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1、城市与环境系生态学综合野外实习报告系别 城市与环境系专业生态学班级 08级 1班 学号2008140107姓名刘玉亭实习单位滨州学院实验中心 实习报告综合考虑各种因素,系领导最后决定本学期生态学08级的生态学综合实习以在学校实验室做实验为主,旨在培养学生的动手操作能力,提高学生对生态学常用实验研究方法与技术掌握的熟练程度,最终达到培养学生专业兴趣与提高专业综合素质的目的。5月29日,是生态学08级此次生态学综合实习的最后一天,也预示着此次实习的圆满结束。按照系里的安排，我们生态学08级1班于2011年5月23日至29日进行了为期一周的生态学综合实习。在此，我对这七天的实习情况做一个大体的报告。
2、5月23日，上午8：30全体同学在实验楼B7-116室集合。任加云老师为我们联系好实验室负责药品、器材和仪器的老师，给我们分配好实验室并讲解了实验药品、器材和仪器设备的使用登记情况以及注意事项。根据老师讲解的内容。按事先的分组情况，各小组负责人到实验室负责老师那里进行实验药品、器材、设备的汇报、登记并根据实验室现有药品、器材和设备的实际情况对各小组的实验方案做了相应的调整。我们第一小组在小组长曹建波的带领下对我们组未来五天的实验进行了商量和讨论，最后决定先定下“酸奶的制备”和“土壤全磷的测定”两个实验，并计划如果以上两个实验做完之后还有时间，小组成员可根据个人意愿，最好根据个人考研方向进行一些
3、相关实验的操作，熟悉一些试验流程并掌握相关的技术、技能，提高为考研复试做准备，为考研成功增加筹码。下午2:30，按照上午的计划，小组成员分工准备“酸奶的制备”实验。正好今天下午我系09级微生物实验就是制备酸奶，所以我们就跟着09级的师弟师妹一起学习了制备酸奶的流程。老师已提前准备好了鲜奶和酸奶。用酸奶成品是为了用其中的两种益生菌。我们找了一个250ml的锥形瓶，洗刷干净后在烘箱中烘干、灭菌，同时将鲜奶放入水浴锅里80恒温灭菌20min，然后将已灭菌的鲜奶倒入已灭菌的锥形瓶中，开始不要倒满，倒入一半时，加入一些酸奶，然后再用鲜奶将锥形瓶装满，注意不能留有空隙，要保证无氧条件，最后用保鲜膜封口（以
4、上操作均在无菌操作台上进行）放入28左右的恒温培养箱中培养（第二天再取出）。制备酸奶的具体实验设计方案如下：【原理】酸奶又称酸乳（yoghurt），是以牛奶为主要原料，经乳酸菌发酵而制成的一种营养丰富、风味独特、国际流行的保健饮料。用于酸奶发酵的乳酸菌主要是德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus，旧称“保加利亚乳酸菌”）和唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius subsp.thermophilus，旧称“嗜热链球菌”)，在有些酸奶中还使用另一些乳酸菌，例如嗜酸乳杆菌（L. acidophilue
5、s）或乳酸乳球菌乳脂亚种（Lactococcus lactis subsp. cremoris, 旧称“乳脂链球菌”)等。酸奶发酵中的主要生物化学变化是：乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其 pH 降至酪蛋白等电点（4.6）附近（4.04.6）从而使牛奶形成凝胶状；其次，乳酸菌还会促使部分酪蛋白降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和丁二酮等风味物质。这就是酸奶具有良好的保健作用和适合广大乳糖不耐症患者饮用的主要原因。酸奶发酵过程通常是由双菌或多菌的混合培养实现的。其中的杆菌先分解酪蛋白为氨基酸和小肽，由此促进了球菌的生长，而球菌产生的甲酸又刺激了杆菌产生大量乳酸和部分乙醛，此外球菌还产生
6、了双乙酰这类风味物质，因此，达到了稳定状态的混合发酵。【材料和器皿】1. 菌种：德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus，旧称“保加利亚乳酸菌”）和唾液链球菌嗜热亚种（Streptococcus salivarius subsp. thermophilus，旧称“嗜热链球菌”) （可用纯种，也可从名牌酸奶商品中自行分离）。2. 材料：优质全脂牛奶或奶粉（内含脂肪 28%，蛋白质27%，乳糖37，矿物质6%，水分2%），蔗糖；市售优质酸奶（1 瓶）。3. 器皿：无菌奶瓶、三角瓶或血浆瓶（250 ml），无菌移液管，培养皿，厌氧
7、罐，恒温水浴锅，恒温箱，冰箱等。【方法和步骤】1. 酸奶制作1) 配奶：在牛奶中添加6% -10% 蔗糖后搅匀。或用奶粉按1:7 比例加水配成还原奶，然后加6%10% 蔗糖后搅匀。2) 预热和均质：将原料奶加热至60左右，然后在均质机中，于810 MPa 压力下对乳进行均质处理。3) 消毒：将酸奶原料置于8590下消毒15min。4) 冷却：将消毒后的牛奶冷却至45左右。5) 接种：按5%10 %（V/V）比例将市售优质酸奶作菌种接入冷却牛奶中，充分搅匀。6) 装瓶：将上述牛奶按无菌操作灌入无菌奶瓶、三角瓶或血浆瓶中。一般每个牛奶瓶灌装量约为250g（使液面距瓶口1.5 cm）。7) 保温：将
8、接种后的牛奶置于4042的温箱中保温34 h（具体时间视凝乳速度而定)。8) 后熟：已形成凝胶态的酸奶放在4左右的低温下保持1224 h ，以使其后熟（后发酵）。9) 品味：评定酸乳质量有理化指标和微生物学指标两类。本实验中产品的质量以品尝时有良好的口感和风味为主，同时观察产品的外观，包括凝块状态、色泽洁白度、表层光洁度、无气泡和具有悦入香味等。相反，若品尝时发现有异味则说明发酵中污染了杂菌。【注意事项】1. 选择优良的酸奶作接种剂是获得实验成功的关键。2. 在酸奶制作的全过程中，必须严防杂菌污染。3. 必须选用不含抗生素的牛奶作发酵原料，否则将抑制乳酸菌的生长。4. 乳酸杆菌属和链球菌属的乳
9、酸菌一般都是耐氧性厌氧菌和兼性厌氧菌，可以在有氧条件下生长，但使用厌氧罐培养可长得更好。【结果记录】记录用市售酸奶作接种剂的自制酸奶品评结果。5月24日，上午8:30我们按照计划在实验试集合，制备土样，配制溶液（2,4二硝基酚指示剂溶液，4mol/l氢氧化钠溶液，2mol/l溶液，钼锑抗试剂，磷标准溶液），待测液制备，需要消煮，所以我们上午消煮，准备下午进行样品测定。测定土壤全磷的具体实验设计方案如下：（一） 方法原理采用HClO4H2SO4法。其方法原理是，用高氯酸分解样品，因为它既是一种强酸，又是一种强氧化剂，能氧化有机质，分解矿物质，而且高氯酸的脱水作用很强，有助于胶状硅的脱水，并能与F
10、e3+络合，在磷的比色测定中抑制了硅和铁的干扰。硫酸的存在提高了消化液的温度，同时防止消化过程中溶液蒸干，以利于消化作用的顺利进行。本法用于一般土壤样品的分解率达97%-98% ,但对红壤性土壤样品分解率只有95%左右。溶液中磷的测定采用钼锑抗比色法。（二） 仪器设备分光光度计、消化炉（三） 试剂配制1.浓硫酸 比重1.842.7072%HClO4 3.2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚指示剂溶液，溶解0.25克二硝基酚于100ml水中，变色点约为3，酸性时无色，碱性时为黄色。4.4M NaOH ：16克NaOH溶于100ml水中5.2M（1/2 H2SO4）：吸6ml H2SO4，加入80m
11、l水中，边加边搅拌冷却，加水至100ml6.钼锑抗试剂：称取酒石酸锑钾0.5克溶于100ml水中制成0.5%溶液 另取钼酸铵10克溶于450ml水中，徐徐加入153ml浓硫酸边加边搅拌，再将0.5%酒石酸锑钾溶液100ml加入到钼酸铵溶液中，最后加入至1升，充分摇匀贮于棕色瓶中，临用前，称取1.5克VC溶于100ml钼锑抗混合液中，此液的H2SO4为5.5M，钼酸铵为1%，酒石酸锑钾为0.05%，抗坏血酸为1.5%。 溶液有效期24小时。7.磷标准溶液 准确称取在105烘箱中烘干的分析纯磷酸二氢钾0.2195克，溶解于40ml水中加浓硫酸5ml转入100ml容量瓶中,加水到刻度,此溶液为500
12、ppm标液.吸取上述标液2ml定容到200ml即为5ppm标液。(四)实验步骤1.待测液的制备准确称取通过100目筛子的风干土样0.5000-1.0000g，置于100ml消化管中。在样品分解的同时做空白试验，所用试剂相同，但不加土样，同样消煮得空白消煮液。以少量水湿润后，加浓H2SO4 8ml摇匀后，再加70%-72% HClO4 10滴，摇匀，瓶口加一个小漏斗，置于电炉上加热消煮（至溶液开始转白后继续消煮）20 min。全部消煮时间为40-60min。将冷却后的消煮液倒入100ml 容量瓶中（事先盛水30-40ml），用水冲洗（少量多次）消化管，轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，加水定容。2.
13、样品测定吸取澄清滤液5ml注入50ml容量瓶中，用水冲稀至30ml。加二硝基酚指示剂2滴，滴加4mol/l NaOH溶液直至溶液变为黄色，再加2 mol/l（1/2 H2SO4） 1滴，使溶液的黄色刚刚褪去。然后加钼锑抗试剂5ml，再加水定容50ml，摇匀。30min后，在880nm波长下进行比色，以空白液的吸光度为0，读出测定液的吸收值。3.标准曲线 正确吸取5g/ml磷标准溶液0ml、1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml,分别放入50ml容量瓶加水至约30ml，再加空白试验定容后的消煮液5ml，调节PH为3.加钼锑抗试剂5ml，最后用水定容至50ml。各瓶比色液磷的浓度分别为0
14、g/ml、 0.1g/ml、 0.2g/ml、0.4g/ml、0.6g/ml、 0.8g/ml、1.0g/ml。(五) 结果计算从标准曲线上查得待测溶液的磷含量后，可按下式进行计算：土壤全磷含量（g/kg）=(cvv2) 10-3(mv1)式中，c为待测液中磷的质量浓度，mg/l；v为样品制备溶液的体积，ml；m为烘干土质量，g；v1 为吸取滤液的体积，ml；v2为显色的溶液的体积，ml。（六）注意事项1.磷钼蓝比色中酸度的控制最为重要，适宜酸度为0.450.65 M（H+）。2.室温低于20时需在25保温30分钟后测定。下午2:30，我们来到生态中心实验室进行样品测定。因为李长峰帮赵艳云老师
15、做土壤全磷测定等实验，他用我们配制的磷标准溶液作了标准曲线，所以我们只做了样品的测定，直接用他做的标准曲线进行计算。样品测定结果记录见下表：编号吸光度 0123A0.04620.10550.10920.1286由样品测定的吸光度在标准曲线（Abs=0.6557*c+0.00303,R2=0.9999）上得到各样品溶液的浓度：编号浓度（mg/l） 0123c0.06580.15630.16190.1915从标准曲线上查得待测溶液的磷含量后，可按下式进行计算：土壤全磷含量（g/kg）=(cvv2) 10-3(mv1)式中，c为待测液中磷的质量浓度，mg/l；v为样品制备溶液的体积，ml；m为烘干土质量，g；v1 为吸取滤液的体积，ml；v2为显色的溶液的体积，ml；计算结果为：编号123土壤全磷（g/kg）0.31260.32380.3830此外，今天上午我们把已发酵好的酸奶从恒温培养箱中取出，为了保证酸奶的质量，我们将酸奶放入冰箱中4冷藏8小时。下午五点左右从冰箱中取出，经老师鉴定没有问题后。我们品尝了我们亲自制备的酸奶，虽然没有放糖，但还是酸在嘴里甜在心里。今天我们刷洗了8个培养皿，2个锥形瓶，2个移
