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1、1不同株人肝癌细胞对化疗药物杀伤作用的敏感性分析作者：刘晓波 蔡美英 阚和平 魏大鹏 王霞【摘要】 目的 研究化疗药物对不同株人肝癌细胞杀伤作用的敏感性。方法 采用 MTT 比色分析法测定多柔比星(DXRB)或米托蒽醌(DHAQ)对体外培养的 4 株人肝癌细胞的细胞毒作用。结果 DXRB 对 SMMC7721 细胞的杀伤作用最强，QJY 次之，HEPG2 和 Alexander 不敏感；DHAQ 对 QJY 细胞的杀伤作用最强，Alexander 和 SMMC7721 次之，同样 HEPG2 不敏感。结论不同株人肝癌细胞对同一化疗药物可具有不同的敏感性。 【关键词】 化疗药物； 人肝癌细胞；
2、细胞毒作用ABSTRACT Objective To investigate susceptibilities of four human hepatoma cell lines to chemotherapeutics. Methods MTT colorimetric assay was used to test in vitro cytotoxicities of the chemotherapeutics against human hepatoma cell lines. Results As for susceptibilities to doxorubicin (DXRB), S
3、MMC7721 cell line was the top, QJY cell line was second, Alexander cell line and HepG2 cell line were the less. While for susceptibilities to mitoxantrone (DHAQ), QJY cell line was the top, Alexander and SMMC7721 cell lines were second, HepG2 cell lines was the less. Conclusion Different human hepat
4、oma cell lines had different susceptibile to same chemotherapeutics.KEY WORDS Chemotherapeutics; Human hepatoma cell line; Cytotoxicity我国是原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma ，HCC)的高发国家，肝癌已占我国肿瘤死亡的第二位1 。多柔比星(DXRB，doxorubicin)等化疗药物局部化疗尤其是经肝动脉插管化疗已是肝癌非手术治疗的首选方法。临床上肝癌患者化疗有些效果较好，有些较差或者无效，其原因与肝癌的多药耐药性(multid
5、rug resistance，MDR)有关，也可能与不同肝癌患者对化疗药物敏感性差异有关。我们采用 4 株人肝癌细胞，进行了 DXRB 或米托蒽醌(mitoxantrone，DHAQ)的体外细胞毒实验，以评价人肝癌不同细胞株对化疗药物的敏感性，现将结果报道如下。1 材料与方法1.1 药品试剂DXRB 为浙江海门制药厂产品；DHAQ 由四川大学药学院张志荣教授提供；噻唑蓝(MTT)为 Fluka 公司产品； 二甲基亚砜(DMSO)为 AR，广州化学试剂厂产品。21.2 细胞株4 株人肝癌细胞(SMMC7721 、HEPG2 、QJY 和 Alexander)均为本室保种传代。1.3 MTT 比色
6、分析法参照文献方法2 ，在 96 孔板中加入细胞(0.51)104/孔，待细胞贴壁后加入不同浓度的 DXRB 或 DHAQ，于 37，5% CO2 条件下孵育一定时间，加入MTT(用 PBS 配成浓度 5mg/ml，12l/孔)，继续孵育 68h，吸弃上清，加入DMSO(150l/孔)，混匀后于 570nm 波长处测吸收光度(A570)，按下式计算杀伤率：杀伤率=1-实验孔 A570 对照孔 A570100% 2 结果与讨论2.1 DXRB 杀伤作用与药物浓度、作用时间的关系DXRB 对 SMMC7721 细胞具有较强杀伤作用，且具药物浓度依赖性(Fig.1)，随作用时间延长，杀伤作用增加，表
7、现为药物的半数抑制浓度(IC50)降低(Fig.2)。2.2 DXRB 对 4 株人肝癌细胞的杀伤作用DXRB 与细胞作用 72h 后，对 SMMC7721 细胞杀伤作用最强，对 QJY 次之，对于 HEPG2 和 Alexander 基本上无杀伤作用(Fig.3)，表明 DXRB 对不同株肝癌细胞杀伤作用的敏感性不同。2.3 DHAQ 对 4 株人肝癌株的杀伤作用Fig.1 Dosedependent cytotoxicity of DXRB toSMMC7721 human hepatoma cellsafter 48 hours coincubationFig.2 Time course
8、 for cytotoxicities of DXRB toSMMC7721 humanhepatoma cells 与人肝癌细胞作用 72h 后，DHAQ 对QJY 杀伤作用最强，Alexander 次之，SMMC7721 较弱，而 HepG2 基本上无杀伤作用(Fig.4)，表明 DHAQ 对不同株肝癌细胞杀伤作用的敏感性不同。2.4 DXRB 和 DHAQ 对 4 株人肝癌细胞杀伤作用比较3对于 SMMC7721 细胞，DXRB 杀伤作用强于 DHAQ；对于 QJY 细胞，DXRB、HDAQ 杀伤作用接近；对于 Alexander 细胞，DHAQ 杀伤作用强于 DXRB；对于 HepG2
9、 细胞，DXRB、DHAQ 均无有效杀伤作用(Tab.1)，表明不同株人肝癌细胞对于不同化疗药物杀伤作用的敏感性不同。DXRB、DHAQ 均为蒽环类化合物，化学结构类似。DXRB 是临床上常用广谱抗癌药，是肿瘤化疗方面最重要药物之一。DHAQ 是国产二类新药，临床研究中对乳腺癌和白血病等肿瘤抑制作用已得到肯定3 。肝癌的不同株系对同一种化疗药物敏感性差异很大(Fig.3，Fig.4)，提示在评价某一种化疗药物体外对某一肿瘤的药效时，应选用该种肿瘤的多株细胞来进行实验；也提示在临床用药时，一种化疗药物对同种肿瘤的不同个体疗效可能不同。【参考文献】1 叶胜龙. 肝癌生物治疗的研究进展J. 中华肝脏病杂志，1999，7(3)：191192.2 刘晓波，马布仁，曾祥元. 多抗甲素对小鼠巨噬细胞功能的影响J. 中国药理学通报，1994，10(6)：445448.3 马云鹏，郑升. 抗肿瘤药米托蒽醌J. 国外药学 合成药，生化药，制剂分册，1986，7(6)：324328.
