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1、-,1,血细胞分析仪检测原理与影响因素,-,2,前言,传统的血常规分析法完全接受手工法；20世纪50岁月，库尔特（W. H. Coulter）先生依据电阻抗原理，又称库尔特原理，生产出第一台血细胞计数仪，开创了血细胞分析仪的新纪元，使人工计数实现自动化；随着科学技术的进展，血细胞分析仪也日新月异，目前己普及至县或卫生院；,-,3,前言,美国COULTER公司的STKS，MAXM系列血细胞分析仪 -电阻抗，高频电导及激光散射联合检测法 Bayer公司的Advia120型和新近推出的Advia 2120型血细胞分析仪 -激光和细胞化学法 日本东亚公司的NE1500，SYSMEX公司的SE9000血
2、细胞分析仪-电阻抗和射频电导联合检测法 ABBOTT公司的CD3000，CD3500血细胞分析仪-多角度激光偏振光散射检测法,常用的血细胞分析仪：,-,4,血细胞分析仪的主要功能,血细胞计数功能 测量WBC， RBC ， PLT ，MCV，RET等白细胞分类功能 测量NE%，LYM%，MO%，EO%，BA%等血红蛋白检测功能 测量HGB,-,5,血细胞计数的检测原理,电阻抗法流式细胞术与光散射法检测原理,-,6,电阻抗法检测原理,血细胞具有相对非导电的性质,悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒通过计数小孔 时可引起电阻及电压的变化，显现脉冲信号,脉冲的数量=细胞的数量 脉冲的大小=细胞的大小,该原理
3、又称库尔特原理（Coulter principle） 测量 RBC,WBC,PLT,MCV,MPV,-,7,电阻抗法检测原理,-,8,电阻抗法影响因素,白细胞:,由于多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，淋巴系统增殖性疾病，转 移癌，自身免疫性疾病，感染及某些缘由不明疾病血中含有冷 球蛋白，或骨髓瘤，癌症，白血病，妊娠，血栓疾病，糖尿病 病人血中存在有冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集， 致使白细胞计数增高；此时将稀释标本放在37度水浴10min后 立刻计数可排除此影响.,有核红细胞显现使白细胞计数假性增高；,低色素性贫血或红细胞内含大量sHb或HbCO，或某些新生儿及某 些肝病病人红细胞膜脂类反
4、常,从而产生抗溶血剂作用，红细胞 溶解不完全；,多发性骨髓瘤的M蛋白增多时，PH低的情形下，M蛋白可与溶血剂 发生反应而使结果偏高；,各种病理引起的血栓前状态使血小板易于集合，上机时影响结果,-,9,电阻抗法影响因素,红细胞:,血小板:红细胞碎片和脂血中与血小板大小相像的乳糜 微粒等作为血小板计数，导致血小板计数偏高；,RBC:在某种病理情形下，如白血病，白细胞数明显增加而又 伴严峻贫血时，即可使所得各项参数产生明显误差； MCH:不能探测单个红细胞的结构（MCH=总HGB/RBC） MCV及MCHC :红细胞通过小孔时经受肯定的外形学变化，红细 胞外形与细胞质黏度有关，细胞质黏度受细胞HGB
5、含量影响， 因此HGB浓度可影响细胞外形，进而影响MCV及MCHC的精确性 （MCHC=HGB/HCT),-,10,流式细胞术与光散射法检测原理,白细胞计数 红细胞和血小板计数 网织红细胞计数 有核红细胞计数,-,11,流式细胞术与光散射法检测原理,白细胞计数,利用流式细胞术,单个细胞随着流体动力集合的鞘流液通过激光照耀的检测区时,使光束发生折射，衍射和散射,散射光由光检测器接受后产生脉冲,脉冲的大小与被照细胞的大小成正比脉冲的数量代表细胞的数量,-,12,流式细胞术与光散射法检测原理,红细胞和血小板计数,在红细胞/血小板通道中，RBC/PLT试剂与血液混合反应，将自然状态下的红细胞/血小板变
6、成球形并经戊二醛固定后使单个细胞逐个经过检测器,低角度前向激光（23）测量单个细胞体积与总数 高角度激光（5 15）测量单个细胞的折射指数(RI),依据单个细胞体积和其相应细胞的折射指数，可将红细胞和血小板区分开来，并精确得出相应的参数；细胞的折射指数(RI): 反映细胞内容物的浓度；,-,13,流式细胞术与光散射法检测原理,红细胞和血小板计数,-,14,流式细胞术与光散射法检测原理,网织红细胞计数,网织红细胞分析接受某些染料（如核酸染料Oxazine 750）染色的原理，并将细胞球形化，用激光二维法对网织红细胞进行分析测定；,前向角光散射强度=细胞大小荧光强度=胞内RNA浓度,依据荧光强度，
7、可将网织红细胞分成低吸取荧光强度网织红细胞（LFR)，中吸取荧光强度网织红细胞(MFR)和高吸取荧光强度网织红细胞(HFR)三部分；稚嫩网织红细胞显示最强的荧光,-,15,流式细胞术与光散射法检测原理,仪器仍可供应网织红细胞成熟指数（reticulocyte mature index，RMI）；RMI=,网织红细胞计数,RMI增高与骨髓移植，慢性溶血，近期出血或疗效 反应有关； RMI降低通常提示骨髓衰竭或无效造血；,HFR+MFR LFR,-,16,流式细胞术与光散射法影响因素,病人样品中的有核红细胞 (特殊是新生儿样品)能够使白细 胞计数假性上升；,样品的冷凝集现象可能引起红细胞计数假性降
8、低,显现在镰形红细胞贫血中的一些不行逆的镰形细胞在本系 统中可能不完全呈圆球形，从而导致RDW 上升，因而也低 估了MCV值；镰形细胞可能引起其它红细胞参数的错误；,-,17,流式细胞术与光散射法影响因素,接受全肠道外养分的(TPN)病人样品，其中包括高脂剂，可能显现血小板计数假性上升；这些样品能够包含脂滴，并且这些脂滴会显现在血小板计数区域；,血小板大量集合时，有时造成血小板假性降低，且无 报警提示,-,18,白细胞分类的功能,白细胞二分群，三分群计数原理白细胞五分类计数原理,容量，电导，光散射法 激光与细胞化学法 电阻抗与射频法 多角度偏振光散射检测原理,-,19,白细胞二分群，三分群计数
9、原理,依据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据脉冲的大小，血细胞仪对白细胞进行分群；,经溶血素处理后，红细胞快速溶解，白细胞胞质 经细胞膜渗出，胞膜紧裹在细胞核或颗粒四周脱 水的细胞体积与其自然体积无关，取决于脱水后 细胞内有形物质的多少；,仪器将体积为35450fL的血细胞分为256个通道， 每个通道为1.64fL，依据细胞大小初步确认细胞群， 并显示出白细胞体积直方图,-,20,白细胞二分群，三分群计数原理,依据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据脉冲的大小，血细胞仪对白细胞进行分群；,淋巴细胞,中性粒细胞,单核细胞，
10、嗜酸粒细胞嗜碱粒细胞，白血病细胞核左移的各阶段稚嫩细胞,-,21,白细胞二分群，三分群计数影响因素,电阻法只是依据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体；在一个群体中，可能发某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能仍有其它细胞的存在；任何一类白细胞的增多，均可使直方图产生相像变化，直方图只是提示检查者粗略判定细胞比例变化或有无明显的反常细胞显现，进而在显微镜下检查中留意这些变化，实际分类以手工分类为准；,外周血显现有核红细胞或巨大血小板，采血时由于技术问 题造成血小板集合或某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有 抗击作用，使红细胞溶血不完全，致待测标本中有大量红 细胞膜碎
11、片等情形，均可使白细胞直方图在50fl以下区域 显现一个或大或小的小峰；使小细胞区计数假性上升,-,22,容量，电导，光散射法检测原理,在测试的标本内加溶血剂，使红细胞溶解,加入抗溶血稳固剂，中和溶血剂的作用，使白细胞表面，胞质及细胞大小等特点仍保持与体内时相同的状态,使用鞘流技术，使溶血后液体内白细胞分别单个通过激光检测区接受检测,VSC技术是全血未经任何处理，血细胞保持与体内外形完全相同状态下得出的检测结果,-,23,容量，电导，光散射法检测原理,电阻抗原理：检测细胞体积,电导技术：依据细胞壁能产生高频电流的性能，用高频电磁探针测量细胞内部结构，通过细胞核和细胞质的比例，细胞内颗粒的大小和
12、密度，辨别体积相同，但性质不同的两个细胞群体,如LY和BA,光散射技术：来自激光源的单色光直接扫描计数敏锐区的细胞，依据细胞产生的不同角度散射光（1070），供应细胞外形，胞核结构等光散射信息，并鉴别细胞颗粒的构型核质量（粗颗粒的光散射比细颗粒的更强），可区分出粒细胞（NE，BA，EO)的类型,-,24,容量，电导，光散射法检测原理,依据VSC原理，可显示 三种细胞散点图DF1：体积值和散射光值DF2：体积值和电导值DF3：体积值和电导值，但除去了EO和NE部分，只显示嗜碱粒细胞群,-,25,容量，电导，光散射法影响因素,稚嫩细胞等白血病细胞使分类反常未成熟粒细胞与核左移细胞常引起MO%假性上
13、升,-,26,激光与细胞化学法检测原理,血样和过氧化物酶试剂混合后，溶解RBC,过氧化物酶通道,白细胞与过氧化物酶试剂反应,染色深浅 与细胞过氧化物酶活性成正比,过氧化酶活性：EONEMO LYM与BA无活性,-,27,激光与细胞化学法检测原理,依据胞浆中过氧化物酶染色深浅和激光法测量的细胞大小不同，将白细胞分成嗜酸性粒细胞，单核细胞，中性粒细胞，大而未染色细胞，淋巴和嗜碱细胞淋巴和嗜碱性粒细胞由于大小相像而不能分开；,-,28,激光与细胞化学法检测原理,嗜碱性粒细胞/分叶核通道,嗜碱性粒细胞/分叶核通道反应示意图,血样和嗜碱反应试剂混合后，由 于试剂中苯二甲酸和表面活性剂 的作用，红细胞和血
14、小板溶解， 除嗜碱性粒细胞外，其他白细胞 膜破裂而失去胞浆,依据细胞核的外形和复杂性，将白细胞分成单个核和多形核细胞，并可对中性粒细胞分叶程度进行分析；,嗜碱性粒细胞保持完整，体积较大，很简洁从小细胞群中识别开来；,-,29,激光与细胞化学法检测原理,当嗜碱性粒细胞与其它被溶解了细胞膜的细胞核流入激光二维检测系统，依据前向角和散射角检测的结果，产生了二维细胞图，进而将白细胞进一步进行分类；结合依据过氧化物酶通道的结果，将白细胞进行完整的分类；,-,30,激光与细胞化学法影响因素,病理情形下，嗜酸粒细胞分类受标本白细胞外形反常影响假性上升稚嫩细胞等白血病细胞使分类反常,-,31,电阻抗与射频法检
15、测原理,嗜酸性粒细胞检测系统：血液进入仪器后，经分血器使血液与嗜酸性粒细胞特异计数的溶血剂混合，由于其特殊的PH，使除嗜酸性粒细胞以外的全部细胞溶解或萎缩，含有完整的嗜酸性粒细胞的液体通过小孔时，使计数电路产生脉冲而被计数；,嗜碱性粒细胞检测系统：计数原理与嗜酸性粒细胞相 同，由于碱性溶血剂只能保留与血液中嗜碱性的粒细 胞，因此依据脉冲的多少即可求得嗜碱性粒细胞数；,上述二种方法除需要使用专一的溶血剂外，仍需特定 的作用温度和时间；,-,32,电阻抗与射频法检测原理,淋巴，单核，粒细胞（中性，嗜碱性，嗜酸性）的检测系统：,这个系统接受电阻抗与射频联合检测的方式,本法使用的溶血剂的作用较轻，细胞
16、外形转变不大；,在小孔的内外电极上存有直流（DC）和高频（RF）两个 放射器，因此细胞进入小孔时产生两个不同的脉冲信号,脉冲的高低分别代表细胞的大小和核内颗粒的密度，,以DC信号为横坐标，RF为纵坐标，就可依据2个信号把 同一个细胞定位于二维的细胞散射图上；,由于LYM，MO及粒细胞的细胞大小，细胞质含量，胞质内 颗粒的大小与密度，细胞核的外形与密度不同，DC及RF 的脉冲信号有较大的差异，定位在各自散射的区域，通 过扫描技术得出各类细胞比例,-,33,电阻抗与射频法检测原理,稚嫩细胞检测系统：此胞膜上脂质较成熟细胞少的现象，在细胞悬液加入硫化氨基酸后，由于细胞上脂质占位不同，故结合在稚嫩细胞的硫化氨基酸较成熟的细胞多，且对溶血剂有抗击作用；当加入溶血剂后，成熟细胞被溶解，假如悬液中存在稚嫩细胞，其外形不受破坏，因此可通过电阻抗的方法检测出来；,-,34,多角度偏振光散射检测原理,肯定体积的全血标本用鞘液按适当比例稀释；,其白细胞内部结构近似于自然状态，因嗜碱性粒细胞颗粒 具有吸湿的特性，所以嗜碱性粒细胞的结构有稍微转变；,红细胞内部的渗透透压高于鞘液的渗透压而发生转变， 红细胞内的血
