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1、Word文档瓷珠菌种保存法常见问题答疑1、菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗？ 答：可以。对于霉菌等真菌需培育7 天进行保存，而酵母菌需培育三天将孢子洗脱下来进行保存，保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝，相当于砂土保存法中砂土作为载体起到的作用。 2、全部的菌都能保存吗？假如不是的话，什么样的菌可以保存？什么样的菌不行以保存？ 答：可以。菌种保存的原理是预防或减缓DNA 复制时自发突变导致菌种退化，因此要制造代谢不活泼的状态，而菌种保存时使菌种进入休眠态（孢子、芽孢)，并制造干燥、低温、缺氧、缺养分的环境，制造的环境越接近此状态，所保存的菌种的时间就越长，所以从原理上讲，全部菌种都可用这
2、种方法保存， 但需要留意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌）等特别细菌保存时，需-80或更低温度保存，才可以做到更长期的保存。 3、能用菌种保存管永久保存菌株吗？ 答：温度越低，保藏效果越好。从目前的试验数据及实际保存效果来看，-20可保存1-5 年，-80或液氮中可保存5-10 年，不同菌种及不同的保存温度保存时间会有所不同（例如：大肠、沙门等常规细菌-20我们目前可以保存到6年）。但需要留意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定，确定菌株无变异。 4、菌种保藏时为什么要进行分别纯化？ 答：分别纯化后才能获得单一菌株，单一菌株进行菌种保藏才有意义，防止菌种交叉污染和变异，这也
3、是菌种保存的基本原则。 5、菌种保存管对于平板来说，对选择菌落个数有要求吗？还是将整个平板的菌落全部刮入管中？ 答：对于要保存的细菌一般是要进行2-3 次的纯化，要保证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的，所以在细菌保存的过程中，为了保证制备的菌悬液可以达到3-4MCF，是可以将整个平板的的细菌全部刮到管中的，假如平板长的比较满一般半个平板就够用，详细用量也依据菌种的不同有所差异，如霉菌、酵母菌在保存时，不适合用浊度法。 6、对于液体培育基培育的纯菌，是否也可以用咱们的菌种保存管？假如可以的话，怎么操作？ 答：是可以用的，假如液体培育基能保证是纯菌的话，可以直接离心，弃掉上清，然后把保存管中液
4、体吸进去充分混匀，然后再转移到菌种保存管中，整个过程要留意无菌操作。不过，一般菌种保存管最好选择平板菌落进行保存，由于液体培育基中有杂菌是不易观看出来的。 7、为什么在菌种保存时，要上下颠倒？为什么不能旋摇？ 答：上下颠倒，可使菌悬液充分混匀，菌株充分、匀称地吸附到小瓷珠上，旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而会使菌株全部沉淀于管底。 8、为什么在使用时要将管内的液体尽可能多的吸出？ 答：吸出液体可避开反复冻融形成的冰晶对菌株的损伤，加快复苏的过程，因此，要尽可能的将与菌种混匀后的保存液吸净。而常用的甘油法，在复苏的过程中需用水浴锅快速溶解，在此过程中，对菌株损害较大。 9、在使用后，菌种保存管的保
5、存环境？需要-80冰箱吗？ 答：本公司菌种保存管采纳的是低温冷冻保存法，因此，使用后，需放置低温环境，如-20、-80或液氮中保存，而且温度越低，保存效果越好。用户需依据菌种的保存要求选择详细保存温度。 10、为什么说，假如有条件的话，菌种保存管最好置于-80冰箱或液氮中？ 答：由于，贮存在-70以下低温中能削减冰晶形成，可极大降低冰晶形成对细菌的损害，同时可为被保存的菌种制造更低的代谢环境，从而延长细菌保存的时间。 11、为什么在取用菌株时，操作过程要求快速？ 答：菌种保存复苏的原则，要求慢冻快融，之所以要求快速，是由于在菌种复苏的过程中, 长时间的溶解过程会对所保存的菌种造成损伤，而我们经
6、过改良的保存方法最大程度的避开复苏所造成的影响，但我们还是建议遵循菌种的保存复苏原则，保证所复苏菌种的复苏率。 12、将菌株反复冻存，究竟对菌株有什么影响？ 答：低温会使菌株细胞内的水分形成冰晶，从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤。细胞体积大者一般要比较小者对低温更为敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。假如放到低温（不是一般冰箱）进行冷冻时，会产生冰晶，冰晶呈针状，极易导致细菌的严峻损伤。用电镜观看，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔，当从低温下移出并开头升温时，冰晶又会变大，故反复冻存，会对菌株造成极大损伤。 13、为什么有时候菌种的保存效果不佳？ 答：1、可能是由于保存后未将保存液吸尽，反复冻融形成冰晶损伤菌株细胞，影响了菌株活性。 2、确定所保存的菌种是否为对数生长期的菌种，我们建议一般菌种保存为18小时内的新奇菌种，而霉菌需要待孢子消失后保存其孢子。 14、该产品能否用于菌种的运输，假如可以在什么条件下运输？ 答：就目前试验数据而言，我们建议可主要用于一般细菌的短期运输，对于厌氧菌在运输时最好让其处于厌氧环境下，2-8运输不超过5 天。另外需要说明的是如弧菌属和绿脓杆菌需要常温运输，其对2-8温度极其敏感。 4
