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1、肺癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤，并已成为绝大多数国家癌症死亡的主要原因。其中以非小细胞肺癌(NSCLC)最常见。目前靶向治疗已经成为非小细胞肺癌（NSCLC）临床治疗的重要手段。易瑞沙（Iressa/吉非替尼/Gefitinib,阿斯利康）和特罗凯（Tarceva/厄罗替尼/Erlotinib，罗氏制药）作为表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，是美国FDA批准用于NSCLC靶向治疗的主要药物。但是，临床试验表明易瑞沙和特罗凯仅对10-30%的NSCLC病人有显著疗效。进一步的研究发现EGFR基因突变与NSCLC靶向治疗的疗效具有相关性，绝大多数携带EGFR基因突变的病人疗
2、效显著。大量研究资料表明EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区(tyrosine kinase coding domain，18-2l外显子)，其中19外显子多为框内缺失(746-753)性突变，约占所有突变的45；21外显子多为替代突变(主要是L858R)，约占所有突变的40。目前普遍认为，这两个热点突变可以增强肿瘤细胞对TKI的敏感性，并且可作为TKI治疗的有效预测指标。因此，检测EGFR基因突变对于指导NSCLC病人临床用药具有重要的参考价值。表皮生长因子受体（EGFR）是一个170 kDa的跨膜糖蛋白受体酪氨酸激酶，由表皮生长因子激活，影响细胞的生长和分化。EGF 或 TGF 对EGF
3、R的结合激活受体的酪氨酸激酶活力。 EGFR羧基末端的酪氨酸残基Tyr 1068、Tyr 1148、 和Tyr 1173是EGF结合后发生的自动磷酸化的主要位点。一旦被激活，EGFR1068位和1173位磷酸化的酪氨酸残基就能介导 Grb2对EGFR的结合。此外，1173位磷酸化的酪氨酸残基是 SHC在EGFR上的主要结合位点。EGFR广泛分布在许多正常和恶性上皮细胞中，其过度表达和自我激活可能与许多肿瘤的发生发展有关。目前主要用于各种上皮源性恶性肿瘤包括头颈部鳞癌、肺癌、乳腺癌和膀胱癌等的研究。表皮生长因子受体介导的信号转导途径 表皮生长因子与其受体表皮生长因子受体结合后可引发一系列细胞内变
4、化，最终使细胞发生分化或增殖。表皮生长因子受体是一种受体酪氨酸蛋白激酶，而受体酪氨酸蛋白激酶RasMAPK级联途径是表皮生长因子刺激信号传递到细胞核内的最主要途径。它由以下成员组成：表皮生长因子受体含有SH2结构域的接头蛋白(如Grb2)鸟嘌呤核苷酸释放因子(如SOS)Ras蛋白MAPKKK(如Raf1)MAPKKMAPK转录因子等EGF受体介导的信号转导过程 表皮生长因子与受体结合后，可以使受体发生二聚体化，从而改变了受体的构象，使其中的蛋白酪氨酸激酶活性增强，受体自身的酪氨酸残基发生磷酸化，磷酸化的受体便形成了与含SH2结构域的蛋白分子Grb2结合的位点，导致Grb2与受体的结合。Grb2
5、中有两个SH3结构域，该部位与一种称为SOS的鸟苷酸交换因子结合，使之活性改变，SOS则进一步活化Ras，激活的Ras作用于MAPK激活系统，导致ERK的激活。最后ERK转移到细胞核内，导致某些转录因子的活性改变从而改变基因的表达状态及细胞的增殖与分化过程。EGFR是原癌基因c-erbB1的表达产物，是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一。该家族包括HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。 EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGF
6、R信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。 分布EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。 EGFR研究进展EGFR的单克隆抗体西妥昔单抗和帕尼单抗的问世大大拓宽了转移性结直肠肿瘤疗效，而当人们意识到使用免疫组织化学技术
7、检测EGFR蛋白表达阳性与应用EGFR单抗治疗的疗效并没有相关性，便致力于可能的疗效预测标志物的研究。EGFR信号转导系统下游的例如K-ras、BRAF、PIK3CA的基因突变，以及肿瘤抑制基因PTEN的失活都成了研究的热点。在结直肠癌中，K-ras基因突变率为35%-45%，已成为EGFR单克隆抗体治疗转移性结直肠癌的主要疗效预测标志物。另外，在K-ras野生型基因的患者中，BRAF、PIK3CA基因突变以及PTEN的缺失表达，都可能与EGFR单克隆抗体的耐药有关，但在这些可能的疗效预测标志物被运用到临床实践中前，还需进一步地研究以明确他们的价值，以期在选择适合接受EGFR单克隆抗体的患者中
8、起到更大的作用，而K-ras基因突变被作为治疗前的疗效预测标志物，则是开创了转移性结直肠癌个体化治疗的第一步。 编辑本段其他相关资料EGFR和KRAS基因检测意义EGFR表达 EGFR表达 EGFR表达于正常上皮细胞表面，而在 一些肿瘤细胞中常过表达，EGFR的过表达 和肿瘤细胞的转移、侵润、预后差有关。 EGFR信号通路 EGFR信号通路 Shc Grb2 PI3K Sos-1 Ras MEKK-1 Raf MEK mTOR MKK-7 ERK JNK AKT EGFR靶向药物分类 EGFR靶向药物分类 EGFR突变 EGFR突变 EGFR酪氨酸激酶区域的突变主要发生在1821外 EGFR酪
9、氨酸激酶区域的突变主要发生在1821外 酪氨酸激酶区域的突变主要发生在18 显子, 其中19和21号外显子突变覆盖突变的 90%. 显子, 其中19和21号外显子突变覆盖突变的 19 细胞外区域 跨膜区域 细胞内区域 EGFR突变率 EGFR突变率 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% NS腺癌 NS 腺癌 东亚 欧美 EGFR突变细胞 癌基因休克假说 EGFR突变细胞癌基因休克假说 突变细胞 EGFR基因检测在肺癌中的应用 EGFR基因检测在肺癌中的应用检测方法：DNA测序法 检测方法 检测周期: 检测周期 7-10天 检测位点：EGFR的1
10、8，19，21号外显子 检测位点 标本要求： 标本要求 肿瘤组织病理切片，厚度8-10m, 5-10张，要 求肿瘤组织占标本的70%以上 支气管镜活检组织，厚度8-10m，需要10张 切片 KRAS基因检测 KRAS基因检测 KRAS蛋白处于EGFR信号 通路通路的下游。在生理情况 下，EGFR信号通路活化后， KRAS蛋白短暂激活，其后迅 速失活，KRAS激活/失活效应 是受控的。 而KRAS基因突变时，可以 导致EGRF信号通路持续激活， 加 速 肿 瘤 细 胞 增 殖 。 KRAS基因突变 KRAS基因突变 KRAS基因突变96%发生在第2号外显子的 12、 13号密码子。 20% 非小
11、细胞肺癌、30-35%大肠癌患者中 存在KRAS基因突变。 KRAS基因检测的重要性 基因检测的重要性 ? K-ras基因可以是正常状态（称为野生型）或异常状态 （突变型）。 ? K-ras突变型编码异常的蛋白，刺激促进恶性肿瘤细胞的 生长和扩散；并且不受上游EGFR的信号影响，所以对抗 EGFR治疗效果差。 KRAS基因检测可以筛选出EGFR靶向治疗药物有效的大肠 癌患者，帮助医生选择对肿瘤病人最有效的治疗方法，实 现肿瘤病人的个体化治疗。 目前在欧美国家，大肠癌患者内科治疗前已经常规检测 KRAS状态，并且成为能否报销相关抗EGFR治疗费用的凭 据。 KRAS基因 - K-ras基因突变发
12、生的时间 基因 基因突变发生的时间 ? K-ras基因突变发生在肿瘤恶变的早期，并 且原发灶和转移灶的K-ras基因高度保持一 致。一般认为，K-ras基因状态不会因治疗 而发生变化。 大肠癌患者K-ras基因突变异 常的概率为30%35%。 KRAS基因 - K-ras基因检测（K-ras,p21） 临床意义 ? 检测K-ras基因突变是深入了解癌基因的情 况、了解各种癌症的发展预后、放化疗疗 效的重要指标。 ? 1.K-ras基因突变发生在肿瘤恶变的早期， 并且原发灶和转移灶的K-ras基因高度保持 一致。一般认为，K-ras基因状态不会因治 疗而发生变化。 ? 2.K-ras基因突变见于
13、20%的非小细胞肺癌 (NSCLC)，其中肺腺癌占30%50%。 KRAS基因检测在大肠癌中的应用 KRAS基因检测在大肠癌中的应用检测方法：DNA测序法 检测方法 检测周期: 检测周期 7-10天 检测位点：KRAS基因第2外显子的12，13密码子 检测位点 标本要求： 标本要求 肿瘤组织病理切片，厚度8-10?m, 5-10张，要求肿 瘤组织占标本的70%以上。 肠镜活检组织，厚度8-10?m，需要10张切片。 项目开展情况生物治疗研究室于2009年10月开始 进行靶向药物特异靶点的基因检测工作， 目前已经独立检测60余例，突变率达到27%， 为个体化治疗提供依据，取得较好的临床疗 效，希
14、望更多的临床医生充分利用这个技术 平台，实现肿瘤病人的个体化治疗。 上皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR）是上皮生长因子（EGF）细胞增殖和信号传导的受体。EGFR属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR (ErbB-1), HER2/c-neu (ErbB-2), Her 3 (ErbB-3) 和 Her 4 (ErbB-4)。EGFR也被称作HER1、ErbB1，突变或过表达一般会引发肿瘤。EGFR是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体，细胞膜贯通，分子量170Da。 EGFR位于细胞膜表面，靠与配体结合来激活，包括EGF和TGF
15、（transforming growth factor ）. 激活后，EGFR有单体转化为二聚体-尽管也有证据表明，激活前也存在二聚体。EGFR还可能和ErbB受体家族的其他成员聚合来激活，例如ErbB2/Her2/neu。 EGFR二聚后可以激活它位于细胞内的激酶通路。包括Y992, Y1045, Y1068, Y1148 and Y1173等激活位点。 这个自磷酸化可以引导下游的磷酸化，包括MPAK，Akt和JNK通路, 诱导细胞增殖。 受体激活对于皮肤的免疫来说很重要。 研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的
16、抑制有关。其可能机制有：EGFR的高表达引起下游信号传导的增强；突变型EGFR受体或配体表达的增加导致EGFR的持续活化；自分泌环的作用增强；受体下调机制的破坏;异常信号传导通路的激活等。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达。对胶质细胞瘤的研究发现EGFR的高表达主要与其基因扩增有关。但有时EGFR表达水平的调节异常也存在于翻译及翻译后。EGFR在肿瘤中的高表达还可能与活化后降解减少有关，一些研究指出c-Src可通过抑制受体泛素化和内吞作用而上调EGFR水平。许多肿瘤中有突变型EGFR存在，现已发现许多种EGFR突变型。突变型EGFR的作用可能包括：具有配体非依赖型受体的细胞持续活化；由于EGFR的某些结构域缺失而导致受体下调机制的破坏；异常信号传导通路的激活；细胞凋亡的抑制等。突变体的产生是由于EGFR
