《黄曲霉菌特异单链抗体及其基因的分离鉴定和应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《黄曲霉菌特异单链抗体及其基因的分离鉴定和应用（162页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号 华中农业大学博士学位论文 黄曲霉菌特异单链抗体及其基因的分离鉴定和应用 C h a r a c t e r i z a t i o na n d A p p l i c a t i o no f A s p e r g U l u s - S p e c i f i c S i n g l e C h a i nA n t i b o d i e sa n dT h e i rE n c o d i n gG e n e s 博士研究生： 学号 ： 指导教师 ： 指导小组： 专业：植物病理学 获得学位名称：农学博士 薛升 2 0 0 9 3 01 01 0 0 2 0 廖玉才教授 廖玉
2、才教授 李和平教授 朱旭彤教授 赵纯森副教授 瞿波副教授 研究方向：抗体基因工程 获得学位时间：2 0 1 4 年6 月 华中农业大学植物科学技术学院 二。一四年五月 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否如需保密，解密时间年月 日 是否保密 猁燃 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并
3、表示了谢意 研究生签名：嚣计 时间： 如f 中年6 月 J1 日 学位论文使用授权书 注：保密学位论文( 即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 学位论文作者签名：萏斟 导师签名：辱2 彳 签名日期：如l 呼年易月“日 签名日期： 训年易月巧日 目录 摘要i A b s t r a c t i i i 缩略词表v i 1 文献综述1 1 1 黄曲霉菌1 1 1 1 黄曲霉菌的分布和危害l 1 1 2 黄曲霉菌病害的侵染循环及发生流行2 1 1 3 黄曲霉菌的致病因子2 1 1 4 黄曲霉菌的防治4 1 1 4 1 抗病育种与抗性资源开发4 1 1 4 2 生物防治5 1 1
4、4 3 储藏期防治5 1 2 黄曲霉毒素6 1 2 1 黄曲霉毒素的来源及危害6 1 2 2 黄曲霉毒素的生物合成7 1 2 3 黄曲霉毒素的毒理学研究1 0 1 3 单克隆抗体1 2 1 3 1 免疫球蛋白概述1 2 1 3 2 单克隆抗体研究进展1 4 1 3 3 单克隆抗体的应用1 5 1 4 基因工程抗体1 7 1 4 1 基因工程概述1 7 1 4 2 双功能抗体和双特异抗体1 9 1 4 3 单链抗体表达系统1 9 1 5 噬菌体展示与重组抗体库2 1 1 5 1 丝状噬菌体介绍21 1 5 2 噬菌体展示介绍2 2 1 5 3 噬菌体抗体库介绍2 3 1 6 黄曲霉菌检测方法2
5、4 2 研究目的和意义2 6 3 黄曲霉菌特异单克隆抗体的筛选2 7 3 1 实验材料2 7 3 1 1 菌株、细胞株2 7 3 1 2 实验动物2 7 3 1 3 主要试剂和耗材2 7 3 1 4 试剂配制2 8 3 1 4 1 细胞培养有关试剂配制2 8 3 。1 4 2 抗原制各有关试剂配制一2 8 3 1 4 3 单克隆抗体纯化有关溶液配制2 9 3 1 4 4E L I S A 有关溶液配制2 9 3 1 4 5S D S P A G E 有关溶液配制2 9 3 1 5 仪器设备3 0 3 2 实验方法3 0 3 2 1 抗原制备3 0 3 2 2 动物免疫3l 3 2 3 抗血清效
6、价检测31 3 2 4 骨髓瘤细胞培养3l 3 2 5 饲养层细胞制备3 2 3 2 6 免疫脾淋巴细胞制备3 2 3 2 7 细胞融合3 2 3 2 8 杂交瘤细胞的筛选3 3 3 2 9 杂交瘤细胞亚克隆3 3 3 2 1 0 杂交瘤细胞的冻存3 3 3 2 11 杂交瘤细胞的复苏3 4 3 2 1 2 单克隆抗体的生产3 4 3 2 1 3 单克隆抗体的纯化3 4 3 2 1 4 单克隆抗体S D S P A G E 电泳检测3 4 3 2 1 5 单克隆抗体亲和力的鉴定3 5 3 3 结果与分析3 5 3 3 1 黄曲霉细胞壁蛋白制备3 5 3 3 2 免疫后抗血清滴度检测3 6 3
7、3 3 杂交瘤细胞建株3 7 3 3 4 大量生产单克隆抗体3 7 3 3 5 纯化后单克隆抗体效价测定3 8 3 4 讨论3 9 3 4 1 黄曲霉菌抗原的制备3 9 3 4 2 黄曲霉菌特异单克隆抗体的筛选4 0 4 黄曲霉菌特异单链抗体的筛选4 l 4 1 实验材料4 l 4 1 1 菌株及质粒4 1 4 1 2 实验动物4 1 4 1 3 主要试剂和耗材4 1 4 1 4 培养基及抗生素的配制4 2 4 1 5 缓冲液的配制4 2 4 1 5 1 质粒抽提和D N A 电泳缓冲液4 2 4 1 5 2 感受态制备相关缓冲液4 3 4 1 5 3 噬菌体库淘选相关缓冲液4 3 4 1 5
8、 4 蛋白表达和纯化缓冲液4 3 4 1 6 引物序列4 4 4 1 7 主要仪器设备4 4 I I 4 2 实验方法4 4 4 2 1 抗原制备4 4 4 2 2 动物免疫及多抗制备4 4 4 2 2 1 来亨母鸡免疫4 4 4 2 2 2I g Y 多克隆抗体制备4 5 4 2 3 抗血清效价检测4 5 4 2 4 单链抗体基因克隆4 5 4 2 4 1 脾脏和骨髓总R N A 提取4 5 4 2 4 2m R N A 纯化4 6 4 2 4 3 逆转录合成c D N A 4 6 4 2 4 4 抗体可变基因扩增4 7 4 2 4 5 小量构建重组噬菌粒4 7 4 2 4 6 大肠杆菌电转化感受态细胞制备4 8 4 2 4 7 连接和转化效率检测4 9 4 2 5 单链抗体基因鉴定4 9 4 2 5 1 煮沸裂解法提取质粒D N A 4 9 4 2 5 2 重组噬菌粒阳性率鉴定5 0 4 2 5
