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1、_归纳总结汇总_ - - - - - - - - - 现代分子生物学习题及答案 一、填空题 1 基因工程是 70 岁月进展起来的遗传学的一个分支学科；2基因工程的两个基本特点是：1分子水平上的操作,2细胞水平上的表达3基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的挑选；载体的挑选 4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的 限制性酶切图谱；5限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原就命名的,第一个大写字母取自 属名的第一个字母,其次、三两个字母取自 _种名的前两个字母,第四个字母就用 株名 表示；6部
2、分酶切可实行的措施有：间； 3增大反应体积等；1削减酶量； 2缩短反应时7第一个分别的限制性内切核酸酶是 EcoK ；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是 _ EcoRl；8限制性内切核酸酶 BsuRI 和 Hae的来源不同, 但识别的序列都是 GGCC,它们属于 异源同工酶 ；9DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 _枯草杆菌蛋白酶 切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为 76kDa 的大片段,具有两种酶活性：1 5-3合成酶的活性 ； 2 3-5外切核酸酶 的活性；10为了防止DNA 的自身环化,可用碱性磷酸酶 去双链DNA_ 5 端的磷酸基团 ；11EGTA 是_Ca
3、2+_离子螯合剂；12测序酶是修饰了的T7 DNA 聚合酶,它只有_ 5-3合成酶的活性,而没有3-5外切 酶的活性；13切口移位 nick translation法标记 DNA 的基本原理在于 利用 DNA 聚合酶 I 的_5一 3外切核酸酶 和 5一 3合成酶 的作用；_精品资料_ 14欲将某一具有突出单链末端的双链DNA 分子转变成平第 1 页,共 31 页末端的双链形式, 通常可采纳 _ S1 核酸酶切割 或 DNA 聚- - - - - - -_归纳总结汇总_ - - - - - - - - - 合酶补平 ；15反转录酶除了催化DNA 的合成外,仍具有_核酸水解酶 H 的作用,可以将
4、DNA- RNA 杂种双链中的 _RNA_ 水解掉；16基因工程中有3 种主要类型的载体：质粒 DNA ,病毒DNA ,质粒和病毒DNA 杂合体 ；17就克隆一个基因 必需包括三个部分：DNA 片段 来说,最简洁的质粒载体也 _复制区：含有复制起点； 挑选标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入 ；另外,一个抱负的质粒载体必需具有低分子量；18一个带有质粒的细菌在有EB 的培育液中培育一段时间后,一部分细胞中已测不出质粒,这种现象叫 质粒排除 或治愈 ；19pBR322 是一种改造型的质粒,它的复制子来源于pMBl,它的四环素抗性基 因来自于 pSCl01,它的氨苄青霉素抗性基因来
5、自于pSF2124R 质粒 ；20YAC 的最大容载才能是 才能是1000kb,BAC 载体的最大容载 300kb ；复制的质21pSCl01 是一种严紧粒；22pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体；pUC 系列的载 体是通过 pBR322 和 M13两 种 质 粒 改 造 而 来 ； 它 的 复 制 子 来 自pMBl,Amp DNA抗性基因就是来自转座子；23噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原 因：一是 它在细菌中能够大量繁衍,这样有利于外源的扩增 ； 二是 对某些噬菌体 如噬菌 的遗传结构和功能研究得比较清晰,其大肠杆菌宿主系统的遗传也讨论得比较详 尽；24 野生型的
6、M13 不适合用作基因工程载体,主要缘由是_精品资料_ 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和挑选标记 ；第 2 页,共 31 页25黏粒 cosmid 是质粒噬菌体杂合载体,它的复制子- - - - - - -_归纳总结汇总_ - - - - - - - - - 来自 质粒 、COS 位点序列来自克隆片段达到45 kb；噬菌体 ,最大的26野生型的 噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体,原因是： 1 分子量大, 2酶的多切点, 3无挑选标记27噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA 共同构成的,其中来自质粒的主要结构是 复制区 ,而来自噬菌体的主要结构是IG 区；28噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外
7、源 DNA 片段后,总的长度应在噬菌体基29因组的75 105的范畴内；EDTA 和在分别 DNA 时要使用金属离子螯合剂,如柠檬酸钠等,其目的是螯合 Mg 2+离子,抑制核酸酶的活性；30用乙醇沉淀 DNA 时,通常要在 DNA 溶液中加人单价的阳离子,如 NaCl 和 NaAc ,其目的是 中和 DNA 分子的负电荷,增加 DNA 分子间的凝结力 ；31 引物在基因工程中至少有 4 个方面的用途：1合成探针； 2合成 cDNA ；3用于 PCR 反应； 4进行序列分析32Clark 发觉用 Taq DNA 聚合酶得到的 平末端,而是有一个突出PCR 反应产物不是碱基末端的双链 DNA 分子
8、；依据这一发觉设计了克隆 PCR 产物的 T载体 ；33在 cDNA 的合成中要用到 其次链合成时形成的发夹环S1 核酸酶,其作用是切除在34乙醇沉淀 DNA 的原理是 乙醇使 DNA 分子脱水 ；35假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必需考虑其表 达的三个基本条件：1保持正确的可读框2能够使其转录的启动子3具有翻译的起始和终止信号36受体细胞的感受态是接受外源 DNA 的生理状态 _；37DNA 重组连接的方法大致分为四种：接； 2平末端连接； 3同聚物接尾连接；1黏性末端连 4接头连接法 ；_精品资料_ - - - - - - -第 3 页,共 31 页_归纳总结汇总_ - - - - -
9、 - - - - 38将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组 DNA 克隆 _,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个 基因组 DNA 文库 ；39将含有一个 mRNA 的 DNA 拷贝的克隆称作一个 _cDNA克隆 ,源于同一批 RNA 制备物的克隆群就构建了一个 _cDNA 文库 _；40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用_聚合酶链式反应PCR可以将这段DNA进行百万倍的扩增；41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 42 C _时摄人 DNA ；0 C 时吸附 DNA, 42目前,在重组体的挑选中,已经进展了很多构思奇妙、具有极高精确性的挑选方法；大致可以分为：1
10、遗传学方法；2物理挑选法；3核酸杂交法； 4表达产物分析法等；43PCR 扩增挑选重组体是比较简便的挑选方法,它适合于 _插入外源片段的种类较多,大小又极为相像的重组体的筛 选；44 核酸杂交探针可分为两大类：DNA 探针和 RNA 探针；其中 DNA 探针又分为 _基因组 DNA 探针和 cDNA 探针；45假如用限制性内切核酸酶切割双链DNA 产生 5 突出的黏性末端,就可以用 _ Klenow 酶填补的方法 _进行 3 末端标记；假如用限制性内切核酸酶切割 DNA 产生的是 3 突出的黏性末端,可以用 _ T4DNA 聚合酶 进行 3末端标记；46单链 DNA 探针的标记可以采纳以下方法
11、：1用 M13 噬菌体载体合成单链 DNA 探针；2从 mRNA 反转录合成单链 cDNA 探针； 3用不对称 PCR 合成单链 DNA探针；47依据 Northern 杂交的结果可以说明：了转录 _；外源基因是否进行48差示杂交 differential hybridization 技术需要 _两种不同 的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这_精品资料_ - - - - - - -第 4 页,共 31 页_归纳总结汇总_ - - - - - - - - - 些基因 ；49RNA 分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一张硝酸纤维素膜
12、尼龙膜 上,同一放射 DNA 探针杂交的技术称_ Northern 印迹 _；50在 _ Southern 印迹 _技术中, DNA 限制性片段经凝胶电泳分别后,被转移到硝酸纤维素膜 与放射性的 DNA 探针杂交；51可用 T4 DNA 聚合酶进行平末端的或尼龙膜 上,然后 DNA 标记,由于这种酶具有 _53 合成酶 _和 _35 外切核酸酶_的活性；52依据外源片段供应的遗传表型挑选重组体,必需考虑三3种因素 ：1克隆的是完整的基因；2使用的是表达载体；不含内含子 ；53Northern 印迹和 Southern 印迹有两点根本的区分：1印迹的对象不同： Northern 是 RNA ,S
13、outhern 是 DNA ；2电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条 件；54放射免疫挑选的原理基于以下三点：1抗体能够被吸附 到固体支持物上； 2同一个抗原可以同几种抗体结合；3抗体能够被标记 二、挑选题 单项或多项 1因讨论重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是 bW Gilbert cP Berg aA Kornberg dBMcClintock 23有 第一个作为重组DNA 载体的质粒是 apBR322 bColEl cpSCl01 dpUCl8 关于宿主掌握的限制修饰现象的本质,以下描述中只 不太恰当；a由作用于同一DNA 序列的两种酶构成b这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 c这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰_精品资料_ - - - - - - -第 5 页,共 31 页_归纳总
