《LC480-Software1.5中文说明书维护SOP-2009-3-10》由会员分享，可在线阅读，更多相关《LC480-Software1.5中文说明书维护SOP-2009-3-10（20页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、LightCycler480荧光定量PCR仪操作规程1 每次反应最后一步都必须做降温，降至40度，维持至少30秒。2在操作过程中，切忌戴有粉末的乳胶手套接触光学透性封板膜。3试剂加完样，封膜完毕后，在板式离心机中1500g（3000rpm）离心两分钟，以排除气泡。4先开电脑在开仪器，先关仪器再关电脑。打开总电源，打开连接LightCycler480荧光定量PCR仪的电脑，并打开LightCycler480 Software软件，然后打开LightCycler480仪器后方的电源开关，此时仪器会在与电脑软件接通后进行自检，仪器正面右边两盏桔黄色的灯会闪烁。自检完毕后，左边的灯会变绿，右边的灯仍为
2、桔黄色。这时按一下灯右边带双箭头的开关，仪器的载板器会自动伸出，将准备好的反应板放入载板器中（反应板的切角方向应与载板器的切角方向相应才能将反应板正确放入，切勿用裸手接触反应板的光学透性封板膜）。再按一下带双箭头的开关，仪器的载板器会自动缩入仪器内，此时仪器能自动检测到反应板，原来呈桔黄色的灯会变绿，LightCycler480 Software中Start Run按钮也同时变为激活状态。5设定完实验程序并编辑完样本后，点击软件中Start Run按钮，运行实验。6软件界面上出现Run Complete.标识时，说明实验运行完毕，按一下仪器上带双箭头的按钮，使载板器伸出，取下反应板，再按一下带
3、双箭头的按钮，使载板器缩回，关闭LightCycler480仪器后方的电源开关，在电脑上分析实验数据。7分析完实验数据后保存结果，打印报告，并关闭电脑，关闭总电源。实验员在离开PCR扩增区时带走用完的反应板。维护SOPLightCycler 480是一台免维护的仪器。做任何维护工作前，须确认主机电源已被关闭。预防性维护：1 检查LightCycler 480主机两侧与背后空间，确保无任何阻碍空气流通的物品，包括书本、纸张或其他任何物品；2 若主机表面和桌面有灰尘，用不起毛的软布蘸少量清水擦拭干净。清洁性维护：若有需要，可用性质温和的商品化清洁剂或70的乙醇溶液对LightCycler 480主
4、机表面、热循环96孔模块和热盖进行清洁。清洁96孔热循环模块：1. 用移液器移取125l 70乙醇溶液或异丙醇至所有孔内；2. 15分钟后，使用移液器对孔内溶液进行多次吹洗；3. 移除孔内的液体，并使96孔模块孔内自然风干；注意操作时不要让清洗液腐蚀热循环模块的涂层。LightCycler480 Software 1.5软件操作（中文版） 第一部分 基本界面及图标概述：一、 Overview界面 Exit：关闭LC480软件 Log off：从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库 Overview：点击该图标进入“Overview”界面 Navigator：点击该图标进入“Navigat
5、or”界面，可进行数据的导入导出等操作，详见。 Save：点击该图标进行保存 Export：导出当前打开的文件 Close： 关闭当前打开的文件 Print： 打印当前打开的窗口 Tools：打开“Tools”界面，可进行密码修改，建立和编辑用户，系统设置，查看数据库状态、仪器状态、滤光片组合等操作 Help：查看软件版本，操作说明书等二、New Experiment 界面 Run Module：编辑、运行或查看PCR程序及查看PCR实时数据 Subset Editor：点击该模块后可进行子集的编辑 Sample Editor：点击后进行样品信息的编辑 Analysis Module: 点击进
6、行结果分析或查看已保存的分析结果 Report Module：选择需要的内容以报告的形式给出结果 Summary Module : 查看实验的总体概况，包括实验名称，所用的程序，检测模式，滤光片组合等。概况的内容由系统自动生成三、Navigator 界面 Import：导入一个文件 Export：导出一个文件 Batch Import：导入一批数据 Batch Export：导出一批数据 New：新建一个实验或文件夹 New Folder：新建一个文件夹 Open：打开一个文件 Rename：重命名 Delete：删除选中的目标 Copy： 拷贝选中的目标Note：所有上述图标在深蓝色时为激活
7、状态，灰色时为灭活状态也就是不可用状态。各图标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备。软件操作一打开软件 打开电脑，Windows操作系统的用户名为operator，密码为LC480（区分大小写），电脑操作系统启动完毕，检查电脑右下角是否有图标。如果没有，点击桌面“Exor4 for XDMS_R”快捷方式文件。然后右键点击图标，左键点击“Show”一栏，如最后一句话显示“Exor 4 server is running”表示数据库加载成功。如果显示“Exor 4 failed to start”则表示数据库没有加载上，关闭该窗口，右键点击图标，选“Shutdown”一栏，退出数据库，重新点击
8、桌面“Exor4 for XDMS_T”文件，加载数据库。 然后点击桌面“LightCycler480 Software”快捷方式文件，运行该软件。输入用户名和密码。用户名默认为admin（管理者权限），密码为LightCycler480（区分大小写），如用户已经建立新用户名，则可以按照新用户名登录。二用户管理为了实验结果的有效管理，可以建立不同级别的用户。如: 标准用户（Standard User）、专业用户（Expert User）、管理者（Local Administrator）。一般实验室建议建立专业用户（Expert User）用户名，然后以该用户名登录软件进行实验操作。 建立新用户
9、操作：打开LightCycler480 操作软件，点击右侧按钮打开“Tools”工具栏，选择“User Access/Users and Groups”选项。在右边窗口中点击“New User”键，在右边“Enter the users full name”一栏中填写用户的全名，在“”Enter the name the user wants to log in as”一栏填写用户登录名，在“Enter the users password”一栏中输入密码（密码须含有6个以上字母，1个以上数字，其中有至少一个字母大写），在“Confirm the password”一栏中重新输入一次密码，加以
10、确认，在“Select the users role”一栏中选择用户级别，然后点击右下方“Close”按钮加以确认。 在 “Tools”工具栏中的“System Settings”界面中可以设置各用户级的权限，以及密码的时效。三仪器自检每次开机时，仪器会自动进行初始化自检程序。自检通过，仪器左侧指示灯变绿。如放置了样本，仪器右侧指示灯变绿。在自检时，不能放置反应板，否则自检无法通过。四建立实验程序 打开LightCycler480 操作软件，成功登录后点击按钮，进入New Experiment/Run Protocol程序设置界面。在“Detection Format”一栏中选择所使用的荧光检
11、测技术，可选择各类探针和染料，如常见的SYBR Green I染料、Mono Color Hydrolysis Probe单色TaqMan水解探针、Multi Color Hydrolysis Probe多色TaqMan水解探针。在进行多色荧光PCR实验时，须点击按钮选择用户所采用的荧光检测通道，点击“”确认。 在一栏中填写反应体积。在“Programs”界面中设置实验程序：在“Program Name”下方命名程序，“Cycles”一栏内填写该程序的循环数，在“Analysis Mode”一栏选择该程序的分析模式。定量分析选择“Quantification”，溶解曲线分析选择“Melting
12、 Curves”，颜色补偿实验选择“Color Compensation”。而后在“Temperature Targets”界面内设置所指定程序的内容，在“Target()”处填写目标温度，“Acquisition Mode”处选择信号采集方式，“Hold”一栏填写该温度所持续的时间，“Ramp Rate(/s)”处填写升降温速率（注：如目标温度为50以下时，为了减少硬件的损耗，必须将降温速率调至1.5/s以下）。如一个程序有多个步骤，则在Temperature Targets界面的左侧处点击，增加步骤；也可点击上下箭头调整各步骤的先后顺序。如一个实验中有多个程序，也可在“Programs”界
13、面左侧点击，增加程序，也可点击上下箭头调整各程序的先后顺序。实验程度设置完成后，在下方“Overview”界面内会自动生成温度随时间变化的温控曲线，以及估计的运行时间，绿色点表示采集荧光信号的温度和时间点。可以依照该图检查一下程度设置是否正确。设置好的实验程序可以保存成模板文件，下次使用同样的实验程序时可以调用。具体操作如下：点击按钮右侧的下拉箭头，选中“Save As Template”选项，系统默认将实验程序模板文件保存在所登录的用户名下“Templates”目录中，用户可将其存放在其下的子目录“Run Templates”下，填写该程序模板文件的名称，点击“”按钮即完成保存。调用模板程序
14、时可点击“Apply Template”按钮，从目录树中选定所要调用的模板，点击“”按钮确认。五样本设置1、样本亚组编辑：LightCycler480软件拥有一个独特的样本编辑管理功能亚组编辑（Subset Editor），即将反应板上所有的样本根据用户需要分成亚组，对亚组进行独立地分析定量。具体操作如下： 在“New Experiment”界面中，点击左侧按钮，进入Subset设置界面，点击按钮新建亚组，并给其命名。点击按钮可复制所选定的亚组，点击按钮可更改所选定亚组的名称，点击“Delete”按钮可删除所选定的亚组。设置亚组：在Subsets界面中选定要设置的亚组名，在右边反应板孔位处选定该亚组所包含的孔位，使所选定的孔位中都出现深兰色凹陷的，点击下方按钮加以确认。设置亚组可以在一块反应板上实现多个检测项目的实验，前提是这些检测项目的实验运行程序都一致（这在使用TaqMan水解探针时比较容易实现），由于各检测项目均有各自的质控对照，因而，设定亚组可以单独对各检测项目进行分析。2样本属性编辑点击New Experiment界面左侧按钮设置样本信息。在“Workflow”一栏在选择实验方案：Abs Quant：绝对定量或定性分析；Rel Quant：相对定量；Scanning：基因扫描；Color Comp：颜色补偿；Tm：熔解温度检测；Melt Geno：熔解曲线法基因
