算是根据两点间曲线的正切线；当pr时，用两点间连接直线进行计算。当不采用子读点时，为终点法，采用最大时间吸光度和空白吸光度进行计算。说实话，真不知道这
14、个方法是做什么项目的，中文没有解释，英文的解释很少，也没发现实例。图7 CRP固定点法示意图IMA反应方法：也就是免疫比浊法。是采用最小二乘法计算的速率法。对于R1的加入量太少，无法进行E2计算时，这个方法就变得有用了。也就是说，在很多免疫比浊项目里，R1的加入量往往小于R2的量，所以引发了一系列的计算和判别上的困难，IMA就是为了解决这个难题的。样本和第一试剂加入量太少，就无法进行E2的计算，没有E2就无法进行前带监测和底物耗尽的监测，所以在 IMA方法中R2之后插入监测点Check D.P.I,用于弥补R1和S的不足。采用IMA方法设置检查点后，系统自动计算limit values值（设备
15、默认0.003），此法对浑浊样本的处理很有成效，所以用在免疫比浊项目上。图8 IMA免疫比浊法示意图图9 IMA应用示意图IMA的其它使用方法与速率法一样，仅限于R1+S低于反应杯最小容量的测试项目里。如果不存在这样的项目，那么即便是免疫比浊项目，也应该采用常规速率法或终点法。定标方法：因数定标、线性定标和非线性定标；在参数界面里的Calc mthd，也就是计算方式里，有ABS和STD/MSTD选择，表示吸光度和单点定标/多点定标计算。在ADVIA的所有机型里，定标中的零浓度点用试剂空白替代，所以在定标之前要做试剂空白，如果不做试剂空白，仪器会认为试剂空白就是原点。注意这个差别，与奥林巴斯的不同。奥林巴斯的试剂空白和零浓度校准点是两个概念，而在adiva里合二为一。参数界面里的Formula，也就是公式才是选择定标方法的地方。因数定标：如果在Calc mthd里选择ABS，那就意味着你要采用因数定标，那么在Formula里只有一个可以选择，那就是Linear,因数定标只能用于线性定标。因数定标也就是直线方程里的Y=KX+B中的K
