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1、生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,相关知识点回忆,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,支链淀粉或糖原分支点的结构,1. 重要的多糖-淀粉,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,支链淀粉的分枝结构,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,a -淀粉酶 -淀粉酶 切-1,4-糖苷键 淀粉的 水解 麦芽糖酶 酶促 脱支酶 切 -1,6-糖苷键 降解 异麦芽糖酶 磷酸解: 淀粉磷酸化酶,2、淀粉的酶促降解,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,3. 淀粉的酶促水解,淀粉酶 淀粉酶：在淀粉分子内部任意水解-1，4糖苷键。产物为麦芽糖，麦芽三糖，糊精等还原糖（内切酶） 淀粉酶:从非还原端开始，水解，4糖苷键，依次水解下一
2、个麦芽糖单位（外切酶）,极限糊精,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,-淀粉酶 -淀粉酶 可跨越分枝点 不能跨越分枝点 内切酶（随机切） 端解酶（非还原端两两相切） 产物糊精分子量小 糊精分子量大（极限糊精） 耐70 15min, 不耐酸 耐pH=3.3 酸性, 不耐高温 分布 发芽种子 休眠种子,-淀粉酶和-淀粉酶的异同点：,相同点：都作用于-1,4糖苷键，产物都是麦芽糖,不同点：,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,淀粉酶活性的测定（P174）,实验04,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,一、目的 二、原理,D-麦芽糖,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,淀粉酶活性大小的表示方法： 淀粉酶活性的
3、大小与产生的还原糖的量成正比。以单位质量样品单位时间生成的还原糖的量表示。,测定-淀粉酶和-淀粉酶： -淀粉酶不耐酸， -淀粉酶不耐热，本实验采用70。C保温15min钝化-淀粉酶而测出-淀粉酶。总活力减去-淀粉酶活力则为-淀粉酶活力。,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,三、材料、仪器设备及试剂,材料：萌发的小麦种子（芽长1cm） 仪器设备：分光光度计、恒温水浴、刻度试管、 容量瓶 试剂： 1、标准麦芽糖溶液（1mg/mL） 2、3，5-二硝基水杨酸（含NaOH） 3、1%淀粉溶液,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,四、实验步骤,1、麦芽糖标准曲线的制作 A540=0.264x-0.052 (
4、x为mg麦芽糖）,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,3、酶活力的测定,取4支干净的具塞刻度试管，编号，按下表操作：,摇匀，沸水浴中5min，取出流水冷却，加蒸馏水至20mL。摇匀，540nm比色测定。,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,空白管： 2 mL蒸馏水 + 2 mL3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，定容至20 mL,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,五、实验数据,VT= VS= W= A-1= A-2 = A1 = A-2 - A-1 x1= A-1= A-2 = A2 = A-2 - A-1 x2=,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,六、结果计算,-淀粉酶活力=(+)-淀粉酶活力- -淀粉酶活力,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,七、分析讨论,注意事项： 1、三个水浴温度的不同，不能混淆。 2、实验步骤较复杂，理解之后动手操作。,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,
