细胞免疫的检查

《细胞免疫的检查》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞免疫的检查（53页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、 细胞免疫检查 Examination of Cellular immunity 医院检验系（科） 细胞免疫概念广义:狭义:T细胞介导的特异性免疫.凡是由免疫细胞发挥效应以清除异物的作用 。T、B、NK、细胞因子等细胞免疫应答的生物学意义 生理意义 1抗感染 主要清除胞内感染的病原体。 2. 抗肿瘤 杀死靶细胞 病理意义 1. 介导型超敏反应，引发移植排斥反应等。 2. 参与某些自身免疫性疾病的组织损伤。2、 细胞免疫检查的方法：方法体内试验: 超敏反应的皮肤试验体外试验:淋巴细胞功能表面标志物测定存在于细胞表面的多种膜分子，包括各种表面受体和表面抗原。它们是淋巴细胞识别抗原，并与其他免疫细胞

2、相互作用，以及接受微环境刺激的分子基础，亦是鉴别和分离淋巴细胞的重要依据。功 能 T细胞转化试验(PHA) Lymphocyte transformation test B细胞转化试验(PWM) 混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte reaction) K与NK细胞活性检测标志物表面分化抗原：CD34825等T细胞B细胞NK细胞膜表面IgG测定(smIg)(Surface membrane immunoglobulin SmIg)表面分化抗原(CD192022等)表面分化抗原（CD3/16+56)流式细胞术功 能 T细胞转化试验(PHA) Lymphocyte transform

3、ation test B细胞转化试验(PWM) 混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte reaction) K与NK细胞活性检测标志物表面分化抗原：CD34825等T细胞B细胞NK细胞膜表面IgG测定(smIg)(Surface membrane immunoglobulin SmIg)表面分化抗原(CD192022等)表面分化抗原流式细胞术T淋巴细胞转化试验 （形态学）原理：原理： PHA4872小时 正常参考值（PHA） 60%80%淋巴细胞转化率=转化的淋巴数+转化的淋巴细胞数未转化的淋巴数100%结果判定：每份标本数200个细胞优点：简便易行，便于基层推广缺点：易受主观因素

4、影响，重复性差 讨论1、为什么用PHA刺激T细胞可使T 细胞分裂增生？ 2、B淋巴细胞转化试验应该如何 进行？ 美洲商陆OR葡萄球菌A蛋白NK细胞活性测定 乳酸脱氢酶释放法 NKHela+ Hela LDHLDHLDHLDHLDHLDH比色测定LDH的活性间接反应NK活性参考范围：细胞毒指数27.5-52.5%功 能 T细胞转化试验(PHA) Lymphocyte transformation test B细胞转化试验(PWM) 混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte reaction) K与NK细胞活性检测标志物表面分化抗原：CD34825等T细胞B细胞NK细胞膜表面IgG测定(

5、smIg)(Surface membrane immunoglobulin SmIg)表面分化抗原(CD192022等)表面分化抗原流式细胞术流式细胞术流式细胞术 流式细胞术流式细胞术(Flow Cytometry(Flow Cytometry，FCM)FCM)是是采用采用流式细胞仪流式细胞仪对处在液流中的细胞或其对处在液流中的细胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。快速定量分析和分选的技术。单个细胞、多参数、定量什么是流式细胞仪：流式细胞仪（Flow Cytometer)集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、

6、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。 流式细胞仪的结构和工作原理液流系统流动室 液流驱动系统光学系统 激光光源光收集系统电子系统光电转换数据处理系统FCM主要检测参数 物理参数（散射光信号）：FSC、SSC 荧光参数 FL1、FL2、FL3、FL4 FSC：反映细胞大小 SSC：反映细胞内颗粒性 FL1：FITC, Alexa Fluor 488 FL2: PE, PI, Cy3 FL3：Per-CP，PE-Cy5, Alexa Fluor 700 FL4：APC仅用散射光信号可以对仅用散射光信号可以对未染色未染色的活细胞进的活细胞进行分析或分选，但行分析或分选，但不能

7、分析表面分子。不能分析表面分子。外周血散点图外周血散点图分出淋巴细胞分出淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞亚群淋巴细胞亚群 （荧光）（荧光）荧光分子耦联抗体的原理单色荧光标记单色荧光标记3.表面标志物测定的临床意义 CD抗原 特 异 性 CD2绵羊RBC受体 全部T细胞部分NK细胞 CD3成熟T细胞 CD4T（辅助/诱导）细胞、 M、HIV受体 CD8T（杀伤/抑制）细胞、NK细胞的亚型 CD25活化T细胞、IL-2受体3.1 T细胞表面标志物LymphocytesubsetsT HELPER CELLSActivate B cells and macrophagesCYTOTOXIC T LY

8、MPHOCYTEKill virusInfected cells CLPCommonLymphoid precursor1. 分群：ThCD4CTLCD8TT CELLS(CD3) Th1: 分泌IL-2、 IFN-、TNF- Th2: 分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 CD4+抑制细胞诱导亚群 TI（CD4+CD45RA+）辅助细胞诱导亚群 Th（CD4+CD29+）CD3杀伤T细胞亚群 Tc（CD8+CD28+） CD8+抑制T细胞亚群 Ts （CD8+CD28-） 1. 分群：其它亚群2. 功能Ti： CD4+CD45RA+对ConA和同种异体抗原刺激有强烈反应，但不产生记忆

9、应答。不同阶段的 Ts 细胞产生Th调节B诱导Th： CD4+CD29+ 诱导细胞介导的淋 巴细胞溶解作用抗体 B细胞特点特异性杀伤作用杀伤作用受MHC-I类分子限定效应性细胞Tc可连续杀伤靶细胞抗病毒免疫 抗肿瘤免疫移植排斥反应作用Tc:CD8+CD28+讨论： Tc与NK细胞的杀伤作用有何区别？Ts： CD8+CD28-Th负调节B4. 临床意义 CD3：（1）甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎（2）传染性单核细胞增多症（3）急性淋巴细胞型白血病（4）重症肌无力 （5） SLE活动期（6）排斥反应 CD3 ： （1）原发性细胞免 疫缺陷病（如先天无 胸腺症）（2）某些恶性肿瘤（3）流感、麻疹等 病毒

10、感染（4）多发性神经炎 I 免疫功能的判定：淋巴细胞亚群中的任何一项超出正常参考区间，判定为免疫功能异常。CD4 ： 恶性肿瘤遗传性免疫缺陷症艾滋病应用免疫抑制剂者 CD4： 类风湿性关节炎重症肌无力自身溶血性贫血移植排斥反应CD8： 艾滋病恶性肿瘤（肝癌、鼻咽癌）传染性单核细胞增多症SLE活动期CD8：变态反应性疾病 免疫功能可作为治疗效果的判定及预后肿瘤病人 治疗后免疫功能恢复正常的肿瘤病人，一般预 后较好，反之预后差。 鼻咽癌病人接受常规治疗的肿瘤病人，若治疗引起了免疫 抑制，则这种病人的预后较差，缓解期的白血 病病人，其免疫功能突然下降，是白血病复发 的信号。T细胞亚群（4项或8项）C

11、D3： 0.630.75CD3CD4： 0.300.45CD3CD8： 0.210.32NK： 0.09 0.18CD4CD29： 0.200.32CD4CD45RA： 0.0850.20CD8CD28： 0.100.16CD8CD28： 0.050.13病 例 分 析 张某，男，30岁，因发烧38.5度，咳嗽咳痰入住沙河区人民医院。住院期间，采用抗生素治疗，体温忽高忽低，住院一周余病情未见好转，于是到南方医院中医门诊就医。测体温，39.5度，拍胸片诊断间质性肺炎，于是收入中医科。入院后，针对间质性肺炎治疗，体温降为正常，但很快又升高39.5度，反复多次。你做为一名医生下一步该如何诊治？艾滋病

12、CD3： 或CD4： (2-12%)CD8：(CD8+CD28-)NK ： 讨论：HIV病毒主要侵犯人体的什么细胞，为什么？为什么HIV感染的晚期CD8+T细胞也减少CD8+T细胞有辅助受体CXCR4，HIV与CXCR4结合但不会进入细胞,从结合部位传递的信号，导致大量的CD8+/CXCR4+ T细胞凋亡。II 监测排斥反应移植病人：使用免疫抑制剂早期： CD3 、CD4 、CD8 维持期： 以上指标逐渐升高，但仍低于术 前水平。稳定期： CD3 CD4 /CD8 (CD4 Ts)排斥反应：CD4 Tc CD25 CD4/ CD8 III 探讨发病机制1. SLE CD4 CD4/CD8 （多

13、数） CD4CD45RA Ts B细胞 自身抗体 发病 2. RA CD4 CD4/CD8 CD4+CD29+ 诱导B细胞产生抗体 自身抗体 发病 白血病分型：T-ALL急性早期T前体细胞白血病急性T细胞白血病CD7 CD2 TDT+ - - + + +T淋巴细胞白血病分型末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)3.2.B细胞表面标志物1.B细胞膜免疫球蛋白(1)参考值 SmIg 16-28% SmIgG 4-13% SmIgM 7-13% SmIgA 1-4% SmIgD 5-8% SmIgE 0-1.5%（2）临床意义增高：常与B细胞恶性增殖有关 慢性淋巴细胞性白血病 毛细胞性白血病 巨球蛋白血症等

14、减低：主要与体液免疫缺陷有关 原发性联丙种球蛋白缺乏症 免疫缺陷病等 1. 分群： B2(CD19+CD5-)：细胞即通常参与体液免 疫的B细胞； 1(CD19+CD5+)：B1细胞在发生、分布、 表型和功能等方面具有不同于B2细胞 的特点。2. B 细胞分化抗原2. B细胞表面特异性抗原：CD10 CD19、CD20、CD22CD10 表达于前B细胞CD19：为全部B细胞所共有的表面标 志， B细胞活化后亦不消失； CD20：表达于早期B细胞和成熟B细胞阶 段，分化为浆细胞后，表达消失。 CD22：当B细胞活化时，表达增强，一 旦分化为浆细胞则表达下降。 B-ALL T-ALL AML CD

15、22 + - - CD10 + - - CD19 + - - CD3 - + - CD5 - + - CD7 - + -/+ CD13 - - + CD33 - - +3临床意义：B细胞白血病分型 Fab CD33 CD34 HLA-DR CD13 CD14 CD15 CD11b M2 + + + - - M3 - + - + - - M4 + + + + + lT淋巴细胞型白血病对化疗不敏感，常复发和预后差。讨论：白血病分型有何意义？l普通型B-ALL对化疗很敏感、预后良好。l早前B-ALL对化疗药物常发生耐药反应，预后较差。三、NK细胞表面标志NK细胞阳性率% 其他阳性细胞CD16（Fcr

16、 R）8090粒细胞、巨噬细胞、少数T细胞CD5695少数T细胞CD575070部份T细胞CD21080所有T细胞CD7所有T细胞CD81080部份T细胞CD11b粒细胞、单核细胞、部份T细胞CD381080活化T、浆细胞、造血前体细胞NK: 表面标志 CD3-/CD16+56 +1. 人NK细胞的表面标志2.临床意义（1）升高 常见于病毒 感染的早期，器官移植的患者，还可见于干扰素及干扰素诱导物等免疫增强剂治疗的患者。（2）降低 常见于恶性肿瘤，艾滋病及免疫抑制剂使用者（3）肿瘤疗效观察及预后评价总 结1. 细胞免疫检查（细胞免疫概念复习）2. 细胞免疫测定方法 体内 体外（功能、 表面标志物）3.表面标志物的测定方法-流式细胞术4. 表面标志物测定的临床意义 （1）T淋巴细（2）B淋巴细胞（3） NK细胞谢 谢 ！