实验三：硝酸还原酶（NR）活性测定 一、实验目的 了解硝酸还原酶的活性测定的原理，掌握活体测定硝酸还原酶地方法 二、实验原理 硝酸还原酶是植物氮元素代谢过程中的关键酶，于作物的吸收和利用氮元素 有 关 ， 他 们 作 用 于 硝 酸 根 ， 使之 还原 为 亚 硝 酸 根 根： NO3-+NADH ++H+ NR NO2 -+NAD++H 2O 产生的亚硝酸根可以从组织内渗入到外界溶液中， 从而测定溶液中亚硝酸根的含量的增加即为NR活性大小测定时间磺胺与亚 硝酸钠形成重氮盐，再与α -奈氨偶联形成紫色物质反应液的酸度和温度都 会对反应产生影响 三、试剂与器材 1、 材料：小白菜叶片 2、 试剂： 0.1mol/L ph7.5 磷酸缓冲液，磺胺试剂、α -奈氨、 0.2mol/LKNO3、 NaNO2标准溶液 3、 器材：分光光度计、注射器、试管、天平、烧杯、移液管、恒温箱 四、实验步骤 1、按下列表格配置不同浓度的NaNO2溶液 编号 1 2 3 4 5 6 7 5Ng/mlNaNO2 溶液（ ml） 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.5 0 pH7.5磷酸缓冲液（ ml） 0 1.0 2.0 3.0 4.0 4.5 5.0 NaNO2 溶液 中浓度 （μ 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.5 0 g/ml） 2、另取 7 支试管编号，取上述配置好的溶液各1ml，分别加入磺胺 2ml、α - 奈氨 2ml 摇匀静置 30min，在 520nm 处比色以 NaNO2终浓度为横坐标绘制 标准曲线 3、将小白菜叶片剪成0.5cm2大小称取两分，每份各0.5g 放入另个烧杯中， 一个烧杯中加入0.1ml/L 磷酸缓冲液 5ml 再加入蒸馏水 5ml，作为对照组。
林一个烧杯中加入0.1mol/L 磷酸缓冲液 5ml 和 0.2mol/LKNO3溶液 5ml 作为 实验组将材料与溶液混合置于射器中抽气至材料沉入溶液 4、将含材料的烧杯置于30℃恒温箱中 30min，之后分别取1ml 溶液按第二 步进行 NO2-含量测定 5、结果分析：酶活性（NO2 - μ g g -1h-1）= （实验组 NO 2 -含量-对照组 NO 2 -含量） /材料重量（ g）/时间（h） 五、实验结果 编号 1 2 3 4 5 6 7 吸光值 0.812 0.713 0.582 0.354 0.21 0.111 0 试管号吸光值NO2 -浓度（μg/ml） 1（对照） 0.01 0.5 2（实验） 0.046 2.4 y = -0.143x + 0.970 -0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 02468 吸 光 值 编号 系列 1 线性 (系列 1) 实验分析及感悟 : 由于实验过程中， 移液管的混用可能会导致部分溶液污染导致实 验产生误差叶片剪切的由于抽气不够是结果偏小 本次试验经历了很长时间，我们从上午10 点一直做到下午一点 才做完。
当然经过努力的数据分析我们最终得到了我们所渴求的实验 结果值得一提的是本次试验是我第一次完全用计算机完成的，以为 我希望通过这样的方式提高我对计算机作业的能力，虽然现在效率很 低，用了很长时间才将此报告完成，却让我收获更多 赵旭 。