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1、L/O/G/O病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 农药残留快速检测技术农药残留快速检测技术病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程学习目标掌握掌握速测卡法和分光光度法快速检测食品中有速测卡法和分光光度法快速检测食品中有机磷及氨基甲酸酯
2、类农药的基本原理及基本技机磷及氨基甲酸酯类农药的基本原理及基本技能；能；熟悉熟悉有机磷及氨基甲酸酯类农药的免疫分析检有机磷及氨基甲酸酯类农药的免疫分析检测方法；测方法；了解了解熏蒸剂的检测意义及方法。熏蒸剂的检测意义及方法。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程农药概况：农药是指用于农业、林业中各种药剂的统称。农药是指用于农业、林业中各种药剂的统称。特点：特点：高效、快速和使用简便高效、快速和使用简便 危害：本身的
3、毒性危害危害：本身的毒性危害 农药残留所引起的食品安全问题农药残留所引起的食品安全问题 农药残留所引起的抗药性问题农药残留所引起的抗药性问题 农药残留所引起的环境污染农药残留所引起的环境污染 按化学结构分类：按化学结构分类：有机氯类有机氯类 有机磷类有机磷类 氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类 拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程农药检测现状：农药检测现状：随着食品中农药残留最高限量标准不断降低，随
4、着食品中农药残留最高限量标准不断降低，检测难度越来越大，对检测技术的要求也越检测难度越来越大，对检测技术的要求也越来越高。这就需要有相应的检测技术与之相来越高。这就需要有相应的检测技术与之相匹配，尤其是快速检测技术。匹配，尤其是快速检测技术。与日本严格的农药残留标准相比，中国的标与日本严格的农药残留标准相比，中国的标准相对较少。农残检查超标前准相对较少。农残检查超标前5名农药，中名农药，中国都未作农残限量规定；国都未作农残限量规定；与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标28689个，美国农残限量指标个，美国农残限量指标7400个。因此，个。因此，必须适应国
5、际新形势，制定合理的残留新标必须适应国际新形势，制定合理的残留新标准。准。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程常用农药的分类及性质常用农药的分类及性质有机磷农药特点：药效高、毒性大、易降解、广谱，成为目前农药生产中吨位最大，也是世界上生产和使用最多的农药品种。 图图3-1 有机磷农药结构通式有机磷农药结构通式有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、粘膜、呼吸
6、道吸收。粘膜、呼吸道吸收。毒理：对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶活性的抑制，使毒理：对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶活性的抑制，使酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一
7、定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程常用农药的分类及性质常用农药的分类及性质氨基甲酸酯类农药(NMCs)是继有机磷之后出现的一类农药。NMCs的结构特性是含有一个N-甲基基团，为白色晶体，难溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈等，碱性和高温条件下很易被水解。具有杀虫效力强、作用迅速等特点。它的最大优点是在植物中只短暂停留，施用后很短的时间内就可被降解成相应的代谢产物，这些代谢产物通常具有与母体化合物相同或更强的活性。20世纪70年代以来，由于有机氯农药受到禁用或限用，以及抗有机磷杀虫剂的昆虫品种日益增多，因而NMCs的用量逐年增加，这就使得NMCs的残留情况倍受关注。病原体侵入机体，
8、消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程食品安全快速检测食品安全快速检测 超临界萃取（超临界萃取（SCFE）常用农残快检方法常用农残快检方法1、酶抑制法、酶抑制法 2、免疫分析法、免疫分析法 3、生物传感器法、生物传感器法 要求：快速、灵敏、便捷要求：快速、灵敏、便捷意义：作为实验室检测的辅助方法，对大量样品加意义：作为实验室检测的辅助方法，对大量样品加以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压力。以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压
9、力。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程农药残留快速检测方法：农药残留快速检测方法：1、酶抑制法：利用农药对胆碱酯酶的抑制作用，、酶抑制法：利用农药对胆碱酯酶的抑制作用，加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。特点：造价不高，试剂生产已成规模，稳定性好，特点：造价不高，试剂生产已成规
10、模，稳定性好，操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大批量操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大批量样品的筛查，目前普遍使用。样品的筛查，目前普遍使用。关键：如何选择酶源关键：如何选择酶源酶源：酶源： 来自动物的胆碱酯酶来自动物的胆碱酯酶 从植物中提取的植物酯酶从植物中提取的植物酯酶病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程动物酶原：动物酶原：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。目前主要
11、集中胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。目前主要集中在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、脑组织分离乙酰胆碱酯酶。脑组织分离乙酰胆碱酯酶。1953年年stedman等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程动物酶原：动物酶原：从昆虫提取
12、，如：家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟从昆虫提取，如：家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚草盲草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚草盲蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。 超临界萃取（超临界萃取（SCFE）以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究表明，家蝇羽化后表明，家蝇羽化后2-3天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏感性最高。感性最高。 不足：保持期短，需冷冻低温保存。不足：保持期短，需冷冻低温保存。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的
13、相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程动物酶原：动物酶原：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）原理：原理： 乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱乙酰胆碱 乙酸乙酸 + 胆碱胆碱 5，5-二硫代二硫代-双双-2-硝基苯甲酸硝基苯甲酸 5，5-二硫代二硫代-双双-2-硝基苯甲酸（黄色）硝基苯甲酸（黄色）在在410 nm处有最大吸收，测定其在单位时间内的处有最大吸收，测定其在单位时间内的生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。通过测定生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。通过测定
14、乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶(AChE)受抑制的程度来检测有机磷受抑制的程度来检测有机磷或氨基甲酸酯类农药。或氨基甲酸酯类农药。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程植物酶原：植物酶原：超临界萃取（超临界萃取（SCFE）植物酯酶特点：酶源丰富，提取和保存较为方便，植物酯酶特点：酶源丰富，提取和保存较为方便，只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清液即可作为粗酶液，并在液即
15、可作为粗酶液，并在-4保存即可。测量准确保存即可。测量准确度和精密度均不逊色度和精密度均不逊色 。原理：原理： 植物酯酶植物酯酶乙酸萘酯 乙酸乙酸 + 萘酚萘酚 显色剂固蓝显色剂固蓝B 偶氮化合物（紫红色）偶氮化合物（紫红色）病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程酶抑制法酶抑制法 肉眼观察法肉眼观察法目视比色法目视比色法速测卡法速测卡法酸碱指示剂法酸碱指示剂法酶片法酶片法试剂盒法试剂盒法检测箱法检测箱法pH计测量法
16、计测量法分光光度法分光光度法病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程农药残留快检方法：农药残留快检方法：2、免疫分析法、免疫分析法 ：高等动物都有免疫功能，当细菌、高等动物都有免疫功能，当细菌、病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的抗体，这就是动物的免疫反应。抗体，这就是动物的免疫反应。致病的外来物被称为抗原。免疫是机体识别和排除致病的外来物被称为抗原。免疫是机体识别和排除进入体内的抗原性异物的保护性反应。进入体内的抗原性异物的保护性反应。免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内，免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内，在体外亦能进行，而且反应是高度特异在体外亦能进行，而且反应是高度特异(即对特定结即对特定结构的农药具选择性构的农药具选择性)，高度灵敏，高度灵敏(可达可达pg/kg-mg/kg水水平平)。 病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内
