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1、培养基适用性检查报告1.试验目的：对培养基性能的质量控制，以保证微生物检验的质量。2.适用范围：适用于细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基和控制菌检查用的培养基的适用性检查。需检查的培养基包括成品培养基、由脱水培养基和按处方配制的培养基。3.试验内容：3.1.计数培养基的适用性检查3.1.1.菌种：大肠埃希菌CMCC（B）44102 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003 枯草芽孢菌CMCC（B）63501 白色念珠菌CMCC（F）98001 黑曲霉CMCC（F）980033.1.2.菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或琼脂斜面培养基中，33培养24小
2、时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂斜面培养基中，26培养48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，26培养7天，加入4ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用管口带有薄的无菌棉花吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50100cfu的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的
3、贮存期内使用。3.1.3.适应性检查3.1.3.1.细菌计数用培养基适应性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（50100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置33培养48小时，计数。用被检培养基和对照培养基（若无对照培养基可用其他厂家生产的培养基）按上述方法进行试验，并记录。试验结果报告见表1。检测日期报告日期被检培养基名称 生产厂家批号对照培养基名称生产厂家批号菌落数：单位（cfu）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌12平均12平均12平均被检培养基对照培养基平均菌落数比值菌落形态大小结果判定备注表1 细菌计数用
4、培养基适用性检查检验人： 复核人：3.1.3.1.霉菌及酵母菌计数用培养基适应性检查取白色念珠菌、黑曲霉各1ml（50100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置26培养72小时，计数。用被检培养基和对照培养基（若无对照培养基可用其他厂家生产的培养基）按上述方法进行试验，并记录。3.1.4.结果判定若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，（或与其他厂家生产培养基上菌落平均数相互比值不小于70%），且菌落形态大小与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。试验结果报告见
5、表2。表2 霉菌及酵母菌计数用培养基适用性检查检测日期报告日期被检培养基名称 生产厂家批号对照培养基名称生产厂家批号菌落数：单位（cfu）白色念珠菌黑曲霉12平均12平均被检培养基对照培养基平均菌落数比值菌落形态大小结果判定备注检验人： 复核人：3.2.控制菌（大肠埃希菌）培养基的适用性检查3.2.1.菌种：大肠埃希菌CMCC（B）44102 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003 3.2.2.菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，33培养24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10100cfu的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置
6、，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。3.2.3.适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。大肠埃希菌培养基的检测项目及所用菌株见表3。表3 大肠埃希菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查培养基特性试验菌株胆盐乳糖培养基（BL）促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（MUG）促生长能力+指示能力大肠埃希菌曙红亚甲基蓝琼脂培养基（EMB）或麦康凯琼脂培养基（MacC）促生长能力+指示能力大肠埃希菌胆盐乳糖培养基（液体培养基促生长能力检查）分别接种1ml（不大于100cfu）的大肠埃希菌于100
7、ml胆盐乳糖被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33培养18小时，与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管大肠埃希菌应生长良好。胆盐乳糖培养基（培养基抑制能力检查）接种3ml（不少于100cfu）的金黄色葡萄球菌于100ml胆盐乳糖被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33培养24小时，金黄色葡萄球菌不得生长。4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（液体培养基促生长能力、指示能力检查）分别接种0.2ml（不大于100cfu）的大肠埃希菌至5mlMUG被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）的试管内，33培养，于5小时、24小时在366nm紫外光下观
8、察，被检培养基应与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）大肠埃希菌生长情况一致，并呈现荧光。观察后，分别沿被检培养基与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）的管壁加入数滴靛基质试液，液面均应呈玫瑰红色。曙红亚甲蓝琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取大肠埃希菌各0.1ml（含菌数50100cfu）分别涂布于曙红亚甲蓝琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33培养18小时，被检培养基上大肠埃希菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。在曙红亚甲蓝琼脂培养基上，大肠埃希菌的菌落特征：紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落
9、中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。麦康凯琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取大肠埃希菌各0.1ml（含菌数50100cfu）分别涂布于麦康凯琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33培养18小时，被检培养基上大肠埃希菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。在麦康凯琼脂培养基上，大肠埃希菌的菌落特征：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。表4 大肠埃希菌检查用培养基适用性检查检测日期报告日期培养基名称胆盐乳糖培养基特性促生长能力试验菌株培养温度培养时间被检培养基厂家批号生长情况对照培养基厂家批号生长情况结果判定备注培养基名称胆盐乳糖培养基特性抑制能力试验菌株培养温度培养时间被检培养基厂家批号生长情况对照培养基厂家批号生长情况结果判定备注培养基名称MUG特性促生长能力、指示能力试验菌株培养温度培养时间被检培养基厂家批号对照培养基厂家批号生长情况5小时观察24小时观察靛基质指示被检培养基厂家对照培养基厂家结果判定备注培养基名称曙红亚甲蓝琼脂培养基特性促生长能力、指示能力试验菌株培养温度培养时间被检培养基厂家批号对照培养基厂家批号生长情况菌落大小菌落形态被检培养基厂家对照培养基厂家
