第一节 食品中副溶血性弧菌的检验,第八章 食品中其它致病菌的检验,弧菌电镜照片,,食品中副溶血性弧菌的检验,一、概况 副溶血性弧菌（Vparahemolyticus）于1950年从日本一次暴发性食物中毒中分离发现该菌存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中根据菌体O抗原不同，现已有13个血清群主要引起食物中毒，尤以日本、东南亚、美国及我国台北地区多见，也是我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌一、概况 目前已发现本菌有12种菌分为、、、、型从患者粪便分离出菌株属于、、型，自致病食物分离的菌株90%以上属于、型致病性菌株能溶解人及家兔红细胞，称为“神奈川”试验（kanagawa test）阳性其致病力与其溶血能力平行，这是由一种不耐热的溶血素（分子量42000）所致本菌能否产生肠毒素尚待证明食品中副溶血性弧菌的检验,食品中副溶血性弧菌的检验,一、概况 媒介食品 副溶广泛存在于海岸和海水中，海生动植物常会受到污染而带菌海鱼、虾、蟹、蛤等海产品带菌率极高；被海水污染的食物、某些地区的淡水产品如鲫鱼、鲤鱼等及被污染其他含盐量较高的食物如咸菜、咸肉、咸蛋亦可带菌，也可因受到污染而引起中毒。
带用少量该菌的食物，在适宜的温度下，经34小时细菌可急剧增加至中毒数量进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起媒介食品,食品中副溶血性弧菌的检验,一、概况 临床表现 潜伏期多为10小时左右，一般8-40小时，主要症状有恶心、呕吐、上腹部阵发性剧烈腹痛、频繁腹泻、洗肉水样或带粘液便，无里急后重，每日5-6次，体温39重症病人可有脱水、血压下降、意识不清等病程2-4天，一般预后良好，无后遗症，少数病人因休克、昏迷而死亡.,二、生物学特性,（一）形态与染色 1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染杆状、棒状、甚至球状、丝状等,（二）培养特性,1、需氧或兼性厌氧：生长最好 2、在2-%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐10%不能生长 3、最适温度36，PH7.57.8（7.7） 4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐 5、血平板：可见溶血环三）生化特性,1、分解GLU(血葡萄糖）产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖 2、H2S（）、V-P（）、靛基质（）、 精氨酸（） 3、甲基红（）、赖氨酸（）、溶血/-,VP试验,阴性,阳性,靛基质试验,阴性 阳性,甲基红试验,阳性,阴性,（四）抗原结构,O抗原 O1O13 13个群。
H抗原： K抗原：K1K70 65个型 缺：K2 K14 K17 K35 K62,三、检验操作要点,采样样品处理增菌培养分离培养3.5%氯化钠三糖铁培养基嗜盐性试验生化鉴定动物试验结果报告,1、采样： 患者粪便、呕吐物、可凝食品 从海产品的体表面、肠内容物、鳃等取样 必要时 包装物，炊具用具 取样后尽快送检，不宜低温保存以免死亡 2、增菌培养：Nacl结晶紫增菌液,378-16小时3、分离培养： Nacl蔗糖平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，(绿)兰色，直径24mm 嗜盐选择性平板：直径2.5mm，圆整或不齐，隆起混浊，无粘性，无色，湿润 4、选择性培养 取上述可疑菌落接种于3.5% Nacl-TSI 培养37 24小时 5、镜检：取上述可疑菌落镜检，应为革兰氏阴性，无芽胞多形态，两端浓染副溶血弧菌在蔗糖琼脂（tcbs）平板上的菌落,副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征典型 副溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色 ， 霍乱弧菌和其它弧菌显无色6、嗜盐性试验,将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，37 24小时，观查生长情况盐含量0、3、7、9、11% ， 在3-7 %生长良好11,,7、生化试验,分别接种各类生化培养基，置37 恒温培养。
除V-P、靛基质、甲基红试验培养48小时后加试剂观察外，其他均可在24小时观察试验结果判定参照下表7、生化试验,副溶血性弧菌的生化性状表,,,,,8、动物试验,凡符合副溶血弧菌生化反应的菌株，一般都有毒力，因此都应做动物试验，常用的试验方法有： 小白鼠毒力试验： 将上述各类反应的副溶血弧菌接种到3.5%氯化钠胨水中，置37 培养16-18小时待用用3.5%氯化钠胨水培养物0.3ml注射到体重13-15g小白鼠的腹腔内观察2-3d，常见有竖毛，不活泼，食欲不振，腹部贴在饲养缸底，呼吸困难，不幸蹒跚，有时发生痉挛性跳动，四肢抽搐及尾部痉挛性震动，大多在24-48小时内死亡将小白鼠进行解剖检查和分离培养8、动物试验,De试验 将家兔的腹壁手术切开，露出小肠，选取约5cm的一段，将两头用手术线结扎，注入3.5%氯化钠胨水培养物，并另选两段作阳性和阴性对照，如分离段膨胀隆起，小肠水肿充血说明该菌有致病性9、结果报告,样品经过增菌培养、分离培养后，根据形态观察、生化试验、动物试验的结果判断是否发现副溶血弧菌并报告制思考题：,1、副溶血性弧菌的形态与染色有何特点 2、副溶血性弧菌的生化特性中最有特点的是哪个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是副溶血性弧菌。
3、副溶血性弧菌在TSI，Nacl蔗糖，嗜盐选择性平板上培养特征如何？,。