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1、1刺五加注射液对大鼠大脑中动脉栓塞所致脑缺血损伤的保护作用作者：路志红熊利泽王强郑玉张西京【关键词】脑缺血关键词:刺五加;注射剂;脑缺血;剂量-效应关系，药物摘要:目的探讨刺五加（AS）注射液对脑缺血性损伤的保护作用及量效关系.方法 40 只雄性 SD 大鼠，随机分为四组（各组 n=10） ，即对照组和 AS-2.5，AS-5，AS-7.5 组，分别在缺血前腹腔注射生理盐水 7.5mL 和刺五加注射液2.5mL，5.0mL（均用生理盐水稀释至 7.5mL） ，7.5mL.采用颈内动脉尼龙线线栓法致大脑中动脉栓塞（120min）模型，观察再灌注后 24h 时神经功能损害并取大脑行 TTC 染色以
2、测量脑梗死容积.结果再灌注 24h 时神经功能损害评分，对照组为（2.20.8） ，明显高于各保护组:AS-2.5 组（1.30.8） 、AS-5.0 组（1.20.8） 、AS-7.5 组（1.20.6） ，P0.05.脑梗死容积对照组为（22066）mm3，明显大于各保护组AS-2.5 组为（11686）mm3，AS-5.0 组为（12179）mm3，AS-7.5 组为（10454）mm3 ，P0.05.各保护组之间神经功能损害评分和脑梗死容积无明显差别.结论刺五加注射液对短暂性局灶性脑缺血损伤呈非剂量依赖性保护作用.Keywords:acanthopanaxsenticosus;inje
3、ction;cerebralis-chemia;dose-responserelationship，drugAbstract:AIMToinvestigatetheprotectiveeffectofacan-thopanaxsenticosus（AS）injection，anintravenousdrugmadefromtraditionalChineseherb，ontransientfocalcere-bralischemicinjuryinrats.METHODSFortymaleSDratswererandomlydividedinto4groups:Controlgroup（n=1
4、0）receivednopharmacologicinterventionbutnormalsaline7.5mL，GroupAS-2.5（n=10） ，AS-5（n=10） ，AS-7.5（n=10）receivedintraperitoneallyacanthopanaxsenticosusinjec-tion2.5mL，5mL（dilutedto7.5mLwithnormalsaline）and7.5mLrespectivelyjustbeforemiddlecerebralarteryoc-clusion（MCAO）with3-0nylonmonofilamentfor120min.T
5、heneurologicaloutcomewasevaluatedat24hafterreperfu-sion.TheinfarctvolumewasthenassessedbyTTCstaining.RESULTSTheneurologicdeficitscore（NDS）ofGroupAS-2.5（1.30.8） ，GroupAS-5（1.20.8）andGroupAS-7.5（1.20.6）2at24hafterreperfusionwaslowerthanthatoftheControlgroup（2.20.8） ，P0.05.TheinfarctvolumeoftheControlg
6、roup（22066）mm3wassignificantlylargerthanthoseoftheotherthreegroupsAS-2.5:（11686）mm3，AS-5.0:（12179）mm3，AS-7.5:（10454）mm3at24hafterreperfusion.Therewasnodifferencea-mongAS-treatedgroupsforNDSandinfarctvolume.CONCLUSIONAcanthopanaxsenticosusinjectionsignificantlyreducesneurologicinjuryinducedbytransien
7、tMCAOwith-outdose-responseeffect.0 引言刺五加（acanthopanaxsenticosus，AS）注射液主要活性成分为刺五加皂甙（acanthopanaxsentico-side，ASS） ，临床初步验证对缺血性脑血管病有一定的疗效1.实验研究也证实 ASS 对犬、猫和大鼠心肌缺血再灌注损伤均有保护作用2-4.但迄今无刺五加注射液对与人类中风较为类似的大脑中动脉阻塞（middlecerebralarteryocclusion，MCAO）致大鼠脑缺血性损伤影响的研究.因此，我们观察了 AS 注射液对大鼠 MCAO 致局灶性脑缺血的保护作用.1 材料和方法1.1
8、 材料 40 只雄性 SD 大鼠 300350g（第四军医大学实验动物中心） ，随机分为 4 组:对照组（controln=10） 、AS-2.5 组（n=10） 、AS-5.0 组（n=10）和AS-7.5 组（n=10） ，分别于阻闭大脑中动脉前 ip 生理盐水 7.5mL，AS 注射液2.5mL，5.0mL（均用生理盐水稀释至 7.5mL） ，7.5mL.AS 注射液（黑龙江乌苏里江制药有限公司，批号:300416 号）.1.2 方法1.2.1 局灶性脑缺血模型术前禁食 12h，不禁水.动物用 40mLL-1 异氟醚诱导麻醉，20mLL-1 异氟醚吸入维持麻醉深度，保留自主呼吸.术中体温
9、由肛温探头连接多功能监测仪（Spacelab，USA）监测，并用烤灯维持在 37.037.5.大脑中动脉阻闭（middlecerebralarteryocclusion，MCAO）模型采用右侧颈内动脉尼龙线线栓法，根据 Tatlisumak 等5的方法，并参照我们以前的报道6-8 ，即动物麻醉后取颈正中切口，暴露右侧颈总动脉、颈外动脉及颈内动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉下方剪一切口，将一预先用乙醇灯烧成圆头的尼龙线（3-0，ETHICON，Japan）置入颈内动脉 17.5mm，直到有轻微阻力感为止.阻闭 120min 后抽出尼龙线，恢复再灌注.1.2.2 动物恢复及神经行为学评
10、估麻醉苏醒后，将动物放回鼠笼，自由饮食.脑缺血再灌注后 24h，由一不了解分组情况的观察者评估记录神经行为学评分，按Longa 等9的 6 级评分法:0 级，无功能障碍;1 级，不能伸展左侧前肢;2 级，向左侧旋转;3 级，向左侧倾倒;4 级，无自主活动伴意识抑制;5 级，死亡.1.2.3 脑梗死灶测量 24h 神经行为学评分完成后，动物用 0.2gL-1 戊巴比妥钠深麻醉后处死，迅速取出鼠脑，置于冰盐水中 10min，取冠状面均匀切成 2mm3厚脑片，迅速放入 0.2gL-1TTC 溶液（37）中染色 30min，然后用 40gL-1 甲醛缓冲液固定.24h 后用数码相机（KODAK，DC2
11、40USA）拍照，输入计算机，用图像处理软件（ADOBE，PHOTOSHOP5.0）计算梗死面积（粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区） ，各脑片梗死面积之和乘以厚度（2mm）为总的梗死容积.统计学处理:数值用 xs 表示.梗死容积用单因素方差分析方法（ANOVA）统计.神经行为学评分用 Kruskal-Wallis 方法检验.P0.05 表示统计学差异明显.2 结果2.1 神经行为学改变术后动物均存活.24h 时神经功能损害评分对照组（2.20.8）明显高于 AS-2.5 组（1.30.8，P0.05） 、AS-5.0 组（1.20.8，P0.05） 、AS-7.5 组（1.20.6，P0.
12、05） ，各处理组间神经功能损害评分无差异（Tab1）.表 1 缺血（120min）再灌注后 24h 时各组鼠神经功能损害评分略2.2 脑梗死容积再灌注 24h 时脑梗死容积，对照组为（22066）mm3，AS-2.5组为（11686）mm3，AS-5.0 组为（12179）mm3，AS-7.5 组为（10454）mm3，各处理组梗死容积均明显小于对照组（P0.05） ，而各处理组间无显著差异（Fig1）.图 1 略3 讨论我们首次应用大鼠 MCAO 模型，研究了 AS 注射液对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，结果表明腹腔注射 AS 注射液 2.5，5.0，7.5mL 可明显减少大脑梗死容积
13、，显著改善大鼠的神经功能缺陷症状.关于中药治疗脑缺血方面的研究已有很多10.AS 为 AS 科植物， 神农本草经列为上品，近年来受到国内外学者的关注.AS 注射液系 AS 的茎叶用常规方法制成的灭菌水溶液，其主要活性成分为 ASS11.AS 可以促进蛋白质、核酸及 ATP 合成，提高细胞抵御损伤的能力，在临床上被用于脑出血、脑缺血、心肌缺血、糖尿病等疾病的治疗12，13 ，亦可以提高机体对疲劳及寒冷的耐受力.动物实验表明 AS 对犬实验性心肌梗死及猫脑梗死也有防治作用2，3 ，Tian 等4证实 AS 可改善大鼠离体心脏缺血再灌后的心律失常.近年来，随着对缺血性脑损伤病理生理研究的不断深入，已
14、从分子水平上揭示了自由基在缺血细胞损伤中的重要作用14，15.中药减少自由基的报道也有很多16.实验研究证实 AS 能明显抑制机体内自由基产生，显著增加机体SOD 活性1，17 ，从而对脑缺血再灌注损伤产生明显的保护作用.同时 AS 可改善血小板凝聚功能，降低血液粘度，增加脑血流量，改善脑组织血供，从而增加脑部供氧，减轻缺血再灌注损伤.药理学研究表明 ASS 的单体 SC1，SC3，Sb 均具4有钙通道阻滞作用18，19.本研究发现 AS 注射液对大鼠局灶性脑缺血损伤也有保护作用，与以往研究结果一致，且该保护作用无明显剂量-效应关系.为 AS注射液的临床应用提供了实验依据.毒理学研究证实 AS
15、 几乎无毒性.长期给药，无明显毒性反应.小鼠急性毒性试验，皮下注射 ASS 的 LD50 为 4.75gkg-1.刺五加醇提取液按 18gkg-1（人用量60 倍） 、30gkg-1（人用量100 倍）给兔灌胃，1 次 d-1，连续 15d，灌药前后血清谷丙转氨酶、麝香草酚浊度与碘反应无显著差异，心、肝、肾、脾等实质性脏器无明显变化.可见其应用剂量安全范围宽.且其在我国北方广泛栽培，药源充足，临床可以广泛推广.总之，本研究证明 AS 注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显保护作用，且无明显剂量效应关系.参考文献:1HanLY，CaiDF.Clinicalandexperimentalstudyon
16、treatmentofacutecerebralinfarctionwithacanthopanaxinjectionJ.ZhongguoZhongxiyiJieheZazhi（ChinJIntegTradWestMed） ，1998;18（8）:472-474.2SuiDY，LuZZ，MaLN，FanZG.Effectsoftheleavesofacan-thopanaxsenticosusharmsonmyocardialinfarctsizeinacuteis-chemicdogsJ.ZhongguoZhongyaoZazhi（ChinJChinMatMed） ，1994;19（12）:746-747.3HibasamiH，FujikawaT，TakedaH，NishibeS，SatohT，Fuji-sawaT，NakashimaK.InductionofapoptosisbyAca
