第八章 细胞病理学基本检验

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1、第八章 细胞病理学基本检验 细胞病理学基本检验 第八章 细胞病理学基本检验 通过本章学习，你将能回答关于“细胞病理学基本检验”的下列问题： 细胞学是一门讨论细胞结构和功能的科学。细胞病理学（cytopathology）是检验医学的一个分支，通过检查细胞的形态学特点，进行健康和疾病的筛查、诊断和讨论，即对无症状个体进行癌前病变的筛检， 细胞病理学基本检验 对有症状或有体征患者进行诊断和鉴别诊断。依据标本采集方法不同，分为脱落细胞学（exfoliative cytology）和细针吸取细胞学（fine-needle aspiration cytology）。 第一节 细胞病理学基本检验技术 细胞病

2、理学诊断多基于光学显微镜观看，在作出诊断前，不仅应认真考虑相关的组织学变化，而且应考虑标本的质量。所获细胞能否代表病变靶组织或器官的细胞群体，是细胞病理学诊断结果精确和牢靠的前提。 一、标本采集 （一）脱落细胞标本 细胞标本脱落自上皮表面，包括：咳出：如痰液。排泄、导尿或膀胱镜：如尿液。挤压：如乳头分泌物等。自行脱落的细胞与采纳机械方法取得的细胞不同，前者常单个散在，后者常聚集成群。脱落细胞常呈球形，与细胞膜僵硬、细胞骨架力、表面张力、局部微环境和脱落时间长短有关，细胞质和细胞核会消失一系列退化性转变。其适用范围见表8-1。 表8-1 脱落细胞适用范围 主要特点有：宜从临床病变器官猎取标本。标

3、本内常含大量各种不同来源、不同类型的细胞。细胞成分保存较差。标本内可含有炎症细胞、巨噬细胞、微生物和外源性污染物。能进行多次采样。 （二）刮擦细胞标本 指通过物理作用刮擦取得的细胞标本，包括：刷取（brushings）：如气管、子宫颈。刮取（scrapings）：如乳头、皮肤、子宫颈。灌洗（lavage）：用等渗生理盐水溶液冲洗所得液体，如支气管。其适用范围见表8-2。 表8-2 刮擦细胞适用范围 细胞病理学基本检验 内部猎取标本。细胞成分保存良好，但在结果解释时，不能采纳与脱落细胞相同的标准。能获得上皮细胞下的病变标本。 （三）穿刺细胞标本 除少数体内器官外，都能通过穿刺法取得细胞标本。放射

4、影像技术有助于对小而深、移动且难以触摸的病变部位定位。通过穿刺吸取或非吸取法，从布满液体的器官或实体性器官中获得细胞标本，如肿瘤、心包腔积液、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液和玻璃体液等。 主要特点有：良好的穿刺和制片技术可获得最佳的结果。体内任何实体器官都能通过触摸或导引法采样，如借助内窥镜技术可经直肠、阴道、胸腔、腹腔等部位穿刺。需要借助外科病理学学问解释结果。方法简捷、费用低、创伤小、并发症少、禁忌证少，经皮肤穿刺术无需麻醉，易为病人接受，尤适用于门诊。局限性：对结缔组织、透亮变性、血管性病变、大量坏死物、囊性变或出血性病变等，可能采样不足。 二、涂片制备 直接涂片（direct smear）

5、是将新奇标本直接涂在载玻片上。间接涂片（indirect smear）是将各种液体标本（如生理盐水或运输培育基）进行浓缩处理，适用于细胞少的标本。涂片制备方法见图8-1，图8-2。 图8-1 涂片制备方法（用于黏液性标本） （A 将1滴标本加在载玻片上，B 将另一张载玻片盖在上面，并施加压力，C 将2张载玻片水平分开） 细胞病理学基本检验 图8-2 涂片制备方法（用于非黏液性标本） （A 将1滴标本加在载玻片一端，B 取1张推片向后接触标本，C 当心将推片向前移动制成涂片，D 成群细胞分布在涂片周边和末端） 若标本中有凝块，宜采纳细胞块（cell block）或传统组织学方法进行处理。渗出液、

6、灌洗液和尿液等标本不易黏附在载玻片上，宜采纳蛋白类（如牛血清清蛋白）或离子类（如多聚赖氨酸）黏附剂，增加细胞和载玻片之间黏附力，最大限度的保存标本中全部细胞。 三、标本固定 （一）湿固定 湿固定（wet fixation）是使细胞的原生质脱水、蛋白质凝固达到固定目的。常用固定液为乙醇类液体，有浸润法或包被法，湿固定可引起细胞皱缩。Carnoy固定液能溶解红细胞，适用于处理明显的血性标本。聚乙二醇固定液能在涂片表面形成一层爱护性蜡质膜，在染色前需除去。 （二）空气干燥固定 空气干燥固定（air drying fixation）是通过空气蒸发的方式达到固定目的。最好是逆着气流方向尽快干燥。与湿固定

7、相比，细胞有增大趋势（图8-3）。 图8-3 固定方法比较 （A 呈球形未固定的细胞，B 平铺在载玻片上，C 湿固定，D 空气干燥固定） 涂片空气干燥后应作甲醇固定，以防交叉感染。对于使用运输培育基的囊性液体或细针吸取穿刺液，应考虑潜在的生物危害。 四、标本浓缩技术 1离心法和细胞离心法 离心法适用于大量液体标本，如浆液性积液、尿液或生理盐水灌洗液等。细胞离心法适用于少量液体、中等量细胞的标本，是将细胞直接离心到载玻片上，制成单层细胞涂片，但部分物质会被滤纸汲取而损失，不适用于富含黏液或细胞的标本。 2滤膜过滤法（membrane filtration） 适用于大量液体、少量细胞的标本，是用各

8、种孔径的滤膜（如醋酸纤维薄膜、聚碳酸酯微孔膜），通过施加肯定压力使液体标本中细胞过滤到滤膜上，制成涂片。与离心法相比，能最大限度的捕获标本中的细胞。 3细胞块法 适用于大多数悬液标本，是将标本中细胞聚集成团，形成与传统组织块类似的细胞块，可制作细胞块切片，用于特别染色，如免疫细胞化学染色。制备方法有血浆凝血酶法和琼脂法等。 4液基细胞学（liquid based cytology，LBC）技术 是一种半自动或全自动标本处理新技术，是将刷取或灌洗法采集的标本，放在特别的运输液或保存液中，制成细胞悬液，经过进一步处理，除去血液、蛋白和炎性渗出物，制成分布匀称的薄片。其优点是：涂片上细胞分布匀称、分

9、布范围小、背景清楚。标本筛查简便、快速。能提高诊断灵敏度和特异度。能显著降低标本的不满足率。能用于原位杂 细胞病理学基本检验 交和免疫细胞化学染色。LBC技术是对传统标本处理方法的有效补充，但对某些非妇科标本，因LBC涂片缺乏背景成分，会影响细胞学诊断。 五、染色方法 很多用于组织切片的染色方法也适用于细胞病理学涂片。不同染色技术均适用于妇科或非妇科标本的永久性染色。巴氏染色（Papanicolaou stain）法适用于湿固定涂片。Romanowsky染色法（如MGG、Diff Quik染色）适用于空气干燥涂片，在非妇科标本染色中常用。苏木素和伊红染色法是组织切片最常用的方法，也是很多细胞病

10、理学试验室常用的染色方法。 其他常用染色方法有组织细胞化学染色，如过碘酸Schiff染色、三色染色、Ziehl-Neelsen染色、Gram染色和Grocott碘化银染色和有助于识别微生物或鉴别肿瘤细胞分化程度的免疫细胞化学染色等。 六、细胞病理学诊断 细胞病理学诊断是一个简单的过程，千万不能过分强调最终结论的重要性。由于细胞学检查的影响因素许多（表8-3），当涂片上有大量保存良好的细胞时会提高诊断精确性，而缺乏背景资料、涂片不佳、染色模糊等会导致误诊。 表8-3 细胞病理学检查的影响因素 涂片通常由各种简单细胞成分组成，因病变组织或采样部位不同，涂片上可同时见到正常和特别细胞。通常，涂片上正

11、常细胞形态是均一的，细胞核反映的是细胞增殖状态和力量，细胞质反映的是细胞起源、功能状态和分化程度。细胞活性增加可以是生理性的，如激素调整引起的细胞增生，也可以是损伤性的，如修复（repair）和再生（regeneration），或特别增加（多数为肿瘤）。细胞活性减低多为激素、年轻或凋亡等生理性状况，细胞可发生萎缩和退化性变化等。 迄今为止，还没有一项细胞形态学特征或一套规范的细胞形态学标准就能精确牢靠地鉴别良恶性细胞。因此，检验人员需要依据涂片上细胞数量、分布、大小和形态、细胞质和核特征等进行系统性分析才能做出最终结论。 （一）细胞数量 细胞数量和类型供应了靶组织或器官的重要信息，不仅反映了病

12、变性质，而且与非病变因素有关，如采样方法等。细胞过多（hypercellularity）表示增殖过程指数增加，代表增生或肿瘤。细胞过少 （paucicellularity）也并非表示无恶性细胞的存在，由于低度恶性肿瘤时，细胞常散在脱落，形态类似于正常。因此，足够量的标本是提高结果解释牢靠性的重要因素。 （二）细胞结构特征 在细胞学涂片中经常缺乏细胞结构特征，而采集大量细胞时能显示组织学特征。涂片上，正常上皮细胞常保持细胞极性（cell polarity）和细胞间黏附性（intercellular adhesion）。腺上皮细胞多呈规章排列，单层成片，正面观呈“蜂窝状”，侧面观呈“尖板条栅栏状”

13、。增生和良性肿瘤的上皮细胞常保持良好的黏附性，呈特别的外观，如乳头状、玫瑰花样或桑椹样结构。合胞体样细胞的边界转变和极性紊乱，应考虑肿瘤可能。典型的恶性上皮细胞的极性差，细胞间相互重叠，有时三维状聚集呈球形。癌细胞具有 细胞病理学基本检验 特别黏附性和特别聚集性2个主要特征。但是，正常淋巴细胞、分化差癌细胞的细胞间黏附性差，常呈散在分布，而淋巴瘤细胞（肿瘤性淋巴细胞）则相反，两者很难鉴别。 良性基质细胞常呈卵圆形、梭形，细胞间疏松黏附或呈裸核，恶性基质细胞（肉瘤）与良性基质细胞类似，但细胞核和细胞质多特别。 （三）细胞核特征 细胞核形态的特别称为核异质（dyskaryosis），分为轻度、中度

14、和重度，或者低度和高度。正常细胞的体积相对较小，分布匀称；核呈圆形或卵圆形，核边界光滑，染色质呈细颗粒状。涂片上同一类型细胞之间差别很小，称为单形性。若核DNA含量增加会产生核染色致密，即染色过深（hyperchromasia），核染色质分布不规章，呈粗颗粒状、核膜增厚。细胞核大小不均（anisokaryosis）时，常伴核膜特别增加，边界不规章，呈沟状、切迹状、皱缩状。核大小、形态和染色特别又称为核多形性（nuclear pleomorphism）。并常用核质比（nuclear/cytoplasmic ratio，N/C）来表达细胞核和细胞质的相对比例，分化差的细胞常具大核，而细胞质的量无变

15、化，故核质比增大。 正常细胞核常单个，破骨细胞、合胞体滋养层细胞可见多核，再生或修复细胞如肝细胞和软骨细胞可见双核。多核常见于炎症和肿瘤。正常细胞核常含有小的单个核仁和相关蛋白质。肿瘤或非肿瘤性增生时，常见大核仁。变性染色质常呈致密浓缩状物质，称为核固缩（karyopyknosis），如核裂开、核溶解、染色质溶解。细胞溶解形成裸核，常淡染；核残余物、核膜裂开成丝球状，常见于淋巴样细胞或小细胞未分化癌细胞。正常细胞有丝分裂很罕见，若有丝分裂增多代表细胞增生，肿瘤常见特别纺锤体（三极或四极）。 （四）细胞质特征 细胞大小和形态不一称为细胞大小不均。特别细胞的细胞质可增多或削减，并影响到核质比。细胞质由Golgi体、核糖体、内质网、线粒体或代谢物等组成，是影响细胞染色性重要因素之一。细胞质内贮存物质（如黏液、脂肪、碳水化合物、激素或结晶）只有通过特别染色才能鉴别。正常细胞或分化好的恶性细胞，常见黏液球、泡沫状微空泡、微绒毛刷状缘和纤毛（cilia）。邻近细胞会消失细胞质铸模（