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1、探讨APE1在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义摘要： 目的： 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶（APE1）基因在卵巢上皮性癌中表达的相关性及其意义. 方法： 应用免疫组织化学检测10例正常卵巢、20例卵巢良性肿瘤、15例卵巢交界性肿瘤和120例卵巢上皮性癌组织中APE1的表达，并分析其与临床病理因素之间的关系. 结果： 卵巢癌组织中APE1呈胞核表达、单纯胞质表达或核质共同表达，胞质异位表达率（%）明显高于正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤. APE1胞质表达与卵巢癌病理类型、肿瘤分化程度和FIGO分期有关（P）. APE1胞核表达的化疗有效率为%，高于APE1胞质异位表达%，APE1胞核表达的卵巢癌患者
2、预后要优于APE1胞质异位表达的卵巢癌患者（P）. 结论： APE1表达在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用，APE1的亚细胞定位对卵巢癌化疗的疗效和预后有一定临床应用前景.关键词： 卵巢肿瘤；脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶；DNA损伤；免疫组织化学0引言卵巢癌是较常见的女性生殖系统肿瘤，恶性程度高，近年来其发生率在国内外呈上升趋势. 寻找敏感性高、特异性强的肿瘤标记物是卵巢癌诊治中急待解决的问题. 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1，是DNA碱基切除修复途径的关键酶，主要负责DNA损伤中最常见的脱嘌呤/脱嘧啶位点1. 有研究2-3报道，APE1在多种肿瘤组织中高表达，但APE1在卵巢癌组织中的表达还少见报道.
3、 我们采用免疫组织化学技术检测原发性卵巢癌手术标本中APE1的表达特点，旨在从临床病理角度探讨APE1在卵巢癌发生发展中的作用.1对象和方法对象选择第四军医大学西京医院和第三军医大学大坪医院199801/20XX01经手术确诊的卵巢上皮癌初治患者120例，年龄1981（平均）岁，其中浆液性囊腺癌54例，粘液性囊腺癌35例，子宫内膜样癌7例，未分化腺癌24例. 细胞学分级：高分化癌19例，中分化癌68例，低分化癌33例. 按国际妇产科联盟（FIGO)20XX年手术病理分期标准进行分级，其中I期23例，期11例，期73例，期13例. 另取良性卵巢肿瘤20（浆液性囊腺瘤10，粘液性囊腺瘤10）例，年
4、龄2367（平均）岁，交界性肿瘤15例，2162（平均）岁和正常卵巢组织10例，年龄3863（平均）岁作为对照. 所有标本均经40 g/L甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色后再次复核诊断. 浓缩型APE1兔抗人mAb，工作浓度为15000（美国Novus Biologicals公司）；SP免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术公司）；Imagepro 图像分析系统（美国Media Cybernetics Inc公司）.方法免疫组织化学染色采用SP二步法进行检测. 选取组织蜡块进行连续切片，片厚4 m，6080烤片20 min，常规脱蜡，乙醇梯度水化，30 mL/L H2O2甲醇封
5、闭内源性过氧化物酶活性，室温10 min，PBS洗3次，每次5 min. 将切片浸入 mol/L柠檬酸缓冲液，微波炉加热至沸腾后断电，间隔5 min后重复1次，PBS洗3次，每次5 min. 滴加5 mL/L正常山羊血清封闭10 min，滴加15000稀释的APE1一抗，湿盒内4冰箱保存过夜，滴加Power VisionTM复合物50 L，37孵育30 min，DAB显色，苏木素复染. 采用磷酸盐缓冲液代替一抗作为免疫染色阴性对照，采用已知APE阳性的骨肉瘤标本作为阳性对照.结果判定光学显微镜下观察，免疫阳性信号为棕黄色细小颗粒. 每张切片随机选取5个具有代表性的视野（400倍），用Image
6、pro 图像分析系统自动选取阳性区域并计算积分吸光度值，评价APE1蛋白表达水平. 将出现APE1单纯胞质表达与核质共表达统称为胞质异位表达.疗效评价将120例卵巢癌患者中满足下列条件的病例纳入评价对象： 卵巢癌初治患者； 术后给予以铂类为基础的规范化疗，不少于6个疗程（3 wk为1个疗程）； 术后随访3 a. 根据体检、影像学检查（盆腔B超及必要时的全身CT和PET检查），CA125检查的结果进行客观近期疗效评价，按WHO实体瘤疗效评价标准分为：临床完全缓解，部分缓解，病灶稳定和疾病进展. 疾病进展评定标准为： 对于可测量病灶，按照新的实体瘤评价标准即病灶最大径线总和增加20%以上或出现新病
7、灶4； 对于不可测量病灶，CA125最低值的2倍5. PR加CR视为有效.统计学处理：采用软件进行统计分析，各组均数之间比较采用t检验，计数资料采用2检验，logrank检验生存差异，kaplanMeier法绘制生存曲线. P为差异具有统计学意义.2结果在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢癌肿瘤和卵巢癌组织中的表达正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤中APE1呈胞核表达，交界性卵巢肿瘤APE1亦呈胞核表达，个别存在胞质表达；而卵巢上皮癌组织APE1呈胞核表达、胞质表达或核质共同表达. 卵巢癌组织中APE1胞质异位表达率为%，卵巢交界性肿瘤组织中APE1胞质异位表达率为%，两者差异无统计学意义，但卵巢
8、癌组织胞质异位表达率与良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织相比较，有显著性差异. 计算积分吸光度值结果表明，卵巢癌组织和交界性卵巢肿瘤组织A值与正常卵巢和良性卵巢组织相比，明显增高，差异具有统计学意义.卵巢癌APE1亚细胞定位与临床病理因素间的关系APE1的亚细胞定位与病理类型、FIGO分期和肿瘤细胞分化程度相关性，与淋巴结转移、腹水无明显相关性. 晚期卵巢癌组织中胞核表达率为%，较早期卵巢癌组织中的胞核表达率%降低；随着肿瘤细胞分化程度降低，卵巢癌细胞质表达的比例逐渐增高（表1）.表1APE1亚细胞定位与临床病理因素间的关系卵巢癌APE1不同亚细胞定位与化疗近期疗效的关系共有79例卵巢癌患者纳入疗效评
9、价，APE1胞核表达和APE1胞质异位表达的化疗有效率（完全缓解+部分缓解）分别为%（41/53例）和%（15/26例），两者差异均有统计学意义（P）.卵巢癌APE1不同亚细胞定位与无进展生存时间的关系卵巢癌79例患者随访时间为3690 mo，胞核表达和胞质异位表达的中位无进展时间分别为16 mo和10 mo，差异有统计学意义（P，图2）.3讨论APE1是DNA修复酶家族中的一员，主要通过碱基切除修复方式切除DNA上大量的AP位点而保持遗传物质的稳定性. AP位点具有基因毒性和细胞毒性,如得不到修复则会引起细胞凋亡或突变而致肿瘤形成6. 此外，APE1还能通过氧化还原功能参与氧化应激、细胞周期
10、调控与凋亡等多种关键的细胞反应7. 因此，APE1与细胞增殖、分化及损伤修复有关. 本研究发现，APE1在卵巢癌组织中呈高表达，与正常卵巢及良性卵巢肿瘤组织相比较，差异有统计学意义（P），提示APE1表达增强与卵巢癌的发生密切相关，是卵巢癌发生的早期事件.研究表明，多种肿瘤中可见到与相应正常组织不同的APE1/Ref1细胞分布形式2-3. 例如正常大肠黏膜呈胞核阳性表达，少数癌旁大肠黏膜APE1呈胞质异位表达，而大肠腺瘤和大肠癌组织却发现广泛的胞核和胞质定位. 本研究结果表明，卵巢上皮癌APE1表达亚细胞定位也发生了明显变化，呈胞核表达、胞质表达及核质共同表达三种形式，染色强弱不等. 卵巢癌组
11、织APE1胞质表达率（%），卵巢交界性肿瘤APE1胞质表达率为%，两者均明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织，差异有统计学意义.我们还进一步探讨了APE1胞质异位表达与卵巢癌临床病理因素间的关系，结果表明APE1不同的亚细胞定位与病理类型、细胞学分化程度和FIGO分期有关，与年龄、腹水和淋巴结转移无关. 在低分化的卵巢癌组织和晚期卵巢癌组织中，APE1的胞质异位表达明显增多，提示APE1表达随着卵巢癌病程进展而增强，表现为由胞核表达向胞质表达过渡，当胞质内出现APE1强表达时可作为恶性生物学行为的标志.我们发现，APE1蛋白的亚细胞定位与卵巢癌化疗疗效与无进展生存时间相关. APE1胞核表达的化
12、疗有效率为%（41/53例），高于APE1胞质异位表达%（15/26例）. 而APE1胞质异位表达的卵巢癌患者和APE1胞核表达的卵巢癌患者相比，预后较差. 这一结果提示对卵巢癌患者APE1表达部位和强度的检测可为其疗效判断和预后评估提供一定的帮助.【参考文献】1 Gros L, Ishchenko AA, Ide H, et al. The major human AP endonuclease is involved in the nucleotide incision repair pathwayJ. Nucleic Acids Res, 20XX,32:73-81.2 张沁宏，肖华亮，
13、李增鹏，等. 肝细胞癌组织中DNA损伤修复基因APE1表达意义J. 世界华人消化杂志，20XX，13（4）：508-511.3 向德兵，牟江洪，谢家印，等. 大肠癌APE1的表达特点及临床意义J. 解放军医学杂志，20XX，31（2）：115-116.4 Therasse P, Arbuck SG, Eisenhauer EA, et al. New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors. European organization for research and treatment of cance
14、r, national cancer institute of the united states, national cancer institute of canadaJ. J Natl Cancer Inst, 20XX, 92:205-216.5 Rustin GJ, Marples M, Nelstrop AE, et al. Use of CAl25 to define progression of ovarian cancer in patients with persistently elevated levelsJ. J Clin Oncol, 20XX,19：4054-40
15、57.6 Misra RR, Ratnasinghe D, Tangrea JA, et al. Polymorphisms in the DNA repair genes XPD, XRCC1, XRCC3, and APE/ref1, and the risk of lung cancer among male smokers in FinlandJ. Cancer Lett, 20XX, 191:171-178.7 Tell G, Damante G, Caldwell D, et al. The intracellular localization of APE1/Ref1: More than a passive phenomenon?J. Antioxid Redox Signal, 20XX, 7:367-384.
