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1、实 验 一,实验一 血液学一般检查,内容 血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法） 白细胞计数（White Blood Cell Count）,实 验 一,1.血红蛋白测定-氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法,该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。,血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特定波长（540nm）和光径（比色杯内径1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液
2、制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。,原 理,Hb Hi+ CN- HiCN,K3Fe(CN)6,试剂 血红蛋白转化液（文齐氏液）： 氰化钾（KCN） 0.05g 高铁氰化钾K3Fe(CN)6 0.20g 无水磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g Triton X100 1.0ml 蒸馏水 加至1000ml,器材 1.血红蛋白吸管，5ml吸管 2.大试管 3.722分光光度计,上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的混浊,标本来源 EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血,实 验 一,操作,1.取血红蛋白转化液5.0m
3、l加入大试管中。,2.用血红蛋白吸管吸取全血20l，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至20l。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置5分钟。,3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。,4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量,实 验 一,将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=H
4、b/A)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（Hb=KA）。,附HiCN标准曲线绘制和K值计算：,实 验 一,参考值 成年男性： （120160）g/L 成年女性： （110150）g/L 新生儿： （170200）g/L 注意事项 1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。 2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。 3.722分光光度计的使用：透射比，开盖调0，闭盖调100，转化液作空白，可共用。,报告方式 吸光度： Hb：_g/L（小数点后留一位）,实 验 一,2.白细胞计数,原理 血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加
5、清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量,实 验 一,1.血细胞计数板，盖玻片 2.血红蛋白吸管（具有10l及20l刻度） 3.1ml吸管，小试管，玻棒 4.光学显微镜,器材,实 验 一,试剂 白细胞稀释液：2%冰醋酸 标本来源 EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血,实 验 一,1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。 2.加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20l，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20l处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋
6、白吸管内残余血液。 3.溶血：混匀室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。 4.冲池：用微量吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置23分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。,操作,实 验 一,5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数（压线细胞：数上不数下，数左不数右） 6.计算：白细胞/L=(N/4)1010620=(N/20)109,式中N表示四个大方格内数得的白细胞总数。 /4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液内 WBC数。 10：将一个大方格白细胞数换算为1l 内的白细
7、胞数。 106：1L=106l。 20：为血液稀释倍数。,白,白,白,白,白细胞计数区,实 验 一,实 验 一,实 验 一,实 验 一,白细胞计数操作步骤,实 验 一,报告方式 左上： 右上： 左下： 右下： 换算公式： 白细胞数（WBC）：_109/L 参考值成人： （410）109/L 新生儿：（1520）109/L,实 验 一,1、EDTA-K2抗凝全血使用前必须混匀。 2、计数盘和盖玻片在使用前需用纱布擦拭干净。 3、血红蛋白吸管内腔要干燥，否则会影响吸血量。 4、在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因 RBC残存而干扰计数使结果偏高。 5、显微镜调节（光线调暗，光圈调小），较易计数。 6、用好的器材及时清洗（Hb吸管、计数盘、盖玻片）,注意事项,实 验 一,实验报告（注意学号，报告下次实验交）,1 实验原理 2 实验步骤 3 实验结果 原始数据、最终实验数据 4 分析讨论,实 验 一,附注,1、实验操作不考核，但实验成绩占整个实验诊断成绩总分的15%，包括实验报告成绩及平常表现。 2、共4次实验，当堂的实验报告在下次的实验课交，最后一次实验不要求完成实验报告。 3、实验纪律、值日安排,
