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1、1不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯及总多糖含量比较【摘要】 目的 通过测定不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量,探讨产地对当归药材质量的影响及当归道地性的科学依据。方法 采用高效液相色谱法和比色法,测定甘肃、云南、四川、陕西等地所产当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量。结果 在 4 个产地的当归中,阿魏酸、藁本内酯和总多糖的含量均以甘肃产当归为最高。结论 甘肃产当归质量较好,甘肃当归的道地性是有科学依据的。 【关键词】 当归；阿魏酸；藁本内酯；总多糖；高效液相色谱法Abstract：Objective To study the affection of cultivating regio
2、ns to the quality of Radix Angelicae Sinensis and the scientific basis of authenticity of Radix Angelicae Sinensis. Methods The amounts of ferulic acid, ligustilide and total polysaccharide in Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu, Yunnan, Sichuan, Shanxi provinces were determined by HPLC and
3、 UV spectrophotometry. Results Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu province possesses the highest contents of ferulic acid, ligustilide and total polysaccharide among that from four regions. Conclusion The quality of Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu province is better than that
4、from other regions. It is reasonable to regard Radix Angelicae Sinensis cultivated in Gansu province as authentic medical herbs.Key words：Radix Angelicae Sinensis；ferulic acid；ligustilide；total polysaccharide；HPLC当归为伞形科植物当归 Angelica sinensis(Oliv.) Diels 的干燥根,具有补血活血、调经润肠功效1,主产于甘肃,云南、陕西、四川等地亦有栽培。据考证,
5、中国历代一直以现今甘肃岷山山脉所产当归为道地品种,早在公元六世纪初,就已作为贡品2。为探讨产地对当归药材质量的影响及当归道地性的科学依据,我们对产于甘肃、云南、四川、陕西等地当归中阿魏酸、藁本内酯及总多糖含量采用高效液相色谱法和比色法测定。1 仪器与材料LC-10Avp 高效液相色谱仪(日本岛津),包括 LC-10Avp 泵、DAD SPD-M10Avp紫外-可见光检测器,C-R6A 数据处理机；722G 型分光光度计(上海光学仪器厂)。阿魏酸对照品(美国 Sigma；St.Louis,MO)；藁本内酯对照品由总后卫生部药检所提供；右旋糖苷(dextran,分子量 10000-20000,美国
6、 Sigma；St.Louis, MO)。当归采自甘肃岷县、宕昌,云南丽江、中甸,四川宝兴、南平,陕西龙县、平利。经过笔者鉴定为当归 Angelica sinensis (Oliv.)Diels。乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯。22 方法与结果2.1 色谱条件Nova-Pak C18 色谱柱(150 mm 3.9 mm,4 m), 预柱 Nova- Pak C18(20 mm3.9 mm,4 m)。流动相为乙腈-水(磷酸调至 pH 4.0),梯度洗脱,010 min,5%35%乙腈；1030 min,35%70%乙腈；3040 min,70%5%乙腈。检测波长为 284 nm,体积流量为 1
7、 mL/min,柱温为室温,进样量 20 L。在上述色谱条件下,阿魏酸、藁本内酯与样品中其它组分色谱峰可达基线分离,相邻色谱峰分离度大于 1.5。色谱图见图 1。2.2 对照品溶液的制备及对照品纯度检查精密称取阿魏酸、藁本内酯对照品(五氧化二磷减压干燥 36 h)适量,加甲醇制成 1 mg/mL 阿魏酸和 2 mg/mL 藁本内酯的混合对照品溶液,即得。将混合对照品溶液稀释 10 倍,备用。吸取混合对照品稀释溶液和空白试剂各 20 L,注入液相色谱仪,记录色谱图。除去甲醇溶剂峰后,按峰面积归一化法计算各对照品纯度,2种对照品质量分数均大于 99%。另精密称取右旋糖苷(105 干燥至恒重)0.1
8、 g,定容至 100 mL 量瓶中,得 0.1%右旋糖苷储备液。2.3 供试品溶液的制备取当归药粉约 0.5 g,精密称定,置 50 mL 离心管中,加甲醇 20 mL,超声提取(功率 120 W,频率 40 kHz)40 min,离心后收集上清液,重复提取 1 次,合并两次提取液,回收甲醇至干,精密加甲醇 2 mL 溶解,供阿魏酸、藁本内酯测定。另精密称当归药粉 5.0 g,加水 40 mL,加热,沸腾后保持 40 min。煎煮 2 次,过滤,滤液离心,合并 2 次上清液,冰冻干燥,即得。再精密称取该提取物 0.5 g,加水 2 mL 溶解,再加 95%乙醇使其浓度达 85%。静置 24 h
9、,抽滤。滤饼用 70%乙醇洗涤 5 次,然后溶解在 60 水中,2 000 r/min 离心 5 min,收集上清液,加水定容至 100 mL 容量瓶中,供测定多糖用。2.4 线性关系考察精密吸取阿魏酸、藁本内酯混合对照品稀释液 2、4、8、16、32、64 L,依次注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,各对照品含量(g)为横坐标,绘制标准曲线。另精密吸取右旋糖苷储备液0.10、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL 分别置 100 mL 容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,得各标准溶液系列。精密吸取各标准溶液 2.50 mL 于 10 m
10、L 具塞试管中,加入 5.00 mL 0.2%蒽酮-浓硫酸显色剂,摇匀,置沸水浴中加热 10 min,取出,放至室温,于 625 nm 波长处进行比色测定。另取 2.5 mL 蒸馏水同样操作,作空白对照。各对照品的回归方程、相关系数及线性范围(mg/mL)如下：阿魏酸：Y210-7X0.036 2,0.999 4,0.11.6；藁本内酯：Y410-7X0.013 2,0.999 6,0.812.8；右旋糖苷：Y6.0110-3X4.7110-3,0.999 1,0.010.11。32.5 精密度试验分别精密吸取阿魏酸、藁本内酯对照品稀释液 20 L,重复进样 6 次,测定峰面积。另取当归总多糖
11、测定样品液 2.50 mL,按照样品多糖含量测定方法测定吸收值,重复测定 5 次。结果阿魏酸、藁本内酯和多糖的精密度 RSD 分别为1.36%、1.34%、2.21%。2.6 重现性试验取当归样品 0.5 g,平行制备供试品溶液 5 份,进样,测定阿魏酸、藁本内酯峰面积积分值。另取当归样品 5.0 g,平行制备供测定多糖用的供试品溶液 5 份,按“样品含量测定”项下多糖测定方法操作,测定多糖含量。各对照品重现性RSD 为：阿魏酸 0.77%,藁本内酯 1.20%,多糖 2.81%。2.7 回收率测定精密称取 2 批已知含量的当归样品各 5 份,分别供测定多糖及阿魏酸、藁本内酯的回收率。其中供测
12、多糖的样品每份 5.0 g,测阿魏酸、藁本内酯的样品每份 0.5 g。2 批样品分别加入右旋糖苷对照品 5.0 mg,阿魏酸、藁本内酯对照品各 1.0 mg,制备供试品溶液,按“样品含量测定”项下各对照品测定法操作,测定各对照品含量,计算回收率。各对照品平均回收率(%)分别为：右旋糖苷 97.12,阿魏酸 97.83,藁本内酯 97.82。其 RSD 分别为 2.39%、1.23%、2.13%。2.8 稳定性试验取各供试品溶液,分别于配制后 0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12 h,按“样品含量测定”项下各对照品含量测定法操作,测定各对照品含量。阿魏酸、藁本内酯含量在 12 h
13、内基本稳定,多糖在 2 h 内稳定,其中阿魏酸、藁本内酯多糖 RSD 分别为 0.82%、0.50%、2.12%。2.9 样品测定阿魏酸、藁本内酯的测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液,注入液相色谱仪,测定峰面积积分值,按外标法计算,即得。多糖测定：精密量取供试品溶液2.50 mL,按多糖标准曲线项下做比色测定,计算样品中多糖含量。含量测定结果见表 1。表 1 不同产地当归中阿魏酸、藁本内酯及总多糖含量测定结果(略)注：与云南、四川、陕西产当归相比,*P0.01。3 讨论当归中的有效成分主要是阿魏酸、藁本内酯及多糖类。其中阿魏酸具有抑制血小板凝集的作用,藁本内酯能抑制子宫平滑肌,多糖类可促进造
14、血功能。这些成分通常作为当归质量优劣的评价指标3-4。因此,本实验通过测定这些成分的含4量来评价不同产地当归的品质。结果表明：在甘肃、云南、四川、陕西 4 个省区所产的当归中,甘肃产当归中阿魏酸、藁本内酯和总多糖含量明显高于其它产区,具有显著性差异。因此,甘肃当归质量的确要优于其它产区的当归,其道地性有一定的科学依据。【参考文献】1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)S.北京：化学工业出版社,2005.71.2 胡世林.中国道地药材M.哈尔滨：黑龙江科技出版社,1989.461.3 Liu CX, Xiao PG, Li DP.Modern Research and Application of Chinese Medicinal PlantsM.Hong Kong：Hong Kong Medical Publisher, 2000.166169.4 Song ZY.The Modern Studies on the Chinese Meteria MedicaM. Vol.2. Beijing：Peking Union Medical College and Beijing Medical University Press,1996.125.
