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1、高良姜总黄酮抗炎镇痛作用实验探究作者：陈艳芬，江涛，唐春萍，冯毅凡，杨超燕【摘要】 目的观察高良姜总黄酮的抗炎镇痛作用。 方法采用角叉菜胶大鼠足肿胀模型、二甲苯小鼠耳肿胀模 型、毛细血管通透性实验研究高良姜总黄酮的抗炎作用；采 用小鼠热板法和扭体法观察高良姜总黄酮的镇痛作用。结果 高良姜总黄酮对大鼠角叉菜胶所致足趾肿胀、二甲苯所致小 鼠耳廓肿胀以及乙酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高等 急性炎症模型均有明显抑制作用。高良姜总黄酮对乙酸、热 刺激所诱发的小鼠疼痛均有抑制作用。结论 高良姜总黄酮 具有一定的抗炎镇痛作用。【关键词】高良姜总黄酮抗炎镇痛Abstract：ObjectiveTo stud
2、y theanti inflammatory and analgesic effects of total flavonoids from Alpinia officinarum Hance (FAO). Met hods Appl ying the rats model of foot edema induced by carrageenan, the mice model of acute auricle swelling induced by dimethylbenzene and capillary permeability induced by acetic acid, we obs
3、erved anti inflammatory effects of FAO； and analgesic effects of FAO were observed in pain models of mice induced by ace tic acid or hot plate Resu Its FAO showed evident effects on acute inflammation models of foot edema, auricle swelling and capillary permeability. And FAO had analgesic effects on
4、 the two pain models Conclusion FAO has anti inflammatory and analgesic effects.Key words：Alpinia officinarum Hance； total flavonoids； anti inflammatory； analgesic高良姜，是姜科植物高良姜Alpinia of ficinarum Hance的根茎，主产于广东、广西、福建、台湾、海南、云 南等地，具有温胃、祛风、散寒、行气、止痛的功效，临床 常用于治疗脫腹冷痛、暧气吞酸、胃寒呕吐、消化不良、急 性胃肠炎等病症。为阐明高良姜治疗胃舵痛的物
5、质基础，同 时开发新型的供临床使用的药物，通过对高良姜进行分离精 制获得了高良姜总黄酮，本实验主要探讨高良姜总黄酮的抗 炎镇痛作用，现报道如下。1实验材料1. 1药物与试剂高良姜总黄酮（总黄酮含量>；50%）,由广东药学院 实验中心提供，批号：060930，临用时以0. 5%CMC Na配成 所需浓度；阳性对照药：阿司匹林（山东新华制药有限公司 生产，批号20050302）o二甲苯（化学纯,广州化学试剂厂, 批号：0503428）；角叉菜胶（Sigma公司产品）；伊文思蓝（Sigma公司产品）；乙酸（广东光华化学厂，批号： 20051228）o1.2动物NIH小鼠（合格证号2003A021
6、）； SD大鼠（合格证号 2003A013）,均由广东省医学实验动物中心提供。符合清洁 级标准，正常饲养3d后供试。实验室温度恒定，室温24 25 C,相对湿度60%70%,每日光照12 ho1. 3仪器BS110S电子天平（Sartorius公司产品）；721分光 光度计（上海第三分析仪器厂）；毛细管放大法装置（自制）; YLS 6A智能热板仪（山东医学科学院设备站产品）。2方法与结果2. 1高良姜总黄酮对角叉菜胶所致大鼠后足跖肿胀 的影响1选取SD大鼠50只，体质量150160 g,雄性，随机 分为5组（每组10只）：0. 5%CMC Na空白对照组、阿司匹林 阳性组、髙良姜总黄酮髙、中、
7、低剂量组。每天灌胃给药1 次，空白对照组给予等容积的0. 5%CMC Na,连续3 d。试 验前将大鼠左后肢用手固定，在其踝关节处用笔作一标记， 将其浸入足容积测量装置内，浸入深度以标记处为界。从吸 管刻度处读取所需数值，计算大鼠左后足跖的正常体积(mL)o末次给药1 h后，在每只鼠左后肢足掌心向踝关节方向进针，皮下注射致炎剂1%角叉菜胶，0.1 n/只，分别计算足测定致炎后1 2、3 4、5 h大鼠左后足跖的容积，跖肿胀度，采用t检验进行统计学处理，其结果见表1。足肿胀度(niL)=肿胀后各时间点足容积(mL)肿 胀前足容积(mL)表1高良姜总黄酮对角叉菜胶所致大白鼠后足跖肿 胀的影响(略)
8、Table 1 Effect of total flavonoids from Alpinia officinarum Hance on carrageenan induced foot edema in rats与空白对照组比较：*P<0. 05, *P<；0.01结 果表明：高良姜总黄酮中剂量可明显抑制由角叉菜胶引起的 大鼠2 h的足肿胀度(P<；0. 05),高剂量可明显抑制2 h、 3 h的足肿胀度(P<；0. 05)o2.2高良姜总黄酮对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响2取NIH小鼠60只，体质量1822 g,雄性，随机 分为5组（每组12只）：0. 5%CMC Na空
9、白对照组、阿司匹林 阳性组、高良姜总黄酮高、中、低剂量组。每天灌胃给药1 次，给药容积为20 mL/kg ,空白对照组给予等容积的 0. 5%CMC Na,连续3 d,末次给药后1 h,将二甲苯50 uL 涂于小鼠右耳两面，左耳不涂作为对照，30 min后将小鼠脱 颈椎处死，用直径6 mm打孔器分别在左、右耳同一部位打 下圆耳片，精密秤重，以左、右耳片质量之差作为肿胀度， 比较各组间差异。结果见表2。结果表明，高良姜总黄酮中、高剂量能显著减轻二甲 苯致炎小鼠的耳肿胀度（P<；0.05），低剂量则作用不显著 （P>；0. 05）o 表2高良姜总黄酮对二甲苯所致小鼠耳 廓肿胀的影响（略）T
10、able 2 Effect of total flavonoids from Alpinia officinarum Hance on dimethylbenzene induced auricle swelling in mice与空白对照组比较：*P<；0. 05, *P<；0. 012.3高良姜总黄酮对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响1取NIH小白鼠60只，雄性，体质量1822 g,分组 及给药同“2.2”。连续给药3 d,末次给药后1 h,尾静脉 注射0. 25%伊文思蓝生理盐水溶液，0. 1 mL/10 g,立即腹腔 注射0.6%乙酸0. 1 mL/10 g, 20 min后处死
11、，剖开腹腔，用 5 mL生理盐水冲洗数次，收集洗液，离心，取上清液在 721100型分光光度计590 nm处测定吸收度（A）值，t检验比较各组间差异。结果见表3。表3高良姜总黄酮对小鼠腹腔毛细血管通透性的影 响（略）Table 3 Effect of total flavonoids from Alpinia officinarum Hance on capillary permeability in mice与空白对照组比较：*P<；0. 05, *P<0. 01结果表明：高良姜总黄酮中、高剂量组均能明显抑制 乙酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高（P&1D0.05）。2.4高良姜总
12、黄酮对小鼠热板法致痛作用的影响2取雌性NIH小白鼠，体质量1822 g,采用热板法， 热板温度为（550. 5） C,给药前先测定各鼠的正常痛反应 作为基础痛阈（放入热板至小鼠舔后足时间，若小于5 s或 超出30 s,则弃之），选取合格动物60只随机分成5组，分 组及给药同2.2o连续给药3 d,末次给药1、2 h后再测定 各鼠的正常痛反应，结果见表4。表4高良姜总黄酮对热刺激所致小鼠疼痛的影响 （略）Table 4 Analgesic effect of total flavonoids from Alpinia officinarum Hance on the hot plate indu
13、ced pain in mice与空白对照组比较：*P<；0. 05, *p<；0.01由表4可见，高良姜总黄酮高剂量组明显提高1 h小 鼠痛阈值（P&1D0.05）,阿司匹林亦能显著提高12 h痛 阈百分率（P<；0.01）o2.5高良姜总黄酮对乙酸所致小鼠扭体反应的影响2取NIH小白鼠60只，雄性，体质量1822 g,分组 及给药同“2.2” o连续给药3 d,末次给药后60 min,各 鼠腹腔注射0.6%乙酸0.2 mL/只，然后观察15 min内各组 动物由乙酸引起的扭体次数。结果见表5。表5高良姜总黄酮对乙酸所致小鼠疼痛作用的影响 （略）Table 5 Analgesic
14、 effect of total flavonoids from Alpinia officinarum Hance on the acetic acid induced pain in mice与空白对照组比较：*P<0. 05, *P<0. 01由表5可见，高良姜总黄酮高、中剂量组明显抑制由 乙酸引起的小鼠扭体次数，与空白对照组比较差异有显著 性。3讨论高良姜是中医临床用于治疗脾胃中寒、舵腹冷痛的要 药。现代研究表明，高良姜药理活性强，应用广泛，有较强 的抗溃疡、抗腹泻、利胆、镇痛、抗炎、抗缺氧、抗凝、抗 血栓形成等作用，最近研究发现，它还有一定的抗HIV功能。 高良姜化学成分
15、复杂，主要含黄酮类、挥发油和二芳基庚烷 类化合物，其他成分有笛醇类、糖昔类和苯丙素类化合物， 其中黄酮类是高良姜的主要活性成分3,4。现已证明，高 良姜中含有多种黄酮类成分，显示了良好的发展前景，研究 高良姜黄酮类化合物的作用，已经引起众多医药工作者的热 切关注。从高良姜提取的黄酮类化合物高良姜素及芹菜素等 有较好的抗溃疡、镇痛作用等4,5。通过对高良姜进行分 离精制获得高良姜总黄酮，前期课题组根据高良姜的功效主 治设计了多种胃溃疡模型，结果显示高良姜总黄酮对急、慢 性胃溃疡模型都具有良好的抗溃疡及抗胃黏膜损伤作用，并 进一步证实了高良姜总黄酮具有胃肠解痉、抑制胃液和胃酸 分泌的作用6,这些作
16、用也是高良姜温中散寒治疗皖腹冷 痛的药理学基础。本研究表明，高良姜总黄酮对大鼠角叉菜胶足趾肿 胀、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀以及乙酸所致小鼠腹腔毛细血 管通透性增高等急性炎症模型均有明显抑制作用。高良姜总 黄酮对乙酸、热刺激所致小鼠疼痛均有抑制作用。提示高良 姜总黄酮具有一定的抗炎镇痛作用，这些作用加强了高良姜 总黄酮温中止痛的效果，结合其抗溃疡及抗胃黏膜损伤、胃 肠解痉的作用，为本药在临床用于治疗胃肠炎、消化性溃疡、 胃脫疼痛等提供了实验依据。文献报道以高良姜素及芹菜素为有效成分组成的高 良姜活性部位具有明显的镇痛作用，且镇痛作用随剂量加大 而增强4。但日本有学者早些年发现高良姜氯仿提取物具 有明显抑制前列腺素合成酶系和磷脂酶A2活性，并分别分 离出活性成分二芳基庚烷类
