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1、微生物标本正确采集及运送,标本采集的意义,明确诊断真正致病菌 病情追踪 指导制定治疗措施 抗生素选择 抗生素更换 预后推测 减少细菌耐药性,结果无意义,规范化采集,不符合要求,提供重要临床感染信息,处理失当造成 污染,误导临床,标本,检验前误差,检验前误差: 病人准备、标本采集、标本储存及运送不规范,Clin Chem. 2007 Jul;53(7):1338-42. Epub 2007 May 24 Clin Chem Lab Med. 2006;44(6):750-9,检验前误差是导致检验结果失真的最主要原因之一,细菌诊断标本采集原则,用抗菌素前采集,不同时期、不同标本 采样时严格执行无菌
2、操作,避免污染 采集真正病灶处且足量标本避免假阴性 标本需新鲜,不可添加防腐剂 立即送检愈新鲜标本愈容易分离病原菌,痰液标本采集,采集时间:晨痰,因晨痰量多,且含菌量也多 先以冷开水漱口刷牙,有假牙者应取下假牙 做深呼吸数次后收腹用力深咳 将痰吐到宽口无菌加盖容器 2小时内送达检验室(未能及时送检于4保存) (苛养菌如肺炎链球菌减少,正常菌过度生长) 年老体弱、无力咳痰、下呼吸道分泌物不多时,怎办?,痰标本采集,耐心宣讲,取得患者合作 翻身叩背,附着痰液松动易于排出 雾化吸入生理盐水或高渗盐水,使痰液稀薄,痰液增多,而易于排出,标本质量,带血痰,唾液,脓痰,白色粘液痰,黄色粘液样痰,唾液痰,粘
3、液丝,卫生部医政司全国临床检验操作规程,鳞状上皮细胞SBC25 白细胞WBC25 /每低倍视野为合格痰 =接受培养,卫生部医政司全国临床检验操作规程,鳞状上皮细胞SBC25 白细胞WBC25 /每低倍视野 鳞状上皮细胞SBC10-25 白细胞WBC25 /每低倍视野,卫生部医政司全国临床检验操作规程,白细胞吞噬革兰阴性杆菌 / 革兰阳性球菌 未见白细胞吞噬,血液标本采集,采集时机 消毒规范 双侧双瓶,最佳采血时机-1,研究指出: 在使用抗生素前采血,阳性率是用药后采血的2.2倍!,最佳采血时机-2,病人准备:正确消毒方式,培养瓶消毒:以75%酒精消毒瓶口 皮肤消毒: 采血点由内往外,以75%酒
4、精用力涂抹皮肤 内往外划圈用力涂抹皮肤,待干燥以达杀菌效果 (等待时间:碘伏约1-3分钟,碘酊约30秒) 75%酒精由内往外去除碘液,避免污染,血培养采集,绿色盖子:含活性炭需氧 橘色盖子:含活性炭厌氧 紫色盖子:普通厌氧 蓝色盖子:普通需氧 黄色盖子:普通小儿瓶,血培养采集,双侧双瓶,为何?,提高阳性率,判断污染与否,影响血培养阳性率因素,血培养的组合与检出率,J Clin Microbiol. 2007; 45:3546-3548,致病菌和污染菌的鉴别,真正菌血症: 分离有毒力的菌株 肺炎链球菌 克雷伯菌属 假单胞菌属 金黄色葡萄球菌 肠杆菌科 念珠菌属 存在危险因素 免疫抑制 假体手术
5、留置导管 多部位分离相同菌株,污染菌 培养时间长 后续培养没有可重复性 分离多种微生物 临床情况不提示存在感染 分离皮肤定植菌 凝固酶阴性葡萄球菌: 类白喉杆菌 杆菌属,3天阴性的血培养-需重送检,有临床意义的分离菌: 在2天内被检出占94%,在3天内被检出占97%,J Clin Microbiol. 2005; 43:2506-2509,97,做厌氧血培养的价值?,只做需氧瓶不做厌氧瓶培养 19%-29%的菌株不能发现 5%的血培养延迟1天报告阳性结果 采集厌氧瓶同时增加采血量 每增加1 ml血液阳性率增加3% Clin Infect Dis, 1999,29:1309-1311 中华检验医
6、学杂志,2000,23:285 Eur J Clin Microbiol Infect DDis, 2001,20:217-219,采集方式 严格无菌皮肤消毒 穿刺针穿刺抽取 无菌试管或针筒直接送检 (亦可直接打入血瓶内送检-同时具增菌功能,缩短TAT) 即时送检、不能冷藏 做厌氧培养输送过程严禁接触环境氧,无菌体液采集,脑脊液采集,采集方式: 碘酒、酒精消毒皮肤L3,L4间穿刺入蜘蛛膜 穿刺后分装3-5 ml至无菌试管 检测细菌、病毒 1 ml 检测真菌、抗酸菌 2 ml 注意事项: 迅速送至实验室 细菌培养保存于35温箱或室温,因嗜血杆菌及奈瑟氏菌对温度敏感 检测病毒、真菌、分支杆菌4保存
7、,L3 L4 L5,尿液,清洁中段尿(自然排尿) 直接导尿可能下尿道细菌引入膀胱,导致继发感染 常规法消毒尿道外围 以无菌方式将导管插入膀胱 耻骨上膀胱穿刺法 (厌氧检查适用) 导管消毒后以空针抽取5-10ml尿液 有尿路感染症状但中段尿培养菌数很少 小儿收集包 留置尿导管收集法 O 穿刺导尿管吸取尿液 X 尿液收集袋中采集,女性 肥皂清洗尿道外围 以无菌纱布擦拭 用手分开大阴唇 先排出前段尿液,再以无菌宽口容器收集中段尿液,男性 肥皂清洗尿道外围 以无菌纱布擦拭 扶起茎阴翻上包皮 先排出前段尿液,再以无 宽口容器收集中段尿液,最好留取早晨清洁中段尿标本,自然排尿-中段尿,尿标本采集注意事项,
8、留取尿培养标本时需以无菌操作 注明是否使用抗生素 女患者月经期不宜留取尿标本 会阴部分泌物过多,应先清洁冲洗再收集 4-8保存不可超过24小时 标本如不能立即送检,应存放于冰箱,生殖泌尿道标本,依不同感染种类和病变特征采集不同标本 尿道标本,用生理盐水局部清洗,无菌棉拭子插入尿道口1-2 cm停留十余秒,轻轻旋转拭子 外阴部糜烂、溃疡,生理盐水清洗后取病灶边缘分泌物 阴道和宫颈口分泌物须在窥阴器下用长拭子采集 子宫内分泌物用无菌导管外套一层保护膜,插入子宫后再刺穿该膜予负压吸引,可减少阴道菌群污染 女性盆腔脓肿,应局部消毒阴道由子宫陷凹处进针抽取,生殖泌尿道标本,2支无菌棉花拭子分2次收集,其
9、中一支直接涂片 发育期或成年妇女抹片:尿道口、子宫颈或直肠 年幼女童:外阴部位取标本 男性:前列腺液需进行前列腺按摩获取 怀疑急性淋病:尿道分泌物 怀疑慢性淋病:前列腺或精囊 注意事项: 淋菌等病原菌检测需避免正常菌污染,取时尽量小心 淋菌低温会死亡,采取后请勿延误,速送细菌室培养,伤口、脓疡、脓,以70% 酒精消毒采检表面 开放式伤口:以棉棒采取深部标本 封闭式伤口:以空针抽取(约1ml) 如需厌氧培养,避免接触空气并及时送检,最好床边接种,可直接打入厌氧血瓶(增菌效果佳),粪便,自然排便 挑取带脓或血部分( 2g) 液状粪便取絮状物( 2ml) 置于无菌容器或置于保存液或增菌液送检 直肠拭
10、子 肥皂、水和70%的酒精清洁肛门周围 棉棒插入括约肌约 4-5cm(幼儿约2-3cm) 轻轻的旋转数圈后送检,注意事项,注意事项: 调取粪便的粘液、组织、脓或血液部分 送检前与微生物科联络,注明培养项目。沙门和志贺菌、致病性大肠杆菌、弧菌、念珠菌、菌群失调(难辨梭菌) 怀疑沙门菌感染应在发病2周后采集标本,标本运送、储存温度,标本送检时间限制,15 分钟,导管 CSF 眼结膜/角结膜检体 体液 胃液 羊水 鼻咽 组织,标本送检时间限制,2小时,脓疡、伤口、浓 血液培养 耳 直肠拭子 生殖道标本 痰、呼吸道标本 尿液,所有送检的检体都不要超过2小时的时间,病原微生物送检是感染控制的基础,经验用药:依据以往准确的流行病学数据!,如果临床送检标本太少, 就无法进行流行病学调查和跟踪; 如果送检标本比例失衡, 就无法获得准确的调查结果!,谢谢您的参与聆听,