单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,,,实验十三 卵磷脂的提取及其 组成鉴定,,一、实验目的,,学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法巩固抽滤等基本操作1,,二、基本原理,,卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约8％可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水解液中检查出这些组分其分离提取的流程如下：,,2,,3,,卵磷脂彻底水解的产物是什么？,完全水解,H,O,C,H,C,H,2,OH,C,H,2,OH,R,1,C,O,OH,R,2,C,O,OH,+,C,H,2,C,H,2,N,(,C,H,3,),3,HO,OH,－,P,O,HO,OH,OH,甘油,脂肪酸,磷酸,胆碱,,答：,4,,三、仪器和药品,,仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花,,药品：熟鸡蛋黄 20％NaOH溶液 10％Pb(AC),2,1％CuSO,4,溶液 硫酸 95％乙醇 氯仿 丙酮 碘化铋钾溶液,5,,四、实验步骤,,1．卵磷脂的提取,,（1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95％乙醇研磨，再加入10ml 95％乙醇充分研磨，减压过滤(,应盖满漏斗,)，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加10ml 95％乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。
2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解4）在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出，,,搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）6,,2．卵磷脂的水解及其组成鉴定,,（,1）水解：,取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤滤液供下面检查用2）检查,,脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加1滴20％氢氧化钠溶液与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液，以硝酸酸化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化,,甘油的检查：取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml(二十滴)，2滴,,20％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液,,振摇，观察所得结果胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成7,,[注释],,1.,第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份，,,滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏,,漏 斗（不换滤纸）反复滤清。
2. 蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干3. 黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中，否则会带入杂质4. 搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状5. 加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味6. 加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生成，浑浊进一步增强7. 生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜，沉淀逐步溶解8. 克劳特试剂为含有KI－BiI,3,复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀8,,思考题：,1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？,,2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作,,何解释？,,3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？,,4．为什么实验中要进行减压过滤？,,操作时应注意哪些地方？,,9,,R,1,-COO-CH,2,,R,2,-COO-C—H,,CH,2,—O—,P,—,O—,R,,,,OH,O,1,,2,,*,,3,R,1,常为饱和脂肪酸如C16，C18,R,2,常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸,R,= —CH,2,CH,2,-,N,(CH,3,),3,OH,,为：,卵磷脂,+,,-,+,,-,HO-CH,2,CH,2,-,N,(CH,3,),3,OH,,胆 碱,,Question 5,,卵磷脂,彻底水解的产物是什么？,,,10,,CO,2,-CH,2,,CO,2,-CH,,CH,2,O,-,P,-,O,-,CH,2,CH,2,-N(CH,3,),3,,,O,O,+,H OH,-,由于甘油磷脂分子中磷酸部分还有一个可以电离的H,+,，而胆碱或胆胺部分又有碱性基团，故甘油磷脂以偶极离子的形式存在。
非极性端,,疏水端，亲油端,磷脂分子中同时具有,疏水基,和,亲水基,正是由于这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要的生理作用极性端,,疏油端，亲水端,H-OH,11,,。