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1、第七章 寄生虫病诊断第一节 病原学诊断方法一、粪便虫卵检查法一、粪便虫卵检查法1.直接涂片法直接涂片法 direct smear method 2.漂浮集卵法漂浮集卵法 flotation method 3.沉淀集卵法沉淀集卵法 sedimentation method4.麦氏计数法麦氏计数法 MacMaster method5.毛蚴孵化法毛蚴孵化法 是诊断日本血吸虫及东毕吸虫的方法是诊断日本血吸虫及东毕吸虫的方法之一。之一。6. 粪便培养与幼虫分离法粪便培养与幼虫分离法圆线虫目所属线虫种类圆线虫目所属线虫种类很多很多，其虫卵在形态上非常，其虫卵在形态上非常相似相似，很难区别。有时，很难区别。
2、有时为了为了区别这些线虫的种类区别这些线虫的种类，常，常将含有虫卵的粪便将含有虫卵的粪便加以培养加以培养，待其中虫卵发育，待其中虫卵发育成为成为幼幼虫时再检查，根据幼虫形态上的差异，加以鉴别。虫时再检查，根据幼虫形态上的差异，加以鉴别。最常用的方法是在最常用的方法是在培养皿培养皿底部加草纸或滤纸底部加草纸或滤纸1张张，而，而后将欲培养的后将欲培养的粪便粪便加水调成硬糊状，加水调成硬糊状，塑成塑成半球形，放半球形，放于皿内于皿内的纸的纸上，并使半球形粪上，并使半球形粪球的球的顶部略高出平皿边顶部略高出平皿边沿沿，使，使加盖时与皿盖相接触。加盖时与皿盖相接触。将此皿置将此皿置25温箱中，温箱中，注
3、意保持注意保持皿内湿度（应使底部皿内湿度（应使底部的垫的垫纸保持潮湿状态）。经纸保持潮湿状态）。经7天后天后，多数虫卵即可发，多数虫卵即可发育育成第三成第三期幼虫，并集中于皿期幼虫，并集中于皿盖上盖上的水滴中。将幼虫的水滴中。将幼虫吸出吸出置载玻片置载玻片上，放显微镜下上，放显微镜下检查。检查。有些寄生虫（如网尾科线虫），其虫卵在新排出的有些寄生虫（如网尾科线虫），其虫卵在新排出的粪便中已孵化为幼虫；类圆属线虫虫卵随粪便排出后，粪便中已孵化为幼虫；类圆属线虫虫卵随粪便排出后，在外界温度较高时，经在外界温度较高时，经5-12 h即孵出幼虫。为了提高即孵出幼虫。为了提高检出率，常将幼虫从粪便中分离
4、出来进行检查。检出率，常将幼虫从粪便中分离出来进行检查。常用的方法为常用的方法为漏斗漏斗幼虫分离幼虫分离法法 亦称亦称贝尔曼法贝尔曼法 (Baermanns technique)7. 测微技术测微技术各种虫卵和幼虫，大小通常较为恒定。虫卵或幼虫的各种虫卵和幼虫，大小通常较为恒定。虫卵或幼虫的大小可作为确定某一虫卵或幼虫的依据。虫卵和幼虫的大小可作为确定某一虫卵或幼虫的依据。虫卵和幼虫的测量需用测微器。测量需用测微器。长长1mm的直线的直线等分为等分为100小小格格,每小格等每小格等于于10 m10倍物镜，标定后倍物镜，标定后每小格是多少？每小格是多少？1 m二、体表虫体检查法寄生于动物体表的寄
5、生于动物体表的寄生虫主要寄生虫主要有蜱、螨、虱等。对有蜱、螨、虱等。对于于它们的检查，可采用它们的检查，可采用肉眼肉眼观察和显微镜观察相结观察和显微镜观察相结合合的方法。的方法。蜱寄生于动物体表，蜱寄生于动物体表，个体较大个体较大，通过肉眼观察即，通过肉眼观察即可可发现发现。螨和虱有些个体较小，螨和虱有些个体较小，常需常需刮取皮屑，于显微镜刮取皮屑，于显微镜下下寻找寻找虫体或卵。虫体或卵。三、生殖道虫体检查寄生于生殖道的虫体寄生于生殖道的虫体主要有主要有牛胎儿三毛滴虫和牛胎儿三毛滴虫和马马媾疫媾疫锥虫锥虫牛胎儿毛滴虫存在于牛胎儿毛滴虫存在于病母牛病母牛的阴道或子宫的的阴道或子宫的分泌物分泌物，
6、流产胎儿的羊水流产胎儿的羊水、羊膜、羊膜或其第四胃内容或其第四胃内容物中物中，也存，也存在于公牛的在于公牛的包皮包皮鞘内，应采集以上鞘内，应采集以上各处各处的病料寻找的病料寻找虫体。虫体。由于虫体的检定常以由于虫体的检定常以见到见到运动活泼的虫体为准运动活泼的虫体为准，故，故在在采集病料时必须采集病料时必须尽可能尽可能地避免污染，以免地避免污染，以免其它鞭毛虫其它鞭毛虫混混入病料造成误诊入病料造成误诊。采集。采集用的器皿和冲洗液用的器皿和冲洗液等应等应加热使接加热使接近体温，近体温，否则虫体否则虫体骤然遇冷会失去骤然遇冷会失去活动力活动力或死亡。或死亡。冲洗液应采用以玻璃蒸馏装置制备的蒸馏水配
7、制生理冲洗液应采用以玻璃蒸馏装置制备的蒸馏水配制生理盐水，以保证冲洗液中不含金属离子，减少金属离子盐水，以保证冲洗液中不含金属离子，减少金属离子对虫体的影响。病料采集后应尽快地进行检查。对虫体的影响。病料采集后应尽快地进行检查。由母畜采集病料，是取由母畜采集病料，是取阴道阴道分泌的透明粘液，以分泌的透明粘液，以直接直接自阴道内采取为良好自阴道内采取为良好，建议，建议用一根长用一根长45厘米，厘米，直径直径1.0厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，在距在距一端的一端的12厘米处，弯厘米处，弯成成150角，而后消毒备用。角，而后消毒备用。使用时将管的使用时将管的“短臂短臂”插入受检畜的阴道，另端接插入受检
8、畜的阴道，另端接一橡皮管并抽吸，少量阴道粘液即可吸入管内。取一橡皮管并抽吸，少量阴道粘液即可吸入管内。取出玻管，两端塞以棉球，带回实验室检查。出玻管，两端塞以棉球，带回实验室检查。收集公牛包皮冲洗液，收集公牛包皮冲洗液，应先应先准备准备100-150毫升毫升加加温到温到30-35的生理盐水的生理盐水，用，用针筒注入包皮腔。用针筒注入包皮腔。用手指手指将包皮口捏紧，用另将包皮口捏紧，用另一手一手按摩包皮后部，而后按摩包皮后部，而后放松放松手指，将液体收集于手指，将液体收集于广口广口瓶中待查。瓶中待查。流产胎儿，可取其流产胎儿，可取其第四胃第四胃内容物，胸水或腹水内容物，胸水或腹水检查检查。检查时
9、应将收集到的病料检查时应将收集到的病料，立即，立即放于载玻片上，并放于载玻片上，并防防止止材料干燥。对浓稠的材料干燥。对浓稠的阴道阴道粘液，检查前最好以粘液，检查前最好以生理盐生理盐水水稀释稀释2-3倍，羊水倍，羊水或包皮或包皮洗涤物最好先以洗涤物最好先以每分钟每分钟2000转的速度离心转的速度离心沉淀沉淀5分钟，而后以沉淀物分钟，而后以沉淀物制片检查制片检查。未染色的标本主要检查活动的虫体，在显微镜下可见未染色的标本主要检查活动的虫体，在显微镜下可见其长度略大于一般的白细胞，能清楚地见到波动膜，其长度略大于一般的白细胞，能清楚地见到波动膜，有时尚可见到鞭毛，在虫体内部可见含有一个圆形或有时尚
10、可见到鞭毛，在虫体内部可见含有一个圆形或椭圆形的有强折光性的核。椭圆形的有强折光性的核。波动膜常作为本虫与其它一些非致病性鞭毛虫和波动膜常作为本虫与其它一些非致病性鞭毛虫和纤毛虫在形态上相区别的依据。也可将标本固定，纤毛虫在形态上相区别的依据。也可将标本固定，用姬氏染液或苏木素染色后检查。用姬氏染液或苏木素染色后检查。马媾疫锥虫在末梢血液马媾疫锥虫在末梢血液中很少中很少出现，因出现，因此血液学此血液学检查检查在马媾疫诊断上的在马媾疫诊断上的用处不大用处不大。检查材料主要应检查材料主要应采取采取浮肿部皮肤或丘疹的浮肿部皮肤或丘疹的抽出抽出液，尿道及阴道的液，尿道及阴道的粘膜刮粘膜刮取物，特别取物
11、，特别在粘膜刮在粘膜刮取物取物中最易发现虫体。中最易发现虫体。采取病料时，浮肿液和采取病料时，浮肿液和皮肤皮肤丘疹液用消毒的注射器丘疹液用消毒的注射器抽取抽取，为了防止吸入，为了防止吸入血液发生血液发生凝固，可于凝固，可于注射器注射器内内先先吸入适量的吸入适量的 抗凝剂（抗凝剂（2% 柠檬酸钠生理盐水）。柠檬酸钠生理盐水）。马阴道粘膜刮取物的采取，先用阴道扩张器扩张阴马阴道粘膜刮取物的采取，先用阴道扩张器扩张阴道，再用长柄锐匙在其粘膜道，再用长柄锐匙在其粘膜有炎症有炎症的部位刮取，刮的部位刮取，刮时时应稍应稍用力，使刮取物微带血液，则其中容易检到用力，使刮取物微带血液，则其中容易检到锥虫。锥虫
12、。采取公马尿道刮取物时，应先将马保定，左手伸入采取公马尿道刮取物时，应先将马保定，左手伸入包皮内，以食指插入龟头窝中，徐徐用力以牵出阴包皮内，以食指插入龟头窝中，徐徐用力以牵出阴茎，用消毒的长柄锐匙插入尿道内，刮取病料。茎，用消毒的长柄锐匙插入尿道内，刮取病料。以上所采的病料，均可以上所采的病料，均可加适量加适量的生理盐水，置载的生理盐水，置载玻玻片上，覆以盖玻片，片上，覆以盖玻片，制制 成成压滴标本检查；也可压滴标本检查；也可制制成成抹片，用姬氏液染色抹片，用姬氏液染色后检查后检查。也可用灭菌纱布，以也可用灭菌纱布，以生理盐水生理盐水浸湿，用敷料钳浸湿，用敷料钳夹持夹持，插入，插入公马尿道或
13、母马阴道公马尿道或母马阴道，擦洗，擦洗后，取出后，取出纱布，洗纱布，洗入无菌入无菌生理盐水中，将生理盐水中，将盐水离心盐水离心沉淀，沉淀，取沉淀物检查取沉淀物检查，方法，方法同上。同上。四、血液和组织内虫体检查法1. 鲜血压滴标本检查鲜血压滴标本检查2. 涂片染色标本检查涂片染色标本检查 3. 虫体浓集法虫体浓集法涂片法虽然可以查到涂片法虽然可以查到血液中血液中的原虫，但血液中的的原虫，但血液中的虫体虫体较少时，则不易查出较少时，则不易查出虫体虫体。为此常先进行集虫，。为此常先进行集虫，再再制片检查。其操作制片检查。其操作过程是过程是采病畜抗凝血采病畜抗凝血6-7毫升，毫升，以以每分钟每分钟5
14、00转的速度转的速度离心离心5分钟，使其中大部分红分钟，使其中大部分红细胞细胞沉降。沉降。而后将含有少量红细胞，白细胞和虫体的上层血浆移而后将含有少量红细胞，白细胞和虫体的上层血浆移入另一离心管中，补加一些生理盐水，以每分钟入另一离心管中，补加一些生理盐水，以每分钟2500转的速度离心转的速度离心10分钟。取沉淀物制成抹片，按上述染分钟。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色检查。此法适用于伊氏锥虫病和梨形虫病。色法染色检查。此法适用于伊氏锥虫病和梨形虫病。其原理是锥虫和感染有其原理是锥虫和感染有梨形梨形虫的红细胞较正常红细虫的红细胞较正常红细胞的比重为轻，所以在胞的比重为轻，所以在第一次第一次沉
15、淀时，正常红细胞沉淀时，正常红细胞下降，而锥虫和感染有下降，而锥虫和感染有梨形梨形虫的红细胞尚悬浮在血虫的红细胞尚悬浮在血浆中。第二次离心沉淀时，则将其浓集于管底。浆中。第二次离心沉淀时，则将其浓集于管底。对于血液中的微丝蚴，也可用虫体浓集法。对于血液中的微丝蚴，也可用虫体浓集法。方法是采血于离心管中。加入方法是采血于离心管中。加入5%醋酸溶液以醋酸溶液以溶血。待溶血完成后，离心并吸取沉淀检查。溶血。待溶血完成后，离心并吸取沉淀检查。4. 组织内虫体检查法组织内虫体检查法有些原虫可以在动物身体有些原虫可以在动物身体的不同的不同组织内寄生。一组织内寄生。一般在般在死后死后剖检时，取一小块组织剖检
16、时，取一小块组织，以，以其切面在载玻其切面在载玻片上做成片上做成抹片抹片、触片触片，或将小块组织，或将小块组织固定固定后制成组后制成组织切片，染色织切片，染色检查检查。抹片或触片可用。抹片或触片可用瑞氏染色瑞氏染色法或法或姬氏染液染色。姬氏染液染色。泰勒虫感染的病畜常呈现局部体表泰勒虫感染的病畜常呈现局部体表淋巴结肿大。取淋巴结肿大。取淋巴结穿刺物淋巴结穿刺物，进，进行显微镜检查以寻找病原体，对本行显微镜检查以寻找病原体，对本病的早期诊断很有帮助。其方法是，病的早期诊断很有帮助。其方法是，首先将病畜保定，用右手将肿大的首先将病畜保定，用右手将肿大的淋巴结稍向上方推移，并用左手固淋巴结稍向上方推移，并用左手固定淋巴结。定淋巴结。局部剪毛，消毒，以局部剪毛，消毒，以10毫升毫升注射器和较粗的针头刺注射器和较粗的针头刺入淋巴结，抽取淋巴组织；拔出针头，将针头内容入淋巴结，抽取淋巴组织；拔出针头，将针头内容物推挤物推挤到载玻片上，涂成抹片，固定，染色，镜检，到载玻片上，涂成抹片，固定，染色，镜检，可以找到柯赫氏蓝体。可以找到柯赫氏蓝体。家畜患弓形虫病时，除家畜患弓形虫病时，除死后死后可在一些组
