培养基模拟灌装验证培训

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1、培养基模拟灌装验证培训,黄炼昌,培养基模拟灌装验证培训,内容 1、培养基模拟灌装的目的 2、法规要求 3、冻干产品制剂工艺的培养基灌装（最差条件） 4、方案设计 5、风险分析 6、接受标准 7、偏差调查,培养基模拟灌装验证培训,无菌工艺模拟试验定义： 无菌工艺模拟试验 Process Simulation Testing (PST) 培养基灌装 Media Fill 采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进行验证。此模式工艺称之为“培养基灌装”,培养基模拟灌装验证培训,进行培养基模拟灌装的目的： 1、验证一个无菌工艺 对无菌工艺过程无菌保证水平的综合评价（包括设备、人员、操作、灭菌过程、生产

2、环境等） 2、对无菌操作人员进行资格确认 3、确认进行重大变更后对无菌工艺的影响 4、作为问题调查的手段（全程录像） 5、综合反映生产线整估的无菌保证情况，无法体现具体某批产品或某个产品的无菌性。,培养基模拟灌装验证培训,法规要求,培养基模拟灌装验证培训,培养基模拟灌装的先决条件 洁净室/设备的验证状态确认 经过重大维修或变更后进行了生产线的运行确认或性能确认 参与培养基灌装的人员接受了培训 无菌操作 洁净室行为 培养基灌装方案 明文规定的工艺过程及最差条件,培养基模拟灌装验证培训,最差条件： 在制药工艺验证时使用“最差条件”是很有用的技术。使用“最差条件”是为了挑战工艺可能出现在日常操作边缘

3、的状况。如果在最差条件，结果是可以接受的，那么表明在正常日常条件下，系统就有更高的可靠性。最差条件并不是说要人为地创造一个可能导致环境超出允许操作条件的或可能导致系统失效的情况。,培养基模拟灌装验证培训,如何寻找最差条件：,培养基模拟灌装验证培训,如何寻找最差条件： 鱼骨图： 使用鱼骨图方法是寻找最差条件的最简洁有力的工具之一，我们可以通过人、机、料、法、环等各方面过行分析可以找到最差条件发生的具体方面。 有时我们也会鱼骨图和FMEA联合使用。,培养基模拟灌装验证培训,鱼骨图,培养基模拟灌装验证培训,最差条件：,培养基模拟灌装验证培训,普遍存在的最差条件： 一、人员： 最多的人员数量 最多的人

4、员类型（维修、QA、QC） 人员更衣后的最长洁净服、口罩、手套等 使用时间,培养基模拟灌装验证培训,二、设备： 清洗、灭菌后最长保留时间 最快的分装速度（最小的规格西林瓶）-最不易控制。 最慢的分装速度（最大的规格西林瓶）-最长的单位产品暴露时间 设备最复杂的组装方式（组合件等）,培养基模拟灌装验证培训,三、物料： 最大的容器（最长的单位产品暴露时间） 最小的容器（最快的分装速度、最不易控制。） 工器具、洁净服、手套等灭菌后最长的保留时间。 消毒剂配制后最长的保留时间。,培养基模拟灌装验证培训,四、环境： 清洁灭菌后到无菌工艺开始前的最长时间。 最长的无菌工艺持续时间（环境维持时间）,培养基模

5、拟灌装验证培训,五、操作（固有干预和纠正干预） 最大数时的纠正干预,如：倒瓶、卡瓶、卡塞、凋整针头（调整装量）、设备故障维修等。 最大数量的固有干预，如：物料转移（人员越少，对应每个人移动次数越多）、添加物料（如胶塞）、环境取样、产品转移，更换配件等。,培养基模拟灌装验证培训,五、操作（续） 生产过程的持续时间： 1、产品配制后到除菌过滤完成的时间 2、产品最长的灌装时间 3、冻干时间（模拟进出箱操作，气流运动） 4、最长开放操作的持续时间等,培养基模拟灌装验证培训,最差条件举例： 1、使用的原料、设备、器具在灭菌后于无菌工艺区保留时间超过期限。 2、超过灌装工艺所需的人员数量。 3、增加设备

6、消毒完成到开始模拟之间的时间间隔。 4、在工艺模拟实验中使用促生长的培养基或安慰剂，而不是具有抑菌性的物料。 5、在最后的生产完成后进行无菌工艺模拟试验。,培养基模拟灌装验证培训,方案设计：1、流程图：,培养基模拟灌装验证培训,方案设计： 2、培养基： 选择： 适应广谱微生物生长 （应能促进革兰阳、阴性菌；酵母菌和霉菌的生长） 较好的澄清度，较小的粘度 可以采用可除菌过滤 常用培养基3%的TSB TSA? （胰酪胨大豆肉汤培养基：浓度30mg/ml ） 某些情况下厌氧菌培养基FTM （硫乙醇酸盐培养基）,培养基模拟灌装验证培训,方案设计： 、培养条件：（两个温度段一般相差10）,培养条件： 2

7、0-25条件下培养7天（培养真菌）和在30-35条件下培养7天（培养细菌）,培养基模拟灌装验证培训,培养条件（续）： 足够的培养时间，以确保那些脆弱的或受损的微生物也能得到恢复并增殖（不少于14天） 培养期间温度不超过20-35范围。 如果用两个温度培养，从较低的温度开始，中间要观察结果。 每瓶（单元）容器在培养前和培养中间阶段都要来回翻转，这样确保容器的内表面和密封件（如胶塞）内表面跟培养基完全接触。 方案设计：,培养基模拟灌装验证培训,培养基无菌性试验： 目的：证明用于模拟无菌灌装试验的培养基是无菌的，以排除培养基无菌性对此项验证试验的影响，从而确认模拟灌装试验中的污染来源于灌装过程。 前

8、提条件： 除菌过滤前后，滤芯完整性测试结果0.332MPa。 过滤压力为0.1MPa。 过滤持续时间8h。 除菌过滤前的微生物负荷10cfu/100ml。 接受标准：培养14天无菌应合格。,培养基模拟灌装验证培训,培养基灵敏度试验： 目的：确认培养基能满足微生物生长的需要，能检出污染菌。 操作：从每批灌装好的培养基中随机抽取12支，按照中国药典无菌检查法中的培养基灵敏度检查法，分别向培养基中接入试验菌悬液（金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌），每个菌株接种两瓶灌装培养基，每瓶接种量为10100个菌。将接有上述微生物的培养基置于相应温度下培养。 接受标准：

9、每种菌株在7d内应至少有一瓶（50%）出现明显生长，否则可复试一次。如果灵敏度检查结果不合格，该批培养基灌装试验无效，须重新试验。,培养基模拟灌装验证培训,微生物侵入试验： 目的：灌入培养基的西林瓶，在正常的生产线上压塞和压盖，然后将西林瓶的密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出，培养并检查是否有微生物侵入，以确认西林瓶密封的完好性。 操作：用于密封性试验的样品100瓶与其它模拟灌装的产品在2328培养7天、3035培养7天。所有样品培养14天均应不长菌，再进行以下培养。 1、将轧盖密封性试验的样品80瓶，完全浸入大肠埃希菌Escherichia coli （106cfu/ml）菌液的容器中并加压

10、到0.050.1Mpa，浸泡4小时后取出，用乙醇（75%）消毒，并用适量的水清洗外表面3次。将得到的样品置于3035中培养14天，应无细菌生长。如果有细菌生长，需要鉴定细菌的菌属，调查是否为浸入的细菌。（使用完毕的菌液经过灭菌后弃去） 2、将轧盖密封性试验的样品10瓶，每瓶接种大肠埃希菌 Escherichia coli （10100cfu/ml），作为阳性对照，置于3035培养3天，应有明显细菌生长。,培养基模拟灌装验证培训,微生物侵入试验（续）： 3、轧盖密封性试验的样品各取10瓶，不经处理，作为阴性对照，置3035培养14天，应无菌生长。 4、培养基培养结束后营养试验：将培养结束的没有微

11、生物生长的轧盖密封性试验的样品10瓶，接种试验菌（大肠埃希菌）10100cfu/m1，置3035中培养3天，应有明显的细菌生长。 接受标准：只有前述各项均符合要求，且经菌液浸泡的样品不得长菌，挑战试验才有效。如果挑战试验中有微生物生长的现象，需要记录长菌的样品数，如果样品中出现长菌现象，需要进一步调查长菌原因，检查瓶口或胶塞是否有缺损，造成微生物侵入。如果任何挑战试验中长菌的样品，不是由于瓶口或胶塞明显的物理性缺损所致，则挑战试验失败。,培养基模拟灌装验证培训,停滞实验： 目的：表明用于培养的培养基是作用的。 操作：从每批培养结束没有染菌的培养基中随机抽取60瓶做以下试验，每10瓶分别接种10

12、0cfu/0.1ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生梭胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、枯草芽孢杆菌，接种后盖塞，封口。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌置、枯草芽孢杆菌3035培养7天，黑曲霉、白色念珠菌置2025培养7天，7天内所有接种的培养基均出现明显的微生物生长。如果停滞试验检查结果不合格，该验证无效，应重新验证。,培养基模拟灌装验证培训,其他取样试验： 1、管制注射剂瓶无菌试验：无菌操作，灌装前中后段分别取10只无菌空瓶至已灭菌的样品瓶中，加入培养基不少于100ml（培养基应能浸没管制瓶），置20-25培养7天，置30-35培养箱培养7天。 2、胶塞无菌试验：无菌操作，灌装前中后段分别取10只

13、洁净胶塞至已灭菌的样品瓶中，加入培养基100ml置30-35培养箱培养14天。,培养基模拟灌装验证培训,抑菌风险分析（一）,培养基模拟灌装验证培训,抑菌风险分析（二）,培养基模拟灌装验证培训,抑菌风险分析（三）,培养基模拟灌装验证培训,抑菌风险分析（四）,培养基模拟灌装验证培训,接受标准：摘自药品生产验证指南2003版 泊松分布：95%可信限的控制上限（B）/ 模拟分装的瓶数*100%=污染率%,培养基模拟灌装验证培训,接受标准：摘自药品生产验证指南2003版,培养基模拟灌装验证培训,接受标准：摘自EU-GMP,培养基模拟灌装验证培训,接受标准：无菌药品-药品GMP实施指南,培养基模拟灌装验证

14、培训,结果的观察： 1、应每天检查灌装产品的长菌情况并准确记录。 2、应由经过培训并有检查培养基灌装瓶污染经验的人员对样品进行逐个目视检查。 3、 当培养基灌装出现阳性结果时，不管是否符合合格标准，都必须进行调查。 4、分离到的微生物应鉴别到种。调查过程中应详细分析可能的产生阳性结果的原因。（菌种鉴定） 5、制定的CAPA需要针对污染的原因或不良无菌 操作行为。 6、对于超标的结果，应当在调查清楚原因后再次进行培养基灌装。 7、评估工艺可靠性以及上市产品可能存在的风险。,培养基模拟灌装验证培训,结果的观察：,培养基模拟灌装验证培训,注意事项： 在培养基灌装完成后，应对密封好的最终产品进行检查。

15、所有完好的灌装样品都应培养，对于与密封性无关缺陷（如外观缺陷）的灌装样品也应进行培养，不得剔除。有密封性缺陷的样品可作废品剔除，但应当记录剔除数量和原因。 在培养过程中，任何发现损坏的样品也应列入培养基灌装的批记录数据中。如果要将这类已培养的样品从最后的结果判定计算中剔除，则必需充分说明理由，并在培养基灌装报告中对偏差做出解释。假如难以判断微生物污染是由损坏引起还是本身就存在，则应进行调查以确定原因。,培养基模拟灌装验证培训,培养基灌装中止或失效： 如培养基促生长试验失败 在无菌生产区域的物理条件发生问题（如断电、高效泄漏） 灌装过程中出现一些违反规程的操作，这些操作可能造成批生产中止或报废

16、培养基灌装可能因为上述的任何一个或所有类似其他原因造成失效，这些问题可能造成灌装的中止或失效。 培养基灌装中止或失效的整台件均需要有详细的说明记录（充分说明理由的支持性文件）。,培养基模拟灌装验证培训,偏差调查内容：（至少应包括） 1、生产环境中微生物监测数据； 2、生产环境中悬浮粒子监测数据； 3、人员污染的监测数据； 4、高效过滤器的完整性检测、粒子、风速等； 5、操作间的空气流向、压差； 6、操作人员的操作方法、培训情况； 7、模拟分装过程中的异常情况； 8、无菌室生产工具及其他用品的存储状况； 9、鉴别污染微生物的种、属、以寻找污染源的线索； 10、无菌室的清洁、清洁规程的培训及执行情况；,培养基模拟灌装验证培训,偏差调查内容（续）： 11、无菌生产用设备的控制系统和监测系统的校正； 12、生产前、生产后过滤器的完整性检测结果； 13、相关产品、相关生产过程存在的问题等。,培养基模拟灌装验证培训,偏差调查（鱼骨图）： 有正