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1、感染现状,1. 感染人数多 5.5 亿人感染过结核 2. 患病人数多 现有活动性肺结核患,者500万,3. 潜伏感染人数多 受限于检测条件 较难统计, 2009 年流行病调查结果 为总人口的 44.5%(因采用PPD检 测,假阳性较多),4. 新发患者多 仅活动性肺结核 2009,年新发病患 107 万,5. 死亡人数多 13 万/年,中国独立医学实验室领导者,T-spot.TB项目介绍,济南迪安医学检验中心 马凤美,其它检测技术 PPD(TST)实验 影像学检查 病理学诊断,实验室常规检测 细菌学诊断 免疫学诊断 分子生物学诊断 原检测手段,假阴性:免疫力低下或HIV人群,新生儿、老 弱人群
2、,药物影响,假阳性:BCG接种人群,其它分支杆菌感染, 交叉污染,肺外的结核感染无法明确诊断 抗痨治疗疗效无法评价,无法排筛结核感染,造成生物制剂或移植手术 治疗后病患免疫力下降,引发结核,形成医疗 事故,现有检测的不足之处:,WHO关于血清学检测声明,2011年7月20日,世界卫生组织( WHO )正式声明,要 求禁止将 血清学检测方法 (抗原,抗体,蛋白芯片等)用 于肺结核和肺外结核的诊断。,WHO warns against the use of inaccurate commercial serological tests for pulmonary and extra-pulmona
3、ry TB.,A substandard test with unreliable results, TB can be wrongly diagnosed, A serological test for diagnosing active TB disease is bad practice Problems of misdiagnosis, The inaccurate serological tests are costly, Selling substandard tests with unreliable results,T-SPOT.TB,结核感染T细胞检测,全球最精确的快速结核感
4、染检测, ,-干扰素释放实验 (IGRAs,interferon- gamma release assays ) 酶联免疫斑点技术 (ELISPOT,Enzyme-Linked ImmunoSpot assay) 结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6(ESAT-6,early secreted antigenic target 6 ) 培养滤液蛋白10(CFP 10,culture filtrate protein 10 ),技术背景,TB 抗 原 多 肽,T细胞,活化T细胞, 干扰素,-干扰素释放实验(IGRAs) 干扰素 检测阴性 干扰素 检测阳性,-干扰素释放实验(IGRAs),结核感染者体内
5、存在特异的效应T淋巴细胞,效 应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细 胞因子(IFN-)。,因此,检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核,潜伏感染者的诊断。,由于效应T细胞存活时间很短,而且具有 特异性,因此可以作为机体是否正处于被感 染的指标,无论是否有临床症状。,特点:,实验中采用的两个抗原 (ESAT-6 & CFP10) 均来自结核分枝杆菌基因组 RD1区域 所有的卡介苗均缺失 RD1 区基因,因此, 结核感染T 细胞斑点试剂盒不会受卡介苗接种影响,大多数环境分枝杆菌也缺失 RD1区基因(仅结核分枝杆菌复合群存在 RD1区),技术背景,ESAT-6与CFP 10抗原,病人需就医两
6、次 结果报告时间 48-72 小时 灵敏度有限,尤其是免疫低下者 特异性高 与卡介苗有交叉反应 与非结核分支杆菌有交叉反应 主观性判断,单次血液测试 第二日报结果 敏感度95.6%,免疫低下者仍有效 特异性97.1% 不受卡介苗接种影响 与非结核分支杆菌无交叉反应 每例样本均有阴阳对照, ,美国(CDC和儿科学会);加拿大 (加拿大结核病委员会);巴 西(卫生部) 英国(国家卫生和临床协会);法国(国家卫生局);西班牙 (西班牙肺病和胸部手术协会);德国(德国抗结核病中央委员 会); 意大利;瑞士(瑞士肺科协会);荷兰(实用结核病控制 委员会);丹麦(丹麦肺部医学会);挪威(挪威公共卫生协 会
7、);芬兰(国家卫生和福利协会);爱尔兰(国家结核病咨询 委员会);葡萄牙;捷克共和国; 斯洛伐克; 波兰; 保加利亚; 克罗地亚 澳大利亚(国家结核病咨询委员会、传染病协会和澳大利亚风湿 病协会);沙特阿拉伯;南朝鲜;日本(日本结核病预防协会) WHO 和 ECDC,-干扰素释放实验(IGRAs)在欧美国家得到全面 推广,并被写入诊疗指南,例1:英国结核诊疗指南, The National Institute for Health and Clinical,Excellence (NICE) released new clinical,guidelines for the use of inn
8、ovative TB blood tests called interferon-gamma release assays (IGRAs) for diagnosing latent tuberculosis infection (LTBI) on 24th March 2011., 英国国家健康与临床卓越研究所(NICE)发布 了新的临床指南,指出用创新TB全血实验,即 -干扰素释放实验,来诊断潜伏性结核感染,例2:英国皮肤病学诊疗指南, 2009年英国皮肤病学中TNF-治疗前结核筛查指南:,例3:瑞士抗TNF-治疗前筛查潜伏感染指南,Experts in rheumatology, gas
9、troenterology and pneumology agreed that:,1. A definite risk of tuberculosis exists with anti-TNF,agents, and all patients should be screened for tuberculosis and latent tuberculosis infection prior to any anti-TNF-a therapy.,2. The screening should be based on history,chest x-ray and an IGRA test.,
10、瑞士关于抗TNF-治疗前筛查结核潜伏感染的指南中建议: 1. 要求所有接受抗TNF-治疗患者在治疗前都应该进行结核,病检测和潜伏感染的筛查,2. 筛查应该基于既往史,X摄片和干扰素释放实验(T- SPOT.TB方法),用BD CPT 管或Ficoll提取液收集 外周血单个核细胞 过夜孵育,洗板,加入酶标二抗,结核特异抗原( ESAT-6/CFP 10) 刺激结核特异的效应 T淋巴细胞使 其分泌 - 干扰素 加入底物工作液,用肉眼或放大 镜计算斑点数,效应T淋巴细胞分泌的 -干扰素 与膜板预包被的抗 -干扰素抗 体结合并固定在细胞周围 1 个斑点=1 个效应 T细胞,实验过程,阴性结果,阳性结果
11、,阳性对照 (PHA ),实验结果 空白对照 特异性94.1% 抗原A ESAT-6 抗原 B CFP10,灵敏度95.3%,临床应用及科室,临床应用 1 、结核病辅助诊断 /疗效评价, ,“菌阴”结核病患者的辅助诊断 肺外结核的鉴别诊断 抗痨治疗的疗效评价,2 、免疫力低下 /受抑制患者的结核诊断/感染筛查, ,使用生物制剂 /免疫抑制剂患者的结核感染筛查 HIV感染者/ 肾透析患者/器官移植患者,3 、儿童结核病的辅助诊断 4 、结核密切接触者 /高危人群的结核感染筛查,结核病患者的家属 /医务工作者 /监狱囚犯,5 、接触追踪,肺内/外结核辅助诊断,2周以上不明原因发热病人的结核感染排筛
12、 诊断阴性结果95%以上可排除结核感染,结核/感染/呼吸科,生物制剂/免疫抑制剂使用前的结核筛查 肺结核与肺间质病的鉴别诊断 “结脑”和“狼脑”的鉴别诊断,写入由全国风湿病学权威署名的英夫利西,单抗治疗前结核预防与管理专家建议,风湿免疫科,腹水待查,肠结核的鉴别诊断 发热待查,生物制剂治疗前结核筛查(克罗恩病,炎,症性肠病),消化科,移植,HIV感染者并发结核,神经内科,结核性脑膜炎的辅助诊断,肾内科,肾结核的鉴别诊断,血透患者的结核筛查 内分泌科,糖尿病患者的结核筛查,血液科,血液病治疗前的结核筛查(血液病合并活动性结,核),生殖中心,盆腔结核造成不孕不育,试管婴儿手术前的结,核排筛,骨科,
13、骨结核诊断,其他科室,合并结核的相关疾病, ,艾滋:据报道,艾滋病患者合并结核病感染者为15.9%50%。HIV的流行已成为全球结核病发病率及 死亡率第三次回升的主要原因,而结核病也是艾滋病患者最常见的机会感染和致死病因。 风湿病:日前判断风湿病患者是否存在LTBI,除通过详细询问病史、行x线胸片检查外主要依靠 PPD试验的结果。而大部分患者在接受肿瘤坏死因子(TNF-)拮抗剂治疗之前往往已接受免疫抑制治疗, 包括甲氨蝶呤(MTX)、糖皮质激素等,这导致PPD试验假阴性率升高。 糖尿病:我国9 240万成年人有糖尿病,1.482亿成年人处于糖尿病前期。糖尿病是活动性结核的一个 中度甚至高强度的
14、危险因素。可能是因为持续的高血糖损害了针对结核杆菌的机体免疫。 血液病:血液病合并活动性结核发生率约为该发病率的15. 5 倍。因自身免疫功能低下, 大部分患者长 期用免疫抑制剂,PPD 试验阴性占多数,同时合并其他感染,使误诊率较高。 抗TNF治疗:广泛应用于免疫介导的炎性疾病(immunemediated inflammatory diseases,IMID), 如类风湿关节炎(RA)、强直性脊柱炎(AS)、银屑病关节炎、克罗恩病等。 其它疾病:肿瘤、晚期肾病、器官移植、肝硬化、肺隐球菌病、肺结核合并非结核分枝杆菌肺病、儿 童结缔组织疾病等。,(1)肝素抗凝全血,常温保存,(2)采血量:成人全血量4-6ML,儿童3ML,,免疫力或白细胞量低下者6-8ML,(3)标本要求32小时内达到实验室(建议取血,人员到达后采血),报告时间:2个工作日 收费标准:800元/测试,咨询电话:400-7118-000;,采血要求,项目的特点: 简便、快速、准确,